畢業(yè)論文巴西橡膠樹乙烯途徑中抑制因子ein3的western印跡(存儲版)
【正文】 據(jù)記錄表Protein probeBCA wert1BCA wert2averageBSA（mg/ml） Sample 0h 1h 4h 6h 12h 24h(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線（3）樣品蛋白濃度（OD值代入y=+）樣品蛋白濃度(μg/μl)上樣量(μl)0h1h4h6h12h24h三種定蛋白的方法所用到的牛血清蛋白和樣品蛋白是在同一條件下保存的同一試管中取得的，因此其蛋白濃度理論上應(yīng)該是相等的，但是從三種方法的結(jié)果來看，不同方法所得的結(jié)果有一定的差距。（8）、二抗孵育與清洗： ①二抗孵育：將清洗掉一抗的膜浸入用封閉液稀釋2000倍的二抗羊抗兔中，放入搖床，在37度60rpm下孵育23h。染色完成后將膠從染色液中取出放入另一玻璃皿中并加入脫色液I在低轉(zhuǎn)速搖床上脫色30min，棄去脫色液Ⅰ，加入脫色液Ⅱ在相同轉(zhuǎn)速的搖床上脫色過夜。染色完成后將膠從染色液中取出放入另一玻璃皿中并加入脫色液I在低轉(zhuǎn)速搖床上脫色30min，棄去脫色液Ⅰ，加入脫色液Ⅱ在相同轉(zhuǎn)速的搖床上脫色過夜。 按照試劑配方配置4%，用移液槍吸取濃縮膠溶液緩慢加入分離膠上面,直至凝膠溶液將要到達前玻璃板的頂端,插入梳子,凝膠聚合時間約30 min,然后小心拔出梳子,將凝膠放入電泳槽內(nèi),接好電極,將電泳緩沖液加入電泳槽中，,一塊用考馬斯亮藍進行染色后脫色觀察對照，另一塊則進行轉(zhuǎn)膜后的免疫印跡。（3） 在格子中心用移液槍滴加5μl牛血清蛋白和蛋白樣品，每個濃度和樣品各兩個格子，待其自然干燥。Bradford 法法測定蛋白濃度的范圍為31 .25 ～ 2 000 μg/mL。l（5）Loading buffer(上樣緩沖液） SDS 10% w/v Glycerol 20% v/v Triscl Bromphend blue % w/v βmerkapto ethanol 10mM（6）Staining buffer(蛋白膠染色液） Methanol(甲醇） 91ml Acetate(冰醋酸） coomassie brilliant blue R250 H2O 91ml Distaining buffer I(蛋白脫色液Ⅰ） Methanol 50% Acetate 10% H2O 40% Distaining buffer II(蛋白脫色液Ⅱ） Methanol 30% Acetate 10% H2O 60%（7）TBST buffer Triscl 50mM Nacl 150mM Tween20 %3方法步驟 在溫室中選取兩株長勢良好且葉片健康的巴西橡膠樹，在兩株橡膠樹上各選取6片葉齡相、無蟲咬痕的幼嫩葉片并標(biāo)記。[9]大部分與乙烯相關(guān)的生物學(xué)過程都通過核心轉(zhuǎn)錄因子EIN3/EIL1調(diào)控下游的靶基因來實現(xiàn)的。[5] 乙烯對植物的代謝調(diào)節(jié)是貫穿其整個生活周期的。目前，對于天然橡膠的生物合成途徑雖有一定的了解，與橡膠樹合成相關(guān)的一些基因也相繼克隆，并研究它們的一些基本功能，但所報道克隆的cDNA大都用異源同類基因從巴西橡膠樹構(gòu)建的cDNA文庫獲取，從巴西橡膠樹克隆的新基因不多，難以從整體水平上解釋膠乳再生的分子機制，此外橡膠樹死皮病發(fā)生的分子機理的相關(guān)研究也有待深入。天然橡膠資源的安全對于國家經(jīng)濟的安全甚至國家的安全都具有非常重要的意義。海南大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計） 題 目： 巴西橡膠樹乙烯途徑中抑制因子 Ein3的western印跡 學(xué) 號： 20110101310079 姓 名： 吳
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