【正文】 A 1999, 96:1358313588. [7] Goodman R N, Novacky A J. The hypersensitive reaction in plants to Pathogenes [M]. APS Press, 1994. [8] Fradin E F, Zhang Z, Juarez Ayala J C, Castroverde C D, Nazar R N, Robb J, Liu C M, Thomma B P. Geic dissection of Verticillium wilt resistance mediated by tomato Ve1[J]. Plant Physiol, 2020, 150: 320332. [9] Expression of RPS4 in tobacco induces an AvrRps4independent HR that requires EDS1, SGT1 and HSP90 [J]. Plant Science, 2020, 10: 213224. [10] Fei Gao, Xiao Meishu, Mohammad, Babar Ali, Susanne Howard, Nan Li, Patrick Winterhagen, Wenping Qiu, Walter Gassmann. A functional ortholog is differentially regulated in powdery mildew resistant and susceptible grapevines and plements an Arabidopsis EDS1 mutant [J]. Planta, 2020, 231:10371047. [11] Feys B J, Moisan L J, Newman M A, and Parker J E. Direct interaction between the Arabidopsis disease resistance signaling proteins, EDS1 and PAD4[J]. EMBO, 2020, 20:54005411. [12] Rust233。 GbEDS1 與 毛 果楊和葡萄的 EDS1基因的同源性較高，分別為 64%和 %。 GbEDS1 的信號(hào)肽分析 使用 SignalP信號(hào)肽預(yù)測工具 該基因無信號(hào)肽序列 ，利用隱馬爾可夫 模型（ hidden markov models, HMM）算法 ， 分析該基因同樣無信號(hào)肽序列（圖 5）。 將陽性克隆的測序結(jié)果與 NCBI 數(shù)據(jù)庫做 BlastN 比對(duì)，結(jié)果表明所獲片段與楊樹和葡萄 EDS1 同源性分別為 64%和%，初步推斷此 cDNA 片段是棉花 GbEDS1 基因編碼區(qū)的部分序列。紫外燈下觀察電泳結(jié)果。 試驗(yàn)方法 棉花幼苗采用無菌培養(yǎng)。 陳捷胤 , 2020。棉花黃萎?。?Verticillium wilt）是一種土傳真菌性病害，由于其寄主廣泛、土壤傳播快、抗逆性強(qiáng)和變異性大等特點(diǎn)，已經(jīng)成為棉花生產(chǎn)上第一大病害 [2]。 GbEDS1。 寫作能力 16 條理清楚，層次分明，說理透徹，文筆流暢，表格、繪圖準(zhǔn)確規(guī)范，中外文摘要簡明扼要，語句通順，語法正確，符合科技寫作規(guī)范。 論文寫作格式規(guī)范，條理清晰，層次分明，數(shù)據(jù)可靠，結(jié)果分析透徹，文獻(xiàn)參考得當(dāng)，符合一般科技論文寫作要求。 ：整理實(shí)驗(yàn)材料，撰寫論文，準(zhǔn)備答辯。 a)棉花總 RNA 的提取與 cDNA 的合成； b) GbEDS1 基因的克隆和序列分析。 20 世紀(jì) 70 年代以來，隨著植物基因工程技術(shù)的發(fā)展，應(yīng)用遺傳轉(zhuǎn)化的方法能夠打破物種之間的生殖隔離障礙，而且可以獲得生物的定向變異、提高育種的目的性和可操作性，為創(chuàng)造新的生命類型開拓了無限廣闊的前景。另外，從海島棉中克隆到了多聚半乳糖醛酸酶 (PGIPs)基因，這是從棉屬植物中克隆的第一個(gè) PGIP 基因。 陳捷胤 , 2020。棉花黃萎?。?Verticillium wilt）是一種土傳真菌性病害，由于其寄主廣泛、土壤傳播快、抗逆性強(qiáng)和變異性大等特點(diǎn)，已經(jīng)成為棉花生產(chǎn)上第一大病害 [2]。 專家意見： 專家簽字： 年 月 日 學(xué)院意見 : 院長： 年 月 日 農(nóng) 學(xué)院 農(nóng)學(xué) 專業(yè) 劉通 學(xué)生： 現(xiàn)把 20202020 學(xué)年，第 二 學(xué)期的畢業(yè)論文 安排下達(dá)給你，你本學(xué)期承擔(dān)的畢業(yè)論文任務(wù)如下： 依據(jù)本任務(wù)書中論文題目、目的意義、可行性分析的內(nèi)容完成開題報(bào)告。 