【正文】 。 常用的核酸分子雜交技術(shù)有：原位雜交、斑點(diǎn)雜交、 Southern雜交及 Northern 雜交等。結(jié)合酶則是由酶蛋白和輔助因子兩部分構(gòu)成，酶蛋白部分主要與酶的底物特異性有關(guān)，輔助因子則與酶的催化活性有關(guān)。脂溶性維生素有 VitA、VitD、 VitE和 VitK四種；水溶性維生素有 VitB1， VitB2， VitPP， VitB6， VitB12， VitC，泛酸，生物素，葉酸等。 ：泛酸（遍多酸）在體內(nèi)參與構(gòu)成輔酶 A（ CoA）。其中， 539。 2．具有高度的底物特異性：一種酶只作用于一種或一類化合物，以促進(jìn)一定的化學(xué)變化，生成一定的產(chǎn)物，這 種現(xiàn)象稱為酶作用的特異性。 八、酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)： 酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)主要研究酶催化的反應(yīng)速度以及影響反應(yīng)速度的各 種因素。 ② 當(dāng) k1k+2時(shí)， Km=k1/k+1=Ks。 2．酶濃度對(duì)反應(yīng)速度的影響：當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)中底物的濃度足夠大時(shí)，酶促反應(yīng)速度與酶濃度成正比，即 ν=k[E] 。酶 的最適 pH 不是酶的特征性常數(shù)?？赡嬉种谱饔冒ǜ?jìng)爭(zhēng)性、反競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性抑制幾種類型。 6．激活劑對(duì)反應(yīng)速度的影響：能夠促使酶促反應(yīng)速度加快的物質(zhì)稱為酶的激活劑。具有變構(gòu)調(diào)節(jié)作用的酶就稱為變構(gòu)酶。共價(jià)修飾調(diào)節(jié)的特點(diǎn)為： ① 酶以兩種不同修飾和不同活性的形式存在； ② 有共價(jià)鍵的變化； ③ 受其他調(diào)節(jié)因素（如激素）的影響； ④ 一般為耗能過程；⑤ 存在放大效應(yīng)。 ⑴ 酶蛋白合成的調(diào)節(jié)：酶蛋白的合成速度通常通過一些誘導(dǎo)劑或阻遏劑來進(jìn)行調(diào)節(jié)。心肌中以 LDH1含量最多， LDH1 對(duì)乳 酸的親和力較高，因此它的主要作用是催化乳酸轉(zhuǎn)變?yōu)楸嵩龠M(jìn)一步氧化分解，以供應(yīng)心肌的能量。 二、糖的無氧酵解： 糖的無氧酵解是指葡萄糖在無氧條件下分解生成乳酸并釋放出能量的過程。 4．還原（乳酸的生成）：利用丙酮酸接受酵解代謝過程中產(chǎn)生的 NADH，使 NADH 重新氧化為 NAD+。此代謝過程在細(xì)胞胞液和線粒體內(nèi)進(jìn)行，一分子葡萄糖徹底氧化分解可產(chǎn)生 36/38分子 ATP。 3．經(jīng)三羧酸循環(huán)徹底氧化分解： 生成的乙酰 CoA可 進(jìn)入三羧酸循環(huán)徹底氧化分解為 CO2和 H2O，并釋放能量合成 ATP。 ④ 循環(huán)中有兩次脫羧反應(yīng)，生成兩分子 CO2。異檸檬酸脫氫酶是調(diào)節(jié)三羧酸循環(huán)流量的主要因素， ATP是其變構(gòu)抑制劑， AMP和 ADP 是其變構(gòu)激活劑。 ⑵ 參與羥化反應(yīng)：作為加單氧酶的輔酶，參與對(duì)代謝物的羥化。