【正文】 MICROS60等。而且，中間群細胞中往往混有異型淋巴和幼稚粒細胞，使得實驗室必須對報警的標本保持相當高復檢率，否則即可能造成漏診。Bayer公司在五分類儀器中，除了光散射法以外，也加入了過氧化物酶染色技術(shù)進行細胞分類，對于嗜堿性細胞也設(shè)置了單獨的檢測通道和特殊溶解技術(shù)。但是，網(wǎng)織紅檢測功能也有半自動和全自動之分，即標本需要手工添加染色試劑處理后上機或是直接通過儀器染色檢測。能否有效檢測包括幼稚細胞在內(nèi)的所有細胞，是今后血液分析儀的一個發(fā)展方向。綜上所述，隨著血液分析儀的不斷發(fā)展，新儀器不斷疊現(xiàn)，實驗室工作人員有必要了解掌握血液分析儀的基本分析技術(shù)和原理，提高血液分析儀在臨床試驗室診斷中的應(yīng)用水平，更好地為臨床第一線服務(wù)。電阻抗原理解釋該方法將細胞視為一種絕緣體，將其懸浮于電解質(zhì)溶液中，當其通過檢測小孔時測得其電阻的變化。此外，血細胞經(jīng)過檢測小孔后，有時也會產(chǎn)生回流，尤其是當體積較大的紅細胞發(fā)生回流時，很容易造成對其后通過小孔的細胞脈沖造成干擾，這種情況尤其對血小板影響較大。早在1968年，柏林自由大學的Thom等人利用此物理原理發(fā)明了鞘流法。如Technicon ,Abbott CD3700采用氬離子激光。在SYSMEX XE2100血液分析儀上，檢測血小板的方法增添到兩種。如Beckman Coulter STKS、HmX，Abbott CD3700、3500R等。由于幼稚的網(wǎng)織紅熒光信號較強，MFR和HFR之和即反映未成熟網(wǎng)織紅的一個有用參數(shù)。由此準確計得有核紅細胞數(shù)目及占白細胞的比例。各制造商一般均采用上述所列的數(shù)種技術(shù)綜合應(yīng)用于五分類分析。該信號不易被細胞體積所干擾，可以更加準確地區(qū)分出異型淋巴和正常淋巴。、90176。白細胞分類檢測通道內(nèi)，稀釋液內(nèi)加有髓過氧化物酶（MPO）的底物過氧化氫和色原，可使含MPO 的細胞胞漿呈現(xiàn)深色沉淀。嗜堿細胞未被溶解,體積大,核葉多,核大,在散點圖低角度和高角度散射光均強, 可明顯與嗜中性細胞( PMN)、單核(MN) 區(qū)分開。（三） 幼稚白細胞分析白細胞中的幼稚成份在臨床上具有顯著意義。因此，只要儀器報告有幼稚細胞，便應(yīng)該鏡檢復核。三、 血紅蛋白分析技術(shù) 血液分析儀分析血紅蛋白的技術(shù)相對簡單，幾乎所有儀器采用的原理基本相同，即比色法。目前SYSMEX所有全自動血液分析儀均已經(jīng)采用試劑無氰化技術(shù)，而其他制造商也在相繼開發(fā)環(huán)保試劑，這是血紅蛋白檢測技術(shù)的一個顯著的趨勢。 獨特的可選式PLT雙方法檢測技術(shù)：除采用鞘流電阻抗原理檢測RBC/PLT以外，XE2100更具有激光染色形態(tài)檢測技術(shù)得到更準確的PLT結(jié)果168。168。通過采用流式細胞技術(shù)，儀器對每個通過檢測部位的細胞或顆粒進行逐個分析，具有檢測速度快、測量指標多、數(shù)據(jù)采集量大、對所測細胞或顆?？梢赃M行分選等多項特點。3． NRBC（有核紅細胞）分析NRBC檢測通道：采用半導體激光流式原理和DNA/RNA染色技術(shù)。與ICSH參考方法的相關(guān)性：SLSHb法與ICSH的參考方法相比，具有非常高的相關(guān)性(r=)。（3）IMI幼稚白細胞檢測：采用專用IMI檢測通道和專用幼稚細胞試劑、RF（射頻）/DC（電阻抗）原理采用專用的幼稚細胞溶血素破壞成熟細胞，保持幼稚細胞原有形態(tài)，通過射頻與電阻抗方法將其檢測出來，并繪制成單獨的IM散點圖，其檢測靈敏度較一般五分類的幼稚細胞提示有了很大的提高。