第十七章流式細胞儀分析技術及應用(完整版)
【正文】 （三）儀器操作的質(zhì)控 ? 同型對照：即免疫熒光標記中的陰性對照，選用相同源性的 未標記單抗 作為對照調(diào)整和設置電壓，以保證特異性。 5. FCM分析中有哪些數(shù)據(jù)顯示方式，如何解讀結果及其設門分析的意義？ 6. 如何進行 FCM分析檢測樣品的制備？ 7. 流式細胞分析前如何驗證儀器工作狀態(tài)，采用何種校正物？ 8. 流式細胞免疫分析的質(zhì)量控制包括哪些方面？ 9. 流式細胞術有哪些臨床應用價值？ 10. 流式細胞儀分析中常見的熒光素有那些？他們的特性如何？ 小 結 ?流式細胞術（ FCM）是在保持細胞及細胞器或微粒的結構及功能不被破壞的狀態(tài)下，從分子水平上獲取多種信號實現(xiàn)對單個細胞進行定量分析或純化分選。 ?同型對照為免疫熒光標記中的陰性對照，可使熒光標記單抗的信號保持其特異性。 （四）免疫檢測的質(zhì)控 流式細胞術目前已廣泛地被應用于免疫學基礎研究和逐步進入臨床應用各方面，用流式細胞儀對細胞表面的抗原成分進行標記分析，可區(qū)別多種細胞的特性，為細胞免疫的研究增加了有效的手段和幫助。 ? 樣本制備 ? 標記染色 ? 液相芯片技術 ? 質(zhì)量控制 第四節(jié) 流式細胞儀免疫分析的技術要求 ?外周血淋巴細胞樣品的制備 分離單個核細胞 ?培養(yǎng)細胞的樣品制備 蛋白酶消化 機械吹打 使貼壁細胞脫落 洗滌 尼龍網(wǎng)過濾 單細胞懸液 一、免疫檢測樣品制備 ?新鮮實體組織單細胞懸液的制備 ? 機械法 ? 酶處理法 ? 化學試劑處理法 ? 表面活性劑處理法 ?單細胞懸液的保存 ? 深低溫保存法（一年） ? 乙醇或甲醇保存法（ 2周） ? 甲醛或多聚甲醛保存法（ 2月） 適用條件 : ? 有較高的量子產(chǎn)額和消光系數(shù) ? 對 488nm的激發(fā)光波長有較強的吸收 ? 發(fā)射光波長與激發(fā)光波長間有較大的波長差 ? 易與標記單抗結合而不影響抗體的特異性 二、常用的熒光染料與標記染色 FITC Texas red PEcy5 FL1 FL2 FL3 FL4 激光 細胞懸液 異硫氰酸熒光素 得州紅 能量傳遞復合染料 藻膽蛋白類 （一）幾種常見的熒光染料 名稱 染料 激發(fā)波長 熒光顏色 溶解性 對 PH敏感性 特點 異硫氰酸熒光素 FITC 488 綠 525 易 敏感 易溶于水，與抗體結合不影響特異性 得州紅 Texas red 568 紅 615 不易 不敏感 穩(wěn)定，偶聯(lián)后量子產(chǎn)額低 藻紅蛋白 PE 488 橙 575 易 不敏感 具較多發(fā)光基團，消光系數(shù)和量子產(chǎn)額高 藻青蛋白 PC 488 別藻青蛋白 APC 633 紅 670 能量傳遞復合染料 PEcy5 488 紅 670 易 不敏感 減少交叉，成本高 常用的幾類熒光染料 用化學法將兩種不同激發(fā)波長的染料結合在一起，在 488nm激發(fā)光照射下，通過一個熒光染料被激發(fā)后產(chǎn)生的發(fā)射波長再激發(fā)另一熒光染料產(chǎn)生熒光信號，從而檢測到該特定熒光信號。 ? 等高圖上每一條連續(xù)曲
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