【正文】 病菌的分離 ? 致病性測(cè)定：目的是區(qū)分致病性細(xì)菌和腐生菌。 噬菌體檢測(cè) ? 噬菌體是感染細(xì)菌的病毒，能在活細(xì)菌細(xì)胞中寄生繁殖，破壞和裂解寄主細(xì)胞，在液體培養(yǎng)時(shí)，使混濁的細(xì)菌懸浮液變得澄清，在固體平板上培養(yǎng)時(shí)，則出現(xiàn)許多邊緣整齊，透明光亮的圓形無(wú)菌空斑，稱為“噬菌斑”，肉眼即可分辯 。 ? 免疫熒光技術(shù)有直接法和間接法兩種，在實(shí)踐中常用間接法，一抗與結(jié)合有熒光色素的二抗結(jié)合，通過(guò)免疫熒光顯微鏡來(lái)檢測(cè)所發(fā)出的熒光。通過(guò)核糖體基因庫(kù) (ht tp : //. cme. msu. edu/RDP/)和核糖體基因擴(kuò)增產(chǎn)物的序列分析，選擇病菌專化序列，設(shè)計(jì)?；?，可以用來(lái)?；瘷z測(cè)病原細(xì)菌。測(cè)試時(shí) A端滴加待測(cè)標(biāo)本，通過(guò)層析作用，待測(cè)標(biāo)本向 B端移動(dòng)，流經(jīng) G處時(shí)將金標(biāo)抗體復(fù)溶，若待測(cè)標(biāo)本中含待測(cè)抗原，即形成金標(biāo)抗體 抗原復(fù)合物，移至 T區(qū)時(shí)，形成金標(biāo)抗體 抗原 抗體復(fù)合物，金標(biāo)抗體被固定下來(lái)，在 T區(qū)顯示紅色線條，呈陽(yáng)性反應(yīng)，多余的金標(biāo)記抗體移至 C區(qū)被抗金標(biāo)抗體捕獲，呈現(xiàn)紅色質(zhì)控線條。 保存方法 ―― 所有材料均應(yīng)裝入塑料袋中保濕，及時(shí)分離或 4度低溫保存。 ? 固定技術(shù) ―― 特定固定液中，制作臨時(shí)玻片和永久玻片。 除害方法 —— 熏蒸處理 ? 利用熏蒸劑，在密閉設(shè)施內(nèi)處理植物或植物產(chǎn)品，以殺死害蟲和螨類，部分熏蒸劑兼有殺菌作用。 避害處理 —— 限制使用范圍和加工方式 進(jìn)口糧谷可集中在少數(shù)城市采取合理工藝加工，以防止有害廢棄物進(jìn)入田間。但是，即使是成功的處理方法，隨著有害生物、植物和環(huán)境條件諸因素的變化，也需不斷改進(jìn)和提高。植物產(chǎn)品若帶有不耐嚴(yán)寒低溫的有害生物，則可在冬季進(jìn)口、加工。除害是檢疫處理的主要措施，它通過(guò)直接鏟除有害生物而保障貿(mào)易和引種安全。 殺死 ――65 度水浴中加熱 2min。 分子生物學(xué)和免疫學(xué)相結(jié)合檢測(cè)方法 ? 免疫捕獲反轉(zhuǎn)錄 PCR（ Immunocapture reverse transcript PCR, ICRTPCR） 反轉(zhuǎn)錄 PCR擴(kuò)增 研究方法 ? 日本進(jìn)口南瓜的病毒隔離檢疫和田間疫情監(jiān)測(cè) ? 煙草環(huán)斑病毒的檢疫檢測(cè)方法 ? 番茄斑萎病毒的檢疫技術(shù) ? 侵染觀賞南瓜的黃瓜綠斑駁花葉病毒的初步鑒定 第四節(jié) 植物病原線蟲的檢疫檢驗(yàn)技術(shù) ? 植物病原線蟲是軀體很小，而內(nèi)部又有各種較復(fù)雜器官的低等動(dòng)物，再加上其一些特殊的分布和生物學(xué)習(xí)性等，檢測(cè)方法有所不同。 免疫學(xué)檢測(cè)法 ? 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (ELISA) ? 快速免疫濾紙測(cè)定法 (Rapidimmuno afterpaperassay,RIPA) ? 免疫膠體金技術(shù) (Immune colloidal gold technique) ? 免疫印跡法 Western印跡 (Western blot)；斑點(diǎn)免疫結(jié)合技術(shù) (Dot immunobinding assay, DIBA ) ? 組織免疫印跡 (Tissueblot immunoassay, TBIA ) 快速免疫濾紙測(cè)定法 (Rapidimmuno afterpaperassay,RIPA) ? 快速免疫濾紙測(cè)定類似乳膠凝集反應(yīng)。 核糖體 DNA基礎(chǔ)的 PCR策略 ? 細(xì)菌核糖體 DNA的操縱子由 3個(gè)有功能的保守序列 16SrDNA, 23SrDNA和 5SrDNA組成，由可變異的轉(zhuǎn)錄間隔區(qū) (Internally Transcribed Spacer, ITS)分隔。它可進(jìn)行定性定量測(cè)定，適于大批量樣品的檢查、可用于病害普查，口岸檢疫和產(chǎn)地檢疫等。 ? Biolog 測(cè)定：美國(guó) Biolog 公司研制的專門鑒定細(xì)菌的專家系統(tǒng)。 ? 初步診斷 ―― 通過(guò)肉眼觀察植株的癥狀、病原分泌物以及鏡檢觀察。 ? 保濕培養(yǎng)檢驗(yàn) 優(yōu)點(diǎn)－設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、花費(fèi)少、快速準(zhǔn)確 。 ? 操作不規(guī)范，不嚴(yán)格 。 