過氧化物酶同工酶的提取、分離(存儲版)
【正文】 上 層 (負(fù)極 ) 緩沖 液 2 樣 本溶液 3 濃縮膠 4 分 離膠 膠 體 5 下 層 (正 極 )緩沖 液 TrisHCl TrisHCl Trisglycine Trisglycine Trisglycine 5% 7% ■ 在 濃縮膠 中的三 個 主要作用角色： 甘氨酸 : pH= 負(fù)電荷 pI= 不帶電荷 Cl1: 蛋白質(zhì) (酶 ): 小分子 大分子 ■ 濃縮效應(yīng) ： 分離膠 濃縮膠 樣本 離子缺乏空間 A B C + + ? 以鄰甲氧基苯酚（即愈創(chuàng)木酚）為過氧化物酶的底物，在此酶存在下， H2O2可將鄰甲氧基苯酚氧化成紅棕色的 4鄰甲氧基苯酚，其反應(yīng)為： ? 該紅棕色的物質(zhì)可用分光光度計在 470nm處測定其消光值，即可求出該酶的活性。 剝膠 、 固定 、 染色： 將凝膠板取下 → 放入裝水瓷盤中 → 剝下膠片 → 并浸洗二次 → 倒去水 → 加入固定液 10分鐘 → 倒去固定液 → 加顯色液 （ 聯(lián)苯胺 ） ， 顯色 → 觀察記錄 。 點樣： 輕拔電泳梳子 → 用微量進(jìn)樣器點樣 → 每孔約 30μl 。富有彈性，且完全透明的凝膠， a與 b的重量比應(yīng)在 30左右。 ■ 聚合反 應(yīng) ： 架 橋 物造成分枝 端 點 自由基 可再延 續(xù) free radical Bis Bis 聚合反 應(yīng) 交 錯連結(jié) 自由基形成 ① 聚丙烯酰胺的基本結(jié)構(gòu)為丙烯酰胺單體構(gòu)成的長鏈 ， 鏈與鏈之間通過甲叉橋聯(lián)結(jié)在一起； ② 鏈的縱橫交錯形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) ， 使凝膠具有分子篩的性質(zhì)； ③ 網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)還能限制蛋白質(zhì)等樣品的擴(kuò)散運(yùn)動 ， 使凝膠具有抗對流的作用； ④ 長鏈富含酰胺基團(tuán) ， 使其成為穩(wěn)定的親水凝膠； ⑤ 該結(jié)構(gòu)不帶電荷 ， 在電場中電滲現(xiàn)象極為微小 。 二、實驗原理 : (1)定義： 是指帶電粒子在電場中向與其自身所帶電荷相反的電極方向移動的現(xiàn)象。
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