體外轉(zhuǎn)錄與翻譯ppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 取物 E. coli CellFree System s30原核體外翻譯系統(tǒng)的 E． colis30提取物是由 OmpT內(nèi)切蛋白酶和 Lon蛋白酶缺陷的 E． coliB菌株制備，所以在 s30系統(tǒng)中表達(dá)基因可以增加產(chǎn)物的穩(wěn)定性，尤其適用于在體外表達(dá)時(shí)易被蛋白酶降解的蛋白質(zhì) 。對(duì)應(yīng)不同的體外表達(dá)系統(tǒng)，我們?cè)谠O(shè)計(jì) RNA模版的時(shí)候就要區(qū)別對(duì)待。不過如果 mRNA沒有這段 Kozak序列而有一段適當(dāng)長(zhǎng)度 539。 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 五、基因體外翻譯的應(yīng)用 3 高通量篩選 ?篩選病毒特異翻譯抑制復(fù)合物 ?篩選分子伴侶抑制藥物 * 確定新型的孤受體（ orphan receptor） 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 五、基因體外翻譯的應(yīng)用 4 分子結(jié)構(gòu)和定位分析 * 膜蛋白研究 曾經(jīng)有實(shí)驗(yàn)證明在體外表達(dá)系統(tǒng)中加入犬類的微粒體膜可以讓跨膜蛋白 G蛋白偶連受體正確折疊。額外的微粒體膜則可以對(duì)糖基化、甲基化和信號(hào)序列去除進(jìn)行研究。 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 課后復(fù)習(xí)重點(diǎn) 體外轉(zhuǎn)錄常用的 RNA聚合酶 體外轉(zhuǎn)錄模板 DNA來(lái)源以及要求 體外翻譯常用的翻譯系統(tǒng) 體外翻譯對(duì)于ＭＲＮＡ要求 。 * 突變分析 * 翻譯后修飾分析 許多蛋白需要進(jìn)行高級(jí)修飾后才能形式功能。另外，體外表達(dá)另一個(gè)優(yōu)勢(shì)就是可以合成時(shí)插入帶有光敏性、熒光或者生物素殘基等標(biāo)記，方便對(duì)蛋白進(jìn)行定位。GCCACCAUGG339。同時(shí) 539。 人們可以根據(jù)需要加入特殊添加劑如蛋白酶抑制劑，分子伴侶，代謝物，非天然氨基酸甚至是少量的變性劑，也可摻入特殊標(biāo)記的氨基酸獲得帶標(biāo)記蛋白質(zhì)。 提取物中添加磷酸肌酸和磷酸肌酸激酶的能量生成系統(tǒng)和增加鏈延伸效率的亞精胺，以及一定量的乙酸鎂。 網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解后，提取物用微球菌核酸酶破壞內(nèi)源 mRNA，最大限度降低翻譯背景。 質(zhì)粒（ Plasmids ） 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 二、基因體外轉(zhuǎn)錄原理與操作 基因體外轉(zhuǎn)錄的操作 （ 2）線形的 DNA模板（ linear DNA template ） PCR產(chǎn)物（ PCR Products） 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 二、基因體外轉(zhuǎn)錄原理與操作 基因體外轉(zhuǎn)錄的操作 （ 2）線形的 DNA模板（ linear DNA template ） 寡核苷酸（ Oligonucleotides ） CDNA 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 二、基因體外轉(zhuǎn)錄原理與操作 基因體外轉(zhuǎn)錄的操作 （ 3）基本反應(yīng)體系 基因體外轉(zhuǎn)錄與翻譯 二、基因體外轉(zhuǎn)錄原理與操作 基因體外轉(zhuǎn)錄的操作 （４）基本反應(yīng)分型 普通型（ Conventional Synthesis ）在一個(gè)反應(yīng)體系內(nèi)得到的ＲＮＡ量較少，主要由于 ＲＮＡ探針制備
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