原核表達調控ppt課件-文庫吧在線文庫
【正文】 ? 分析前導序列發(fā)現(xiàn) ， 它包括起始密碼子 AUG和終止密碼子 UGA，能產生一個含有 14個氨基酸的多肽 ， 這個假設的多肽被稱為前導肽 。 B C后是 poly(U)，即 C實際是一個終止子，如果轉錄 mRNA時它形成發(fā)夾結構，就能使 RNA聚合酶停止轉錄而從 mRNA上脫離下來。 Trp合成酶類的量與 Trp濃度呈負相關，這種調控現(xiàn)象與 Trp操縱子特殊的結構有關。 b. 低色氨酸條件下，核糖體停在色氨酸密碼子附近，序列 1被核糖體覆蓋，序列 2和 3配對，因此阻止了 4之間形成轉錄終止發(fā)夾。 ? 那么為什么還要有阻遏體系呢？ 沒有阻遏體系，只有弱化，似乎也可以調節(jié)色氨酸酶系的合成。 半乳糖操縱子的結構及特點 激酶 K UDP轉移酶 T 差向異構酶 E 半乳糖 半乳糖 +葡萄糖 半乳糖 1磷酸 乳糖 UDP葡萄糖 UDP半乳糖 葡萄糖 UDP轉移酶 T 細胞壁 現(xiàn)在設想只有 galP1一個啟動子，那么由于這個啟動子的活性依賴于 cAMPCRP，當培養(yǎng)基中有葡萄糖存在時就不能合成異構酶。 AraC蛋白的正、負調節(jié)作用 araBAD mRNA的合成需要一個有功能的 AraC蛋白，這個蛋白與誘導物阿拉伯糖結合后才誘導araBAD基因表達。 ? 沒有葡萄糖，也沒有阿拉伯糖，因為沒有誘導物，盡管有cAMPCAP與操縱區(qū)位點相結合， AraC蛋白仍以 Pr形式為主，無法與操縱區(qū) B位點相結合，無 araBAD mRNA轉錄。在不同的生活環(huán)境中，不同的啟動子精密地調節(jié)基因的表達量，對維持細菌的生存起著非常重要的作用。 DNA嚴重受損時， RecA與缺口處單鏈 DNA結合，被激活成蛋白酶，將 LexA切割成沒有阻遏活性的兩個片段，導致 SOS體系高效表達， DNA得到修復。 ? 在沒有阿拉伯糖時， Pr形式占優(yōu)勢；一旦有阿拉伯糖存在，它就能夠與 AraC蛋白結合，使平衡趨向于 Pi形式。在大腸桿菌中阿拉伯糖的降解需要 3個基因： araB、araA和 araD，分別編碼 3個酶： araB基因編碼核酮糖激酶 (ribulokinase)， araA編碼 L阿拉伯糖異構酶(Larabinose isomerase)， araD編碼 L核酮糖 5磷酸 4差向異構酶 (Lribulose5phosphate4epimerase)。 細菌通過弱化作用彌補阻遏作用的不足，因為阻遏作用只能使轉錄不起始，而對于已經起始的轉錄，只能通過弱化作用使之中途停頓下來。 阻遏與弱化作用的協(xié)調 ? 細菌中為什么需要弱化子系統(tǒng)呢？ 一種可能是阻遏物從有活性向無活性的轉變速度較慢，需要一個能更快地做出反應的系統(tǒng)，以保持培養(yǎng)基中適當?shù)纳彼崴健? 缺乏 Trp時，弱化子允許所有的聚合酶通過。低濃度色氨酸時則不能形成轉錄終止信號，轉錄繼續(xù)。編碼先導肽的第 11位是相鄰的兩個 Trp密碼子。 這個區(qū)域被稱為 弱化子 ， 該區(qū) mRNA可通過自我配對形成莖 環(huán)結構 。如果 trp操縱子只受 trpR編碼的阻遏物調控，那么在缺乏或存在色氨酸時， trpR突變使 trp操縱子表達的酶量應該是相同的。 后者位于大腸桿菌染色體圖上 25分鐘處 ， 而前者則位于 90分鐘處 。
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