雙脫氧末端終止測序法原理過程和目標基因cdna序列拼接(存儲版)
【正文】 蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)序列搜索逐一蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中的 序列 Blastx 核酸 蛋白質(zhì) 核酸序列 6框翻譯成蛋白質(zhì)序列后和蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中的序列逐一搜索。完成這一工作只需要使用兩兩序列比較算法。當然可進行自身局部比較。在此，激光束垂直射向凝膠，同經(jīng)過檢測孔的 DNA片段發(fā)生作用，并提供能量激發(fā)熒光發(fā)色基團發(fā)射出具特異性波長的熒光。從所得圖譜即可直接讀得 DNA的堿基序列。 一、 DNA測序的方法 3 1. Sanger雙脫氧鏈終止法測序原理 利用 DNA聚合酶和雙脫氧鏈終止物測定DNA核苷酸順序的方法，是由英國劍橋分子生物學(xué)實驗室的生物化學(xué)家F. Sanger等人于 1977年發(fā)明的。 ? B. 化學(xué)降解法 （ chemical degradation method），是將雙鏈 DNA分子用化學(xué)試劑處理， 產(chǎn)生切口 ，用同位素標記進行測序。 2 3 4 產(chǎn)生的都是以 C結(jié)尾的片段 : GATC, GATCC 產(chǎn)生的都是以 G結(jié)尾的片段 : G, GATCCG 產(chǎn)生的都是以 T結(jié)尾的片段 : GAT, GATCCGAT 9 制得的四組混合物全部平行地點加在變性聚丙烯酸受凝膠電泳板上進行電泳，每組制品中的各個組分將按其鏈長的不同得到分離，從而制得相應(yīng)的放射性自顯影圖譜。 13 高速自動 DNA測序儀的結(jié)構(gòu)及工作原理 由激光發(fā)射器產(chǎn)生的激光束，通過精密的光學(xué)系統(tǒng)后被導(dǎo)向凝膠表面的檢測區(qū)。這是個量化的關(guān)系。 20 序列相似性比較： 就是將待研究序列與 DNA或蛋白質(zhì)序列庫進行比較，用于確定該序列的生物屬性，也就是找出與此序列相似的已知序列是什么。比如說查詢的序列為核酸，查詢數(shù)據(jù)庫亦為核酸序列數(shù)據(jù)庫，那么就應(yīng)該選擇 blastn程序。 我們選上 39 ，我們限制在病毒里面找。 25 （ 2） Blast資源 26 Blast結(jié)果會列出跟查詢序列相似性比較高，符合限定要求的序列結(jié)果，根據(jù)這些結(jié)果可以獲取以下一些信息： ； ； ； … 這些信息都可以應(yīng)用到后續(xù)分析中。 完成這一工作必須使用多序列比較算法 。而說 A和 B的同源性為 80％都是不科學(xué)的。 14 熒光化合物標記鏈終止法以熒光顏色為標記信號，每種dd
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