動(dòng)物基因組dna的分離定量葉-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 加入 1/10倍體積 3M NaAc（ ）， 2倍體積無(wú)水乙醇 充分混勻 ， 20℃ 下 1520min。 無(wú)水乙醇。HCl， pH 25 mmol/L EDTA， pH % SDS （臨用前加）。 ? 有機(jī)溶劑酚、氯仿抽提 ? 苯酚使蛋白質(zhì)變性，同時(shí)抑制了 DNase的降解作用。 ? 學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳，檢測(cè) DNA的純度、 DNA的構(gòu)型、含量以及分子量的大小。 實(shí) 驗(yàn) 目 的 ? 通過(guò)實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)從動(dòng)物組織中制備染色體 DNA的方法。EDTA； SDS ；蛋白酶 K；無(wú) DNA酶的 RNA酶 實(shí) 驗(yàn) 原 理 ? 用蛋白酶 K水解蛋白質(zhì) ? 蛋白酶 K具有廣泛的切割活性，可消化細(xì)胞，降解蛋白質(zhì)。 消化緩沖液 ： 100 mmol/L NaCl 10 mmol/L Tris3H2O溶于水，用3 mol/L乙酸調(diào)節(jié)至 pH 。12021 rpm，離心 5分鐘 ,擴(kuò)口吸頭小心吸出離心管中的上層液體，即為含 DNA的水相，注意不要吸中間界面上一層厚的白色物質(zhì)（蛋白質(zhì)沉淀）。 10．取 1181。 RNA,可用 100ng/ml的 RNase在 37℃ 水解至少半小時(shí)。 ： ? 選用 TE緩沖液為溶劑（ PH一定，離子強(qiáng)度低） ? 合適的稀釋濃度，保證吸光值在 ? 混合要均勻，無(wú)氣泡和懸浮物，視窗干凈 ，用稀釋 DNA樣品的溶液做對(duì)照。 DNA在瓊脂糖凝膠中的遷移率取決于： 1. DNA分子的大小 DNA遷移的速率與其堿基對(duì)數(shù)的常用對(duì)數(shù)成反比 . 2. 瓊脂糖濃度越大， DNA遷移率越低 3. DNA的構(gòu)象 超螺旋環(huán)狀 線狀 開(kāi)環(huán)狀 、電泳緩沖液中的溴化乙錠 降低 DNA的遷移率 ： 低電壓時(shí)，遷移率與電壓成正比 適宜電壓： 58V/cm ： 離子強(qiáng)度適中 主要： TAE, TBE， TPE PH 操作步驟 瓊脂糖凝膠的制備：溶化，冷卻， EB(一 ) 根據(jù)被分離 DNA的大小，決定凝膠中瓊脂糖的百分含量。加緩沖液 加電泳緩沖液至電泳槽中，加液量要使液面沒(méi)過(guò)膠面 1。瓊脂糖帶有親水性，不含有帶電荷的基因，不引起 DNA變性，又不吸附被分離的物質(zhì)，因此它是一種很好的凝膠劑。這樣可減少操作時(shí)雙手受 EB污染的可能。染色時(shí)也應(yīng)避光。 5．點(diǎn)樣量 太高易產(chǎn)生拖尾與彌散現(xiàn)象，樣品遷移速度減慢。同時(shí)，通過(guò)同已知分子質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn) DNA片段之間的比較，還可以測(cè)定出隨遷移的DNA片段的分子質(zhì)量。 根據(jù) DNA母液的濃度，即可計(jì)算出所用 DNA量的體積。 分光光度計(jì)提前 15 min 打開(kāi)。肉眼（ 177。利用凝膠電泳比較估計(jì)或測(cè)定樣品 DNA的含量，也不適合在凝膠中直接加入 EB，因此在凝膠中，游離的 EB分子向負(fù)極游動(dòng)，會(huì)使樣品中前后各帶染色不均勻，影響定量。 DNA和 RNA本身并不產(chǎn)生熒光，但在熒光染料溴化乙錠（ ethidiun bromide, EB）嵌入堿基平面之間后， DNA樣品在紫外線照射激發(fā)下，可以發(fā)出紅色熒光，其熒光強(qiáng)度與核酸含量成正比。 (2) 選擇最合適的電泳條件。它具有
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