【正文】 照品小點(diǎn)樣量（ μl） （熒光強(qiáng)度）積分值（ A n=2 ） V2對(duì)照品大點(diǎn)樣量（ μl ） A2對(duì)照品大點(diǎn)樣（熒光強(qiáng)度） A被測成分吸收度（熒光強(qiáng)度） 積分值（ A n=2） 積分值（ A n=2） C對(duì)照液的濃度（ mg/ml） __ 五、應(yīng)用實(shí)例 九分散是由馬錢子粉、麻黃、乳香和沒藥等制成。 根據(jù)對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線性質(zhì)的不同，外標(biāo)法又分為外標(biāo)一點(diǎn)法和外標(biāo)兩點(diǎn)法。測定時(shí)，樣品波長（ λs ）和參比波長（ λR ）依次掃描斑點(diǎn)，所測吸收度為Δ A=Aλs － Aλ R 樣品波長（ λs ）：即被測成分的 λmax 參比波長（ λR ）：即被測成分的 λmin 或此波長處無吸收。該法又可采用反射法或透射法測定。 （原計(jì)算分光光度法取消） 第四節(jié) 薄層掃描法 （ Thin Layer Chromatography Scan TLCS ） 一、定義 薄層掃描法（ TLCS）系指用一定波長的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中有紫外或可見吸收的斑點(diǎn)或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品定性定量分析的方法。 30分鐘后，停止加熱，放臵 15分鐘以上，讀取二甲苯的容積。 取供試品適量（ 約相當(dāng)于揮發(fā)油 ～ ） ， 稱重 （ 準(zhǔn)至 ） ， 臵燒瓶中 ， 加水 300ml～ 500ml（ 或適量 ） 與玻璃珠數(shù)粒 ， 振搖混合后 ， 連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管 。其減失重量即為揮發(fā)性醚浸出物的重量（ m1m2）。 按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法測定 。 供試品需粉碎 ， 使能通過二號(hào)篩 ， 并混合均勻 。 《 中國藥典 》 中藥制劑含量測定方法概況見下表 。 由于中藥制劑組成復(fù)雜 ， 儀器分析法更為常用 ?！?中國藥典 》 收載的中成藥浸出物測定品種及其規(guī)定見表 418。 、 乙醇浸出物的測定 照水溶性浸出物測定法測定 。 取供試品（過四號(hào)篩） 2~5g，臵五氧化二磷干燥器中，干燥 12小時(shí)，精密稱定重量（ ms） ,臵索氏提取器中，加乙醚適量，除另有規(guī)定外，加熱回流提取 8小時(shí)，取乙醚液，臵干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，放臵，揮去乙醚，殘?jiān)Z五氧化二磷干燥器中，干燥 18小時(shí)，精密稱定（ m1），緩緩加熱至 105℃ ，并于 105℃ 干燥至恒重（ m2）。 本法適用于測定相對(duì)密度在 。將燒瓶內(nèi)容物加熱至沸，并繼續(xù)蒸餾，其速度以保持冷凝管的中部呈冷卻狀態(tài)為度。 主要用于 Vis,需用對(duì)照品。 （ 1）吸收法 適用于有紫外（可見）吸收的成分，較常用。該法可消除背景干擾，對(duì)玻板和斑點(diǎn)的質(zhì)量要求不高，故較常用。 外標(biāo)法系將一定量的供試品溶液和對(duì)照品溶液分別點(diǎn)加在同一塊薄層板上，展開，顯色，定位，掃描被測成分和對(duì)照品斑點(diǎn)，測得相應(yīng)的吸收度或熒光強(qiáng)度積分值，根據(jù)定量關(guān)系，計(jì)算出被測成分的含量。 （ 6）掃描 應(yīng) 沿展開方向 掃描， 不得橫向 掃描。 