2． WBC分析: 采用專用WBC/BASO和WBC DIFF檢測通道、半導體激光流式細胞原理結(jié)合細胞化學熒光染色技術(shù)（1）半導體激光流式細胞技術(shù)。168。 最快的測定速度：每小時測定150個標本。近年來，出于環(huán)保和廢棄物處理的考慮，有部分血液分析儀開始采用不含氰化物的溶血素檢測血紅蛋白。因此，當其與含有氨基酸和表面活性成分的溶血素作用時，氨基酸首先進入幼稚白細胞內(nèi)，從而延遲了表面活性成分的作用，而成熟白細胞則與紅細胞一起被溶解。而SYSMEX XE2100采用核酸熒光染色后，根據(jù)細胞成熟度的不同可以體現(xiàn)在其熒光信號的強弱上，其白細胞分類通道出正常細胞分類外，還有兩個幼稚白細胞的定量參數(shù)：IG（幼稚粒細胞）和Other（原始細胞/異常淋巴）。然后通過前向和側(cè)向散射光檢測嗜堿性細胞。15176。此外，CD3700為了消除抵抗性紅細胞對白細胞總數(shù)的影響，還單獨采用了電阻抗方法測白細胞總數(shù)，并與散射光的結(jié)果相復核以求得更準確的結(jié)果。消偏振，分別反映細胞大小、細胞復雜性、細胞內(nèi)部顆粒和細胞分葉情況、核漿比等。由于兩種細胞之間極少會在三方面信號均完全相同，VCS技術(shù)便做到了對白細胞的準確分類。為了能夠從細胞體積大小到內(nèi)部結(jié)構(gòu)全面分析細胞并得到準確的白細胞分類結(jié)果，各大廠家自80年代開始采用各項技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于血液細胞的分析，各種型號的五分類儀器相繼問世。以SYSMEX XE2100為例，儀器單獨設(shè)置檢測有核紅細胞的通道，特殊的溶血素將紅細胞完全破壞，有核紅細胞被裸核并收縮，而白細胞被保留。一般均采用激光流式原理和細胞化學染色，如SYSMEX XE2100、XT2000、Beckman Coulter Gen’s、Bayer ADVIA1Abbott CD4000等，并可以實現(xiàn)不同標本檢測CBC、DIFF、RET檢測模式。目前用自動分析儀進行網(wǎng)織紅細胞分析的技術(shù)已經(jīng)取得很大進展。SYSMEX R3500網(wǎng)織紅細胞分析儀采用氬離子激光和Auramine O（堿性槐黃O）核酸染料，氬離子激光束照射在經(jīng)過染色的細胞上，激發(fā)出熒光信號和前向散射光，分別反映細胞內(nèi)部核酸多少和外部體積大小。通過球形化的處理，細胞經(jīng)過檢測區(qū)時不論何方向其光散射的信號都是相同的。對于上述重合、回流、偏心產(chǎn)生的誤差，一種比較全面的解決方法是鞘流技術(shù)（也有稱液路聚焦、水動力聚焦）。細胞濃度越大，重合的幾率越大，由此帶來的計數(shù)誤差也越大。為了去繁就簡地歸納出各種血液分析儀采用的分析技術(shù)，本章節(jié)為紅細胞/血小板系、白細胞系、血紅蛋白三部分來闡述。ABX PENTRA60是每小時處理60個標本的五分類儀器，適合于我國縣級基層醫(yī)院的需求。Bayer ADVIA120則通過過氧化物酶染色技術(shù)可以區(qū)分出大的未染色細胞（主要為原始、異淋細胞）。鑒于以上這些問題，近年來有制造商開始致力于通過化學染色方法對幼稚成份的標本進行自動化檢測，這相對于一般的陽性報警（即提供一種可能性）要進步了很多。而SYSMEX公司在采用電阻抗原理、射頻技術(shù)、光散射技術(shù)以外，為了提高在白細胞中比例最小的嗜堿性細胞的分類準確性，在白細胞分類檢測通道以外還單獨設(shè)置了嗜堿性細胞檢測通道，通過特異性的化學溶解方法只保留嗜堿性細胞，再通過不同角度的光散射法檢測。