洗脫孢子 將孢子洗滌液移入離心管，低速離心（ 25003000r／ min） 1015min，使孢子沉集在離心管底部。鑒定病原真菌?；秃托》N，也需接種鑒別寄主。 取樣方法的依據(jù) ? 有害生物的分布規(guī)律 ? 貨物的數(shù)量 ? 裝載方式等因素確定 樣品數(shù)量（容量）大小依據(jù) ? 有害生物的帶有率 。蘇丹紅 1號(hào)具有致癌性，我國(guó)和歐盟都禁止其用于食品生產(chǎn)。 ? 出口日本的活鰻。 ? 可樂(lè)公司沒(méi)有過(guò)濾地下水，所以認(rèn)為水源污染是最大的可能。 ? 動(dòng)植物生長(zhǎng)期間在吸取養(yǎng)分和水分的同時(shí)有可能吸取了污染于其中的重金屬，導(dǎo)致體內(nèi)重金屬含量超標(biāo)。 2020年 4月 ? 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫的產(chǎn)生： ? 國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局 ? 主權(quán)的體現(xiàn) ? 管理職能的體現(xiàn) 四、進(jìn)出口商品檢驗(yàn) （食用性植物產(chǎn)品） 進(jìn)出口商品 檢驗(yàn) （ INSPECTION) 通過(guò)對(duì)進(jìn)出口商品的檢驗(yàn)，達(dá)到保護(hù)人類健康和安全、保護(hù)動(dòng)物或植物的生命健康、保護(hù)環(huán)境、防止欺詐行為、維護(hù)國(guó)家安全的目的。為此法國(guó)政府于 1872年頒布了禁止從國(guó)外輸入葡萄枝條的法令。當(dāng)時(shí)發(fā)病死亡的松材線蟲僅 265株。據(jù)美國(guó)有關(guān)方面統(tǒng)計(jì)，光肩星天牛一旦在美國(guó)傳播開(kāi)來(lái)，將對(duì)美國(guó)槭糖業(yè)、旅游業(yè)和生態(tài)環(huán)境造成約 1380億美元的直接經(jīng)濟(jì)損失。引起了全世界的震驚。 二、植物檢疫的意義 外來(lái)有害生物的危害 ? 外來(lái)（有害）生物的傳入對(duì)農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)和人民身體健康造成危害，還將造成生態(tài)系統(tǒng)多樣性、物種多樣性、生物遺傳資源多樣性的喪失和破壞。后來(lái)意大利的威尼斯港規(guī)定，若有船隊(duì)從疫區(qū)來(lái)，必須在小島上停留 40天。考試方式 ? 12+24 ? 理論 6次課，實(shí)驗(yàn) 6次大實(shí)驗(yàn)。最早是在 1377年的拉古薩共和國(guó)（相當(dāng)于現(xiàn)在的克羅地亞）頒布了對(duì)海員的管理規(guī)則，規(guī)定來(lái)自疫區(qū)的人員必須在海港以外一定距離的小島上停留 30天，然后才能進(jìn)港。 ? 現(xiàn)行的動(dòng)植物檢疫就是通過(guò)對(duì)進(jìn)出境貨物、運(yùn)輸工具、郵寄物、人員攜帶物實(shí)施檢疫，防止外來(lái)有害生物傳入，保護(hù)農(nóng)、林、牧、漁業(yè)生產(chǎn)和人體健康，促進(jìn)對(duì)外經(jīng)濟(jì)貿(mào)易的發(fā)展。當(dāng)時(shí)，僅 800萬(wàn)人口的愛(ài)爾蘭島死于饑荒者達(dá) 20萬(wàn)人，外出逃荒者 164萬(wàn)人。 ? 1996年以來(lái)，美國(guó)紐約、芝加哥等地發(fā)生光肩星天牛的危害。 ? 我國(guó)于 1982 年首次在江蘇南京中山陵發(fā)現(xiàn)了松材線蟲病。 ? 法國(guó)在從美國(guó)引進(jìn)葡萄苗時(shí)導(dǎo)致葡萄根瘤蚜蔓延，約 1/3（ 10萬(wàn) ha）的葡萄園絕收，造成重大損失。 ? 《 國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生法典 》 由 OIE在 1961年制定并通過(guò)。因此在動(dòng)物、植物及其產(chǎn)品中有可能存在一定的藥物殘留。而在加爾各答銷售的可口可樂(lè)中林丹含量是規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)的 140倍，而孟買附近生產(chǎn)的可口可樂(lè)中毒死蜱的含量是規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)的 200倍！ ? 印度的一個(gè)地方法院要求可口可樂(lè)和百事可樂(lè)公司公布可樂(lè)的配方。 ? 孔雀石綠是一種具有高毒、高殘留及“三致”（致畸、致癌、致突變）的殺菌劑。 蘇丹紅 1號(hào) ? 蘇丹紅 1號(hào)是一種紅色染料。 ? 每份送檢樣品量的規(guī)定：谷物、棉籽、瓜子、飼料類為 1000g；大粒種子（玉米、蠶豆等） 1000~1500g；小粒種子（芝麻） 500g；蔬菜、煙草： 10~100g；蔥頭、紅棗、馬鈴薯等： 2020~5000g。 第一節(jié) 植物病原真菌的檢驗(yàn)檢疫技術(shù) ? 病原真菌的屬、種主要依據(jù)其形態(tài)特征鑒定，有時(shí)形態(tài)相似的近似種類需接種寄主，測(cè)定其致病