測定法 吸取上述兩種溶液各 5μ l，分別點(diǎn)于同一硅膠 GF254薄層板上，以甲苯 丙酮 乙醇 濃氨試液。 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成每 1ml 含 ，作為對(duì)照品溶液。 特別適合中藥的定性定量分析，《中國藥典》中大多 數(shù)中成藥的含量測定采用此法。如果測得理論板數(shù)低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最 小理論板數(shù)，應(yīng)改變色 譜柱的某些條件（如柱 長、載體性能、色譜柱 充填 的優(yōu)劣等），使 理論板數(shù)達(dá)到要求。 將上述兩種溶液分別注入色譜儀，記錄色譜圖，按下式計(jì)算被測成分的含量。 【解答】 ①采用的是外標(biāo)法還是內(nèi)標(biāo)法？ ②流動(dòng)相中為什么要加入少量磷酸？ ③計(jì)算黃芩苷的含量 （保留兩位有效數(shù)字）。 （ 2）對(duì)照品溶液的制備 取厚樸酚、和厚樸酚對(duì)照品適量，精密稱定，分別加甲醇制成每 1ml含厚樸酚 、和厚樸酚 ，搖勻，即得。然后將流動(dòng)相接入色譜柱充分沖洗平衡，待基線穩(wěn)定后方可進(jìn)樣。在主要用于中藥制劑中揮發(fā)油及其他揮發(fā)性組分的含量測定，還可用于水分、乙醇量的測定。 ②色譜柱 ：玻璃柱和不銹鋼柱。氣固吸附 GC 例如甲（乙）醇量、水分的測定。②加入量應(yīng)接近于被測成分。 解答問題 ①本法屬于氣液分配 GC還是氣固吸附 GC？ ②使用哪種載氣？哪種檢測器？ ③采用的是外標(biāo)法還是內(nèi)標(biāo)法？ ④求算樟腦的含量。 理論塔板數(shù)按樟腦峰計(jì)算應(yīng)不低于 2023， 樟腦峰與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于 2。 內(nèi)標(biāo)法測定時(shí)，同一檢測器對(duì)不同（被測成分和內(nèi)標(biāo)物）具有不同的響應(yīng)值，故不能用峰面積直接計(jì)算的被測成分的含量，要引入校正因子。用于農(nóng)殘測定。 外標(biāo)法 少用，因?yàn)?GC進(jìn)樣量小，造成的誤差較大。否則 C18鏈的隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致組分保留值的改變，造成色譜系統(tǒng)的不穩(wěn)定。 混合對(duì)照品 . 和厚樸酚 厚樸酚 樣品 【解答】 ①采用的是外標(biāo)法還是內(nèi)標(biāo)法？②為什么要酸化樣品溶液，再用氯仿萃??？③計(jì)算厚樸的含量 （保留兩位有效字）。g/ml） 10 50ml 1045mg = 3 本品由蒼術(shù)、陳皮、厚樸（姜制）、白芷等十味中藥制成的液體制劑，每支裝 10ml（標(biāo)示裝量）。 （ 2）對(duì)照品溶液制備 精密稱取在 60℃ 減壓干燥 4小時(shí)的黃芩苷對(duì)照品適量，以甲醇溶解配成每 1ml中含 。 （ 4）拖尾因子（ T） 考察色譜峰的對(duì)稱性，保證測量的 準(zhǔn)確度 。其中分離度和重復(fù)性更具實(shí)用意義。 ②橙皮苷與 AlCl3反應(yīng)顯色，在 330nm紫外光下發(fā)射較強(qiáng)的綠色熒光（波長： 500nm）。 解答問題 ①采用外標(biāo)一點(diǎn)法還是外標(biāo)兩點(diǎn)法？ ②采用什么方法顯色定位？ ③計(jì)算每包藥品中馬錢子的含量。 供試品溶液的制備 取本品 10包，混合研勻。 外標(biāo)一點(diǎn)法的直線方程： C = F A F 為斜率 外標(biāo)兩點(diǎn)法的直線方程： 21 FAFC ?? 12121 AACCF???12