這種以細胞大小區(qū)分白細胞的方法并不精確，嗜酸性細胞和嗜堿性細胞在大細胞群中不能準確區(qū)分。當然，不同儀器在自動化程度、參數(shù)、定量計數(shù)、檢測速度等方面均有不同以適應(yīng)不同實驗室的實際需求。隨著現(xiàn)代物理學、化學、生物學及電子技術(shù)不斷發(fā)展并應(yīng)用于細胞分析，結(jié)合計算機技術(shù)、自動化控制技術(shù)，現(xiàn)代血液分析儀在性能、準確性及適用性方面均取得了長足的進步。 白細胞兩分類；178。根據(jù)細胞計數(shù)原理大致可分為：178。 儀器的實用性： 對于一般醫(yī)院而言，儀器較理想的實用性標準可按如下表所示：項 目實 用 性 要 求進樣方式能同時進行預稀釋和全血自動進樣自動化程度全自動測試速度50個/小時故障率因儀器自身因素發(fā)生堵孔(2%)，電路部分，真空系統(tǒng)，管路系統(tǒng)，機械部分等故障率很低，耐用性強并有自身診斷功能數(shù)據(jù)庫病人樣本儲存100個以上，最好能進行簡單的統(tǒng)計處理，報告打印方式可選擇質(zhì)控質(zhì)控文件應(yīng)大于5個，一般采用XB質(zhì)控并顯示LeveryJennings圖形檢測參數(shù)檢測參數(shù)在15個以上，白細胞三分類以上并至少能顯示、打印WBC、RBC、PLT等三種以上的直方圖抗干擾能力抗干擾能力強，環(huán)境適應(yīng)能力強售后服務(wù)銷售商有較強的營銷、技術(shù)服務(wù)、維修能力2．用戶情況：178。 小血小板；178。 小體積區(qū)域干擾；178。 原幼細胞；178。這些技術(shù)的運用極大提高了儀器的分辨能力。 試劑自動加液系統(tǒng)；178。五、血液分析儀的技術(shù)發(fā)展 從血細胞分析儀誕生至今，新技術(shù)不斷被采用。 圖5. 浮球定量技術(shù)原理示意圖(Sample Rotor Valve)閥定量技術(shù)(SYSMEX專利)： 自動吸取標本最初采用機械臂探針式，但由于血液粘度比血清高，所以精密度和準確性都不理想。 嗜堿性粒細胞的測定則是用特定試劑破壞RBC和WBC中的LYM、MONO、NEU、EOS而進行單獨計數(shù)。由于LYM和BASO無過氧化酶、MONO過氧化酶活性較低、NEU活性較高、EOS活性最強，通過光散射可測定細胞大小和酶活性。 Coulter STKS/MAXM 在三分類的基礎(chǔ)上，用電阻抗法測定WBC的大小，用高頻傳導法測定細胞內(nèi)的傳導性，用光散射法測定每個細胞的結(jié)構(gòu)和形狀。當單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞中的任何一種增加時，中型細胞結(jié)果數(shù)值和圖形都有明顯的變化，作為異常結(jié)果對用戶進行提示，以進行鏡檢確定。 ICSH推薦使用氰化高鐵法，HiCN最大吸收在540nm，儀器的校正必須以HiCN為標準。信號/噪聲比影響著測定的分辨率。二、基本原理1．電阻抗原理電阻抗法是血液分析儀中使用最為普遍的方法。巨幼細胞性貧血、惡性貧血PDW升高，血小板體積大小不均是PDW可增加。類 型MCV(80~100)MCH(27~35)MCHC(310~370)常 見 疾 病大細胞性貧血10035310~370巨幼細胞貧血、非巨幼細胞性大細胞貧血正常細胞性貧血80~10027~35310~370急性失血性貧血、溶血性貧血、癥狀性貧血、再生障礙性貧血單純小細胞性貧血8027310~370亞急性或慢性炎癥小細胞低色素貧血8027310缺鐵性貧血、鐵粒幼細胞貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鉛中毒貧血2．