第十五章混合斑的檢驗(yàn)(存儲版)
【正文】 等位基因 3． DNA分 析 影響混合斑 DNA檢驗(yàn)結(jié)果分析的因素 影 子 帶 引物延伸過程中 TaqDNA酶發(fā)生滑脫所致 ， 特別見于復(fù)合擴(kuò)增 非特異性帶 各等位基因的 DNA片段變性后復(fù)性時 ， 隨機(jī)形成的雜合二聚體 。 方法： 第一步： 檢材 +1%SDS+100ug/ml蛋白酶 K37度 2~3h 500r/min離心 15min、 去上清 ， 精子留在沉淀物中 第二步： +40Mm/L DTT+1%SDS+100ug/ml蛋白酶 K 注意： 消化條件選擇 主要是第一步消化時間 消化不完全 當(dāng)陰道上皮細(xì)胞過多 ， 不能使兩者徹底分離 過渡消化 可能消化一部分精子細(xì)胞 ， 導(dǎo)致精子 DNA減少 *** 實(shí)際操作前 ， 應(yīng)進(jìn)行涂片檢查 ， 根據(jù)精子和陰道上皮 細(xì)胞的比例 ， 對消化時間 、 溫度 、 試劑的濃度等進(jìn)行 適當(dāng)?shù)恼{(diào)整 提取方法選擇 采用有機(jī)溶劑的方法比較好 酚 氯仿能夠去掉混合斑中的精漿蛋白 ， 陰道分泌液 、 細(xì)
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