生物免疫分析技術(shù)ppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 知 , 酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng) ，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象?？乖贵w反應(yīng)的這種特異性使免疫測(cè)定能在一非常復(fù)雜的蛋白質(zhì)化合物（例如血清）中測(cè)定某一特定的物質(zhì)，而不需先分離待檢物。標(biāo)記和未標(biāo)記的抗原競(jìng)爭(zhēng)與抗體進(jìn)行結(jié)合的現(xiàn)象，成為競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。待測(cè)抗原是指人體內(nèi)某種微量活性物質(zhì)（如微生物＆寄生蟲(chóng)抗原、激素、維生素、酶、藥物等），而標(biāo)記抗原使將已知的上述物質(zhì)標(biāo)記上放射性同位素，具有示蹤作用。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。因此，加入底物后顯色反應(yīng)較弱。 酶 底 物 顯色反應(yīng) 測(cè)定波長(zhǎng) 辣根過(guò)氧化物酶 鄰苯二胺 四甲替聯(lián)苯胺 氨基水楊酸 鄰聯(lián)苯甲胺 2,2‘連胺基 2(3乙基 并噻唑啉磺酸 6)銨鹽 橘紅色 黃色 棕色 蘭色 藍(lán)綠色 492 460 449 425 642 堿性磷酸酯酶 4硝基酚磷酸鹽 (PNP) 萘酚 ASMx磷酸鹽 +重氮鹽 黃色 紅色 400 500 葡萄糖氧化酶 ABTS+HRP+葡萄糖 葡萄糖 +甲硫酚嗪 +噻唑蘭 黃色 深藍(lán)色 405 420 β Ｄ 半乳糖苷酶 甲基傘酮基半乳糖苷 (4MuG) 硝基酚半乳糖苷 (ONPG) 熒光 黃色 360,450 420 ELISA的種類和變化 （一）雙抗體夾心法 （二）間接法 （三）競(jìng)爭(zhēng)法 （四）雙位點(diǎn)一步法 （五）捕獲法測(cè) IgM抗體 （六）應(yīng)用親和素和生物素的 ELISA （一）雙抗體夾心法 此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原 步驟： A 將已知抗體吸附于載體上，溫育后清洗； B 加入待檢標(biāo)本溶液，使溶液中的抗原與吸附的抗體結(jié)合，溫育后清洗； C 加入酶標(biāo)記特異性抗體，溫育后清洗； D 加入酶作用底物，產(chǎn)生顯色反應(yīng)，顏色的改變與所加的待檢標(biāo)本溶液中的抗原量成正比。 ELISA的基本原理和方法 ELISA的種類和變化
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