Bessman分類法 分類依據(jù)：以MCV、RDW是否正常為分類依據(jù)。 女性：~ 病理性：真性紅細胞增多癥等。 減少： 多見于傳染性疾病的急性期、放射病、細胞免疫缺陷等。(3). 血小板檢測PLT(Platelet count)： 血小板計數(shù)： 單位體積全血血小板數(shù)，(103/μL或109/L)。HCT(Hematocrit)或PCV(Packed Cell Volume)：紅細胞比積：全血紅細胞相對容積比(%)。NEU%(Neutrophil concentration)： 嗜中性粒細胞占白細胞百分率(%)。2．血液一般檢驗的內(nèi)容 對血液中的有形成分和血液細胞的數(shù)量、質(zhì)量和外觀形態(tài)進行檢測。 傳統(tǒng)方法：以手工操作、普通光學顯微鏡、計數(shù)板等簡單器材為主要檢測手段。 在病理情況下，血液成分質(zhì)和量的變化，除了反映造血系統(tǒng)的病變以外，還能直接或間接地提示全身或局部組織器官的病變。 白細胞的分類： 小型白細胞(淋巴細胞) 二分類 大型白細胞(其他白細胞) 小型白細胞(淋巴細胞) 三分類 中型白細胞(單核細胞、嗜酸性、嗜堿性粒細胞) 大型白細胞(嗜中性粒細胞) 淋巴細胞 單核細胞 五分類 嗜中性粒細胞 粒細胞 嗜酸性粒細胞 嗜堿性粒細胞178。負責將氧氣輸送致全身，并將二氧化碳收集至肺部排出。178。第一部分 血液學基礎(chǔ)一、血液的功能和組成1．血液的功能178。 血液由有形成分(血細胞等)和血漿組成。內(nèi)含血紅蛋白，富含鐵元素，容易氧化。(2). 白細胞： 178。178。5．血液一般檢驗的方法178。二、 血液一般檢驗的目的和內(nèi)容1．血液一般檢驗的目的以現(xiàn)代血液學理論為基礎(chǔ)，以常用的實驗方法為手段，聯(lián)系臨床實際，為臨床疾病的初步診斷和療效觀察提供客觀依據(jù)。GRAN(Granulocyte count)： 粒細胞計數(shù)： 單位體積全血粒細胞數(shù)，(103/μL或109/L)。HGB(Hemoglobin concentration)： 血紅蛋白：單位體積全血血紅蛋白濃度(g/L)。HDW(Hemoglobin Distribution Width)： 紅細胞血紅蛋白分布寬度。LYM% % 20~40 增加： 百日咳、傳染性單核細胞增多癥、腮腺LYM 109/L ~ 炎、結(jié)核、傳染性肝炎等。(2). 紅細胞檢測項目 單位 參考值 臨床意義RBC 1012/L 男性：~ 增加： 生理性：新生兒、高原居住者。貧 血 的 形 態(tài) 學 分 類1．Wintrobe分類法分類依據(jù)：MCV、MCH、MCHC這三個參數(shù)是否正常為依據(jù)。PDWCV % ~ MPV與MPV呈負的線形相關(guān)，急淋、慢淋、糖尿病可正常。3．CBC+DIFF+RET分析： 在某些高檔血液分析儀中還有檢測網(wǎng)織紅細胞的功能，CBC+DIFF+RET分析就是在進行細胞計數(shù)和白細胞分類的基礎(chǔ)上進行網(wǎng)織紅細胞分析的檢驗?zāi)Ｊ??？讖?0μm小孔適合測定RBC和PLT，孔徑100μm的小孔適合測定WBC。聚光透鏡 流動細胞 收集透鏡 光阻斷器 光電增益管光源 光阻斷器 光阻斷器圖3. 光散射細胞計數(shù)原理示意圖3．血紅蛋白測定 被稀釋的血液加入溶血劑后，紅細胞溶解，釋放血紅蛋白，血紅蛋白同溶血劑形成血紅蛋白衍生物，在特定波長(530~550nm)下比色，吸光度的變化與液體中的HGB含量成比例，儀器便可顯示HGB濃度。由于溶血試劑的不同，在SYSMEX三分類儀器中：小型白細胞為淋巴