微生物學(xué)實驗[最終定稿]-文庫吧在線文庫
【正文】 標(biāo)準(zhǔn)曲線。將一定量的細菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細胞要經(jīng)歷延遲期，對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/。本操作步驟也可用簡便的方法代替：1．~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調(diào)零點，測定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。無故一次不到扣除1分。每次實驗完成后，清潔試驗臺，各種物品放回原位。（2）、掌握顯微鏡（油鏡）保護方法血清對倍稀釋法（1）、用生理鹽水將血清進行對倍稀釋，終濃度達到1/ 1/ 1 /8三個稀釋度。（3）、無菌操作正確。注：經(jīng)一次考核不及格者，可在全班同學(xué)考核結(jié)束后，允許補考一次。（1）分辨力和數(shù)值孔徑分辨力用D表示，D=(λ/)=nSin(α/2)；λ為入射光波長；n為介質(zhì)折射率。細菌細胞小而透明，在普通光學(xué)顯微鏡下不易識別，必須對它們進行染色。掌握觀察酵母菌和接合菌個體形態(tài)的制片方法。四、作業(yè)畫出供試菌典型結(jié)構(gòu)（不是在一個視野可全部看到），并注明放大倍數(shù)和名稱。四、作業(yè)出供試菌的形態(tài)并注明各部分的名稱。三、實驗器材試劑：馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂，營養(yǎng)瓊脂、淀粉等。： 五、作業(yè)？ ？ ？實驗六 微生物的分離培養(yǎng)和接種方法一、實驗?zāi)康恼莆障♂尫蛛x和平板劃線獲得微生物純種的方法學(xué)會微生物接種技術(shù)二、原理從混雜微生物群體中獲得只含某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離純化。微生物的接種（1）斜面接種五步曲： （2）培養(yǎng)皿接種：（霉菌形態(tài)觀察及鑒定用）倒平板—接種（單/三點接）—接種環(huán)滅菌五、作業(yè)題為什么用稀釋法和平板劃線法能獲得微生物純種？霉菌平板接種為什么要使平板倒置？要求根據(jù)實驗結(jié)果寫一篇論文，字?jǐn)?shù)在2000字左右。器皿：三角瓶、移液管、試管、培養(yǎng)皿、玻璃刮鏟、酒精燈、接種環(huán)等。四、實驗方法與步驟馬鈴薯削皮——切塊——稱量——加水煮沸——過濾——往濾液中加葡萄糖、瓊脂粉等——煮沸——分裝——加棉塞——包扎——滅菌（濕熱）。加之實驗和研究目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異。二、實驗材料實驗菌種灰綠曲霉，黑曲霉，黃曲霉、青霉等。注:亮的區(qū)域為液泡，看不到細胞核，核須染色才可見到。（2）區(qū)別營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲、孢子絲 、孢子絲的活體觀察將培養(yǎng)皿蓋打開，選擇菌絲和孢子絲生長較薄的部位，直接用低倍鏡和高倍鏡觀察?？偭鞒蹋喊惭b—調(diào)光源—調(diào)目鏡—調(diào)聚光器—鏡檢—擦鏡頭——復(fù)原—登記。第五篇：微生物學(xué)實驗教案實驗一 顯微鏡的構(gòu)造和使用方法一、實驗?zāi)康募耙?二、原 理微生物最顯著的特點是個體微小，必須借助顯微鏡才能觀察它們的個體形態(tài)和細胞構(gòu)造，熟悉顯微鏡和掌握其操作技術(shù)是研究微生物不可缺少的手段。（2）、正確描述液體培養(yǎng)基中的細菌生長情況。（3）、無菌操作正確。三、微生物學(xué)實驗成績評定基礎(chǔ)和綜合實驗80%每次實驗5分，其中實驗操作3分，實驗報告2分實驗考試10%實驗理論和實驗操作各為5分自主設(shè)計實驗10%包括實驗設(shè)計、實驗操作、實驗結(jié)果、匯報交流，共10分第三篇：微生物學(xué)實驗考核辦法本科微生物學(xué)實驗考核辦法考核方式：按學(xué)號順序逐一進場應(yīng)考。實驗過程中，嚴(yán)格按正確方法操作實驗儀器。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測定的準(zhǔn)確度愈高。2．接種(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶內(nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無菌大試管中。用于測定細菌細胞數(shù)量的方法已在上述實驗作了介紹。3．根據(jù)所測得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。（四）操作步驟1．標(biāo)準(zhǔn)曲線制作（1）編號 取無菌試管7支，分別用記號筆將試管編號為7。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時，菌體計數(shù)可采用血細胞計數(shù)板計數(shù)，平板菌落計數(shù)或細胞干重測定等方法。，如果過少菌液不易涂布開，過多則在涂布完后或在培養(yǎng)時菌液仍會在平板表面流動，不易形成單菌落。5．計數(shù)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進行計算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)5一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適?！溆嘁来晤愅?，整個過程如圖153所示。(稀釋度)各3套。但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個細胞，所以，長成的一個單菌落也可來自樣品中的2～3或更多個細胞。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強弱適當(dāng)，對于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計數(shù)室方格線，或只見豎線或只見橫線。B（個）同理，如果是16個中方格的計數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/516104B=32000A另外兩種計菌器的使用方法可參看各廠商的說明書。（二）基本原理顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計菌器)，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。第一篇：微生物學(xué)實驗細菌群體生長表現(xiàn)為細胞數(shù)目的增加或細胞物質(zhì)的增加。目前國內(nèi)外常用的計菌器有：血細胞計數(shù)板、PeteroffHauser計菌器以及Hawksley計菌器等，它們都可用于酵母、細菌、霉菌孢子等懸液的計數(shù)，基本原理相同。用血細胞計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)是一種常用的微生物計數(shù)方法。B（個）（三）器材1．菌種 釀酒酵母2．儀器或其他用具 血細胞計數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無菌毛細滴管。
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