糖原的合成與分解代謝主要發(fā)生在肝、腎和肌肉組織細(xì)胞的胞液中。 ⑴ 水解：糖原 →1 磷酸葡萄糖。這就是肝糖原合成的三碳途徑或間接途徑。 二、甘油三酯的分解代謝： 1．脂肪動(dòng)員：貯存于脂肪細(xì)胞中的甘油三酯在激素敏感脂肪酶的催化下水解并釋放出脂肪酸，供給全身各組織細(xì)胞攝取利用的過程稱為脂肪動(dòng)員。由脂肪酸硫激酶（脂酰 CoA 合成酶）催化生成脂酰 CoA。后者可繼續(xù)氧化分解，直至全部分解為乙酰 CoA。 其過程為：乙酰 CoA→ 乙酰乙酰 CoA →HMG CoA→ 乙酰乙酸。 1．脂肪酸的合成：脂肪酸合成的原料是葡萄糖氧化分解后產(chǎn)生的乙酰 CoA，其合成過程由胞液中的脂肪酸合成酶系催化，不是 β 氧化過程的逆反應(yīng)。但該循環(huán)反應(yīng)過程由胞液中的脂肪酸合成酶系所催化。 六、甘油磷脂的代謝： 甘油磷脂由一分子的甘油，兩分子的脂肪酸，一分子的磷酸和 X基團(tuán)構(gòu)成。 磷脂酶 A1存在于蛇毒中，其降解產(chǎn)物為溶血磷脂 2，后者有很強(qiáng)的溶血作用。 1．膽固醇的合成：膽固醇合成部位主要是在肝臟和小腸的胞液和微粒體。 ⑶ 鯊烯環(huán)化為膽固醇：此過程在微粒體進(jìn)行。 ⑴ 轉(zhuǎn)化為膽汁酸：正常人每天合成的膽汁酸中有 2/5 通過轉(zhuǎn)化為膽汁酸。 ⑶ 轉(zhuǎn)化為維生素 D3：膽固醇經(jīng) 7位脫氫而轉(zhuǎn)變?yōu)?7脫氫膽固醇，后者在紫外光的照射下， B環(huán)發(fā)生斷裂，生成 VitD3。 ⑶ 作為脂蛋白受體的識(shí)別標(biāo)記： ApoB可被細(xì)胞膜上的 ApoB， E受體（ LDL受體）所識(shí)別； ApoE可被細(xì)胞膜上的 ApoB， E受體和 ApoE受體（ LDL受體相關(guān)蛋白， LRP）所識(shí)別。 2． F1,6BP → F 6P：由果糖 1,6二磷酸酶 1催化進(jìn)行水解，該酶也是糖異生的關(guān)鍵酶之一。按真糖法測(cè)定，正?？崭寡菨舛葹?～ （ 70～100mg%）。 ⑶ 神經(jīng)系統(tǒng)。其分子中的鐵離子與硫原子構(gòu)成一種特殊的正四面體結(jié)構(gòu)，稱為鐵硫中心或鐵硫簇，鐵硫蛋白是單電子傳遞體。 4． 復(fù)合體 Ⅳ （細(xì)胞色素 c 氧化酶）：由一分子 Cyta 和一分子 Cyta3 組成，含兩個(gè)銅離子，可直接將電子傳遞給氧，故 Cytaa3 又稱為細(xì)胞色素 c 氧化酶，其作用是將電子由 Cytc 傳遞給氧。 五、氧化磷酸化的偶聯(lián)部位： 每消耗一摩爾氧原子所消耗的無機(jī)磷的摩爾數(shù)稱為 P/O 比值。 ATP 合酶的中心存在質(zhì)子通道，當(dāng)質(zhì)子通過這一通道進(jìn)入線粒體基質(zhì)時(shí)，其能量被頭部的 ATP 合酶催化活性中心利用以合成 ATP。其機(jī)理是增大了線粒體內(nèi) 膜對(duì) H+的通透性，使 H+的跨膜梯度消除，從而使氧化過程釋放的能量不能用于 ATP 的合成反應(yīng)。這一反應(yīng)過程由肌酸磷酸激酶（ CPK）催化完成。 第八章 氨基酸代謝 一、蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)作用： 1．蛋白質(zhì)的生理功能：主要有： ① 是構(gòu)成組織細(xì)胞的重 要成分； ② 參與組織細(xì)胞的更新和修補(bǔ)； ③ 參與物質(zhì)代謝及生理功能的調(diào)控； ④ 氧化供能； ⑤ 其他功能：如轉(zhuǎn)運(yùn)、凝血、免疫、記憶、識(shí)別等。 