葡聚糖凝膠層析脫鹽(存儲版)
【正文】 約 4cm高水位 ， 關(guān)閉出水口 。 出口流速控制在每 6秒 1滴 ， 直至收集到 6號管達(dá) 2mL。 結(jié)果處理 檢查膠平面是否水平； 加樣品及洗脫液時勿沖到膠平面； 控制流速； 注意事項 思考題 半透膜透析 超濾 離子交換色譜等 蛋白質(zhì)脫鹽的方法： 思考題 凝膠的選擇： 視分離混合物的組成而定 ， 是大分子物質(zhì)與小分子物質(zhì)分開 ， 即組別分離；還是相對分子質(zhì)量比較接近的物質(zhì)進(jìn)行分離 ， 即分級分離 。 進(jìn)行脫鹽時 ， 柱高 50cm比較合適；分級分離時 ， 100cm就足夠了 。 分配系數(shù) Kav ： Kd = （ VeVo） /（ VtVo） 影響凝膠分離效果的因素： 相關(guān)知識 Vt：床的總體積 =外水體積 +內(nèi)水體積 +顆粒自身體積 Ve：洗脫體積 Vo：外水體積 大分子 （ 大于孔徑上限 ） 全部在外水體積中 ， 它在膠床中的洗脫體積等于外水體積 。 一般來講 ， 洗脫速度慢 ， 一些樣品可以與凝膠基質(zhì)充分平衡 ， 分離效果好 。 直徑太小時會發(fā)生 “ 管壁效應(yīng) ” 。 根據(jù)實驗結(jié)果 ， 在同一坐標(biāo)系中 ， 以收集的管號為橫坐標(biāo) ， 檢測物質(zhì)的量為縱坐標(biāo) ， 繪制二條 （ 蛋白質(zhì)及（ NH4） 2SO4） 洗脫曲線 。 當(dāng)樣液進(jìn)入膠床 ， 其彎月面與膠平面相切時 ， 暫停排液 ， 用滴管將洗脫劑沿柱內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)著加入 1cm高水位 ， 然后排液 ， 至其彎月面與膠平面相切 ， 再緩緩注入 3～ 5cm高的洗脫劑 。 必要時 ， 需倒出凝膠
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