預(yù)期結(jié)果 獲得 GbEDS1 基因 cDNA 全長 2190bp，開放閱讀框長 1848bp。因此，培育抗黃萎病棉花品種，是當(dāng)前棉花育種迫切需要解決的問題。同時(shí)課題組成員 熟練掌握分子生物學(xué)理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)、生物信息學(xué)的應(yīng)用 因此，具備開展基因克隆技術(shù)和條件。 ： 設(shè)計(jì)并合成相關(guān)引物，擴(kuò)增棉花相關(guān)基因 GbEDS1 及全長ORF，克隆并測序 。 教師簽字： 2020 年 5 月 4 日 河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 本科畢業(yè)論文開題報(bào)告 題 目 ： 海島棉抗黃萎病相關(guān)基因 GbEDS1 的克 隆與生物信息學(xué) 分析 學(xué) 院： 農(nóng)學(xué)院 學(xué)生姓名： 劉通 專 業(yè)： 農(nóng)學(xué) 班級(jí)學(xué)號(hào)： 2020014010216 指導(dǎo)教師姓名： 張艷 指導(dǎo)教師職稱 ： 講師 2020 年 6 月 5 日 學(xué)生姓名 劉通 專業(yè)班級(jí) 農(nóng)學(xué) 0902 學(xué) 號(hào) 2020014010216 指導(dǎo)教師 張艷 職 稱 講師 所在學(xué)院 農(nóng)學(xué)院 論文名稱 海島棉抗黃萎病相關(guān)基因 GbEDS1 的克隆與生物信息學(xué)分析 選題依據(jù) ： 理論依據(jù) 本研究根據(jù)不同物種的 EDS1 核酸保守區(qū)域設(shè)計(jì)簡并引物，利用 RTPCR 和 RACE技術(shù)從海島棉克隆抗黃萎病相關(guān)基因 EDS1 的 cDNA 及開放閱讀框序列（ Open reading frame， ORF） ，并利用生物信息學(xué)軟件分析序列特征特性。 因此，關(guān)于 EDS1 的研究對(duì)于解決植物致病和抗病機(jī)制、進(jìn)行品種改良和針對(duì)分子靶標(biāo)進(jìn)行新農(nóng)藥的開發(fā)備受廣泛的關(guān)注。rucci C, Aviv D H, Holt B F, Dangl J L, and Parker J E. The disease resistance signaling ponents EDS1 and PAD4 are essential regulators of the cell death pathway controlled by LSD1 in Arabidopsis [J]. Plant Cell, 2020, 13: 22112224. 文獻(xiàn)綜述： 棉花黃萎病是一種土傳的維管束真菌病害，落葉型菌系致病危害性強(qiáng)、在土壤內(nèi)難以根除，所以分離構(gòu)建抗黃萎病基因和培育轉(zhuǎn)基因抗黃萎病棉花就顯得尤為迫切。王志興、張寶紅等分別將 GO 基因?qū)朊藁?，獲得對(duì)黃萎病抗性明顯提高的棉花株系 [6, 7]。 (2) 基因的生物信息學(xué)分析，主要包括以下內(nèi)容： a) 分析基因編碼蛋白質(zhì)的氨基酸序列分析； b) 對(duì)基因信號(hào)肽及跨膜域的預(yù)測； c) 蛋白質(zhì)模體分析； d) 亞細(xì)胞定位； e) 序列同源性分析。 ： 提取棉花總 RNA，獲得質(zhì)量較高的 RNA，進(jìn)行 cDNA 的片段合成 。學(xué)習(xí)態(tài)度端正，具有較為扎實(shí)的生物科學(xué)基礎(chǔ)理論和專業(yè)知識(shí)。 論文難度 及工作量 14 難度較大，工 作量大。 GbEDS1 基因核酸序列與毛果楊EDS1(XM002322106）具有 64%的 同源性，該基因內(nèi)部無信號(hào)肽結(jié)構(gòu)。 Clone。因此 ，關(guān)于 EDS1 的研究對(duì)于解決植物致病和抗病機(jī)制、進(jìn)行品種改良和針對(duì)分子靶標(biāo)進(jìn)行新農(nóng)藥的開發(fā)備受廣泛的關(guān)注。 大腸桿菌 DH5α 感受態(tài)細(xì)胞、克隆載體 pMD19T、 RNA 提取試劑、 T4DNA 連接酶、限制性內(nèi)切酶、 dNTP、 TaqDNA 聚合酶、 ExTaqDNA 聚合酶、 LATaqDNA 聚合酶、 DNaseI、 RNaseI 均為 TakaRa 寶生物（大連）有限公司產(chǎn)品。 棉幼苗總 RNA 的提取與 cDNA 的合成 棉幼苗高質(zhì)量總 RNA 的提取采用北京奧萊博生物技術(shù)有限公司的植物 RNA 提 取試劑盒，嚴(yán)格按照說明書步驟操作。 2 結(jié)果與分析 棉花總 RNA 的提取 %瓊脂糖凝 膠電泳檢測棉花總 RNA的完整性：電泳圖譜呈現(xiàn)了典型的 28S、 18S RNA帶型，且無明顯的拖尾現(xiàn)象，比例約為 2:1(圖 1），表明提取的 RN