3．必需氨基酸與非必需氨基酸：體內(nèi)不能合成，必須由食物蛋白質(zhì)供給的氨基酸稱為必需氨基酸。除此之外， 也可經(jīng) γ 谷氨酰循環(huán)進(jìn)行。轉(zhuǎn)氨酶以磷酸吡哆醛 (胺 )為輔酶。 L氨基酸氧化酶是一種需氧脫氫酶，該酶在人體內(nèi)作用不大。 4．蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值及互補(bǔ)作用：蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高低的決定因素有： ① 必需氨基酸的含量； ② 必需氨基酸的種類； ③ 必需氨基酸的比例，即具有與人體需求相符的氨基酸組成。 ⑵ 氮正平衡：每日攝入氮量大于排出氮量，表明體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成量大于分解量，稱為氮正平衡。因此，如 NADH通過此穿梭系統(tǒng)帶一對(duì)氫原子進(jìn)入線粒體，則只得到 2 分子 ATP。 2．混合酐鍵：由磷酸與羧酸脫水后形成的酐鍵，主要有 1,3二磷酸甘油酸等化合物 。 3．藥物和毒物： ⑴ 呼吸鏈的抑制劑：能夠抑制呼吸鏈遞氫或遞電子過程的藥物或毒物稱為呼吸鏈的抑制劑。這一學(xué)說認(rèn)為氧化呼吸鏈存在于線粒體內(nèi)膜上，當(dāng)氧化反應(yīng)進(jìn)行時(shí)， H+通過氫泵作用（氧化還原袢）被排斥到線粒體內(nèi)膜外側(cè)（膜間腔），從而形成跨膜 pH 梯度和跨膜電位差。 2．琥珀酸氧化呼吸鏈：其遞氫體或遞電子體的排列順序?yàn)椋? [ FAD (FeS)]→CoQ→b(Fe S)→ c1 → c →aa3 →1/2O2 。 細(xì)胞色素類：這是一類以鐵卟啉為輔基的蛋白質(zhì)，為單電子傳遞體。 二、線粒體氧化呼吸鏈： 在 線粒體中，由若干遞氫體或遞電子體按一定順序排列組成的，與細(xì)胞呼吸過程有關(guān)的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)體系稱為呼吸鏈。 2．血糖水平的調(diào)節(jié)：調(diào)節(jié)血糖濃度相對(duì)恒定的機(jī)制有： ⑴ 組織器官： ① 肝臟：通過加快將血中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)入肝細(xì)胞，以及通過促進(jìn)肝糖原的合成，以降低血糖濃度；通過促進(jìn)肝糖原的分解，以及促進(jìn)糖的異生作用，以增高血糖濃度。 2．回收乳酸分子中的能量：由于乳酸主要是在肌肉組織經(jīng)糖的無氧酵解產(chǎn)生，但肌肉組織糖異生作用很弱，且不能生成自由葡萄糖，故需將產(chǎn)生的乳酸轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟重新生成葡萄糖后再加以利用。 十二、糖異生： 由非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)槠咸烟腔蛱窃倪^程稱為糖異生。 ② 超速離心法：按脂蛋白密度高低進(jìn)行分類，也分為四類： CM → VLDL → LDL → HDL 。次級(jí)膽汁酸是在腸道細(xì)菌的作用下生成的。 ⑵ 膽固醇及其衍生物：膽 固醇可反饋抑制 HMGCoA還原酶的活性。 2 乙酰 CoA→ 乙酰乙酰CoA→HMG CoA→MVA 。