hbvdna定量檢測(存儲版)
【正文】 20 minutes for 30 cycles Verify amplicon specificity: melting curve analysis provides differentiation between amplification products Detect mutations: changes in the melting curve analysis can be used to identify mutations Minimize contamination: amplification and detection are performed in the same closed tube 熒光定量 PCR技術(shù)的優(yōu)點 1）定量準(zhǔn)確，實時監(jiān)控 2） 敏感性和特異性高 3）簡單快速， 30個循環(huán) 20幾分鐘就能夠完成。 2個探針首尾相連，僅差一個堿基。 研究表明 ， 每個模板的 Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系 ， 起始拷貝數(shù)越多 ， Ct值越小 。 相同模板進(jìn)行 96次擴(kuò)增的擴(kuò)增曲線圖。 PCR原理 ? PCR技術(shù)的本質(zhì)是體外核酸擴(kuò)增，加熱使雙鏈 DNA解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板 DNA雜交，在 Taq DNA聚合酶，dNTPs， Mg2+和合適 pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復(fù) “ 變性 → 退火 → 引物延伸 ” 過程至 2540個循環(huán)，呈指數(shù)級擴(kuò)大待測樣本中的核酸拷貝數(shù)。 ? 系統(tǒng)內(nèi)裝置有半導(dǎo)體 PCR、鹵鎢燈光源激發(fā)熒光信號、光柵分光、超低溫光電耦合器（ CCD）攝象機(jī)收集熒光信號、計算機(jī)軟件分析系統(tǒng)等。如果分子濃度高了，影響作用很復(fù)雜，而 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物是高濃度的，因此重復(fù)性變差也很容易理解。 熒光信號的檢測方法： DNA結(jié)合染料技術(shù)
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