體內(nèi)含量最多的鞘磷脂是神經(jīng)鞘磷脂，是構(gòu)成生物膜的重要磷脂；合成時(shí)，在相應(yīng)轉(zhuǎn)移酶的催化下，將 CDP膽堿或 CDP乙醇胺攜帶的磷酸膽堿或磷酸乙醇胺轉(zhuǎn)移至 N脂酰鞘氨醇上，生成神經(jīng)鞘磷脂。合成過程中需消耗 CTP，所需膽堿及乙醇胺以 CDP膽堿和 CDP乙醇胺的形式提供。不飽和鍵由脂類加氧酶系催化形成。乙酰 CoA羧化酶是脂肪酸合成的關(guān)鍵酶，屬于變構(gòu)酶，其活性受檸檬酸和異檸檬酸的變構(gòu)激活，受長(zhǎng)鏈脂酰 CoA 的變構(gòu)抑制。 3．酮體生成及利用的生理意義： (1) 在正常情況下，酮體是肝臟輸出能源的一種形式：由于酮體的分子較小，故被肝外組織氧化利用，成為肝臟向肝外組織輸出能源的一種形式。2 1） 5 + （碳原子數(shù) 247。 ⑶ β 氧化：由四個(gè)連續(xù)的酶促反應(yīng)組成： ① 脫氫：脂肪酰 CoA在脂肪酰 CoA 脫氫酶的催化下，生成 FADH2和 α,β 烯脂肪酰 CoA。 脂肪動(dòng)員的結(jié)果是生成三分子的自由脂肪酸（ FFA）和一 分子的甘油。 ② 構(gòu)成生物膜：主要是磷脂和膽固醇具有此功用。此過程只能在肝和腎進(jìn)行。 ⑵ 縮合：在糖原合酶催化下， UDPG所帶的葡萄糖殘基通過 α 1,4糖苷鍵與原有糖原分子的非還原端相連，使糖鏈延長(zhǎng)。 2. 是體內(nèi)生成 5磷酸核糖的唯一代謝途徑：體內(nèi)合成核苷酸和 核酸所需的核糖或脫氧核糖均以5磷酸核糖的形式提供，其生成方式可以由 G6P 脫氫脫羧生成，也可以由 3磷酸甘油醛和 F6P經(jīng)基團(tuán)轉(zhuǎn)移的逆反應(yīng)生成。該旁路途徑的起始物是 G6P，返回的代謝產(chǎn)物是 3磷酸甘油醛和 6磷酸果糖，其重要的中間代謝產(chǎn)物是 5磷酸核糖和 NADPH。 六、糖有氧氧化的生理意義： 1．是糖在體內(nèi)分解供能的主要途徑： ⑴ 生成的 ATP數(shù)目遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于糖的無氧酵解生成的 ATP數(shù)目；⑵ 機(jī)體內(nèi)大多數(shù)組織細(xì)胞均通過此途徑氧化供能。 三羧酸循環(huán)由八步反應(yīng)構(gòu)成：草酰乙酸 + 乙酰 CoA→ 檸檬酸 → 異檸檬酸 →α 酮戊二酸 → 琥珀酰CoA→ 琥珀酸 → 延胡索酸 → 蘋果酸 → 草酰乙酸。故第一階段可凈生成 6/8分子 ATP。 四、糖無氧酵解的生理意義： 1. 在無氧和缺氧條件下，作為糖分解供能的補(bǔ)充途徑： ⑴ 骨骼肌在劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)的相對(duì)缺氧； ⑵ 從平原進(jìn)入高原初期； ⑶ 嚴(yán)重貧血、大量失血、呼吸障礙、肺及心血管疾患所致缺氧。 2. 裂解（磷酸丙糖的生成）：一分子 F1,6BP 裂解為兩分子 3磷酸甘油醛，包括兩步反應(yīng)：F1,6BP→ 磷酸二羥丙酮 + 3磷酸甘油醛 和磷酸二羥丙酮 →3 磷酸甘油醛。 生物化學(xué)與分子生物學(xué)重點(diǎn)（ 2） 20221113 23:44:34 來源：生命經(jīng)緯 第五章 糖代謝 一、糖類的生理功用： ① 氧化供能：糖類是人體最主要的供能物質(zhì)，占全部供能物質(zhì)供能量的 70%；與供能有關(guān)的糖類主要是葡萄糖和糖原，前者為運(yùn)輸和供能形式，后者為貯存形式。 3．同工酶的調(diào)節(jié)：在同一種屬中，催化活性相同而酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)，理化性質(zhì)及免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶稱為同工酶。酶原分子一級(jí)結(jié)構(gòu)的改變導(dǎo)致了酶原分子空間結(jié)構(gòu) 的改變，使催化活性中心得以形成，故使其從無活性的酶原形式轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘拿?。變?gòu)調(diào)節(jié)的特點(diǎn)： ① 酶活性的改變通過酶分子構(gòu)象的改變而實(shí)現(xiàn)； ② 酶的變構(gòu)僅涉及非共價(jià)鍵的變化； ③ 調(diào)節(jié)酶活性的因素為代謝物；④ 為一非耗能過程； ⑤ 無放大效應(yīng)。 1．酶結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)：通過對(duì)現(xiàn)有酶分子結(jié)構(gòu)的影響來改變酶的催化活性。 ② 反競(jìng)爭(zhēng)性抑制：抑制劑不能與游離酶結(jié)合，但可與 ES復(fù)合物結(jié)合并阻止產(chǎn)物生成，使酶的催化活性降低，稱酶的反競(jìng)爭(zhēng)性抑制。如果以 ν ～ [E]作圖，就可得到一組斜率相同的平行線，隨抑制劑濃度的增加而平行向右移動(dòng)。低溫時(shí)由于活化分子數(shù)目減少，反應(yīng)速度降低，但溫度升高后，酶活性又可恢復(fù)。 ⑤Km 可用來判斷酶的最適底物：當(dāng)酶有幾種不同的底物存在時(shí)， Km 值最小者，為該酶的最適底物。 Menten 于 1913年推導(dǎo)出了上述矩形雙曲線的數(shù)學(xué)表達(dá)式，即米氏方程： ν= Vmax[S]/(Km+[S]) 。 3．酶的催化活性是可以調(diào)節(jié)的：如代謝物可調(diào)節(jié)酶的催化活性，對(duì)酶分子的共價(jià)修飾可改變酶的催化活性，也可通過改變酶蛋白的合成來改變其催化活性。 參與構(gòu)成酶的活性中心的化學(xué)基團(tuán)，有些是與底物相結(jié)合的，稱為結(jié)合基 團(tuán)，有些是催化底物反應(yīng)轉(zhuǎn)變成產(chǎn)物的，稱為催化基團(tuán)，這兩類基團(tuán)統(tǒng)稱為活性中心內(nèi)必需基團(tuán)。四氫葉酸是體內(nèi)一碳單位基團(tuán)轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)中的輔酶。 +和 NADP+：即尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（ NAD+，輔酶 Ⅰ ）和尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（ NADP+，輔酶 Ⅱ ），是 Vit PP的衍生物。 ⑵ 運(yùn)載反應(yīng)基團(tuán)，如?；?、氨基、烷基、羧基及一碳單位等，參與基團(tuán)轉(zhuǎn)移。能識(shí)別特定的核苷酸順序，并從特定位點(diǎn)水解核酸的內(nèi)切酶稱為限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）。