腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)(存儲版)
【正文】 用此方法可以得到較純的 M 期細(xì)胞。 在上述同步化處理尚需配合以同步化程度的檢測，檢查的方法有兩種：流式細(xì)胞光度技術(shù)和放射性同位素技術(shù)。 DNA受損后鏈斷裂 , 成為一個松散的結(jié)構(gòu) , 在電場的作用下 ,松散的 DNA離開細(xì)胞核向正極移動 , 形成彗星似的拖尾 ,變換不同 pH緩沖液可檢測斷裂的是雙鏈還是單鏈。 （七）藥物對腫瘤細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用 細(xì)胞凋亡是一種受基因調(diào)控的細(xì)胞程序性死亡過程，細(xì)胞凋亡時(shí)表現(xiàn)為細(xì)胞體縮小，染色質(zhì)濃縮成大小不等的塊狀，并裂解為小片段。 瓊脂糖電泳分析法 利用該方法可檢測出呈云梯狀的寡聚核小體。方法是選定不能使一定量 DNA完全斷裂量的拓?fù)洚悩?gòu)酶處理 PBR322DNA后電泳可見超螺旋帶，同時(shí)加入不同濃度的藥物，如果藥物抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶，則超螺旋帶增強(qiáng)，若藥物增強(qiáng)拓?fù)洚悩?gòu)酶活性，則見螺旋帶減弱或消失。用熒光分光光度計(jì)測定激發(fā)光譜和發(fā)射光譜可觀察到這些變化。 G1期細(xì)胞體積最小，離出口最近而被最先洗出。重復(fù)實(shí)驗(yàn) T/C≤ 42%為有活性。 T/C大于 125%，并可重復(fù)，認(rèn)為有抗癌活性， T/C大于 150%，并可重復(fù)，認(rèn)為具有顯著活性。在 16解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)直徑大于75μ m的細(xì)胞集落。在培養(yǎng)后的的即刻、 7 天的細(xì)胞，用臺盼藍(lán)染色，細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后取細(xì)胞對數(shù)對培養(yǎng)時(shí)間作圖可獲細(xì)胞生長曲線。第七節(jié) 腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù) 腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法無外乎體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)兩種。培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞在初期為指數(shù)增殖期，隨著細(xì)胞密度的增加，因代謝產(chǎn)物的積聚和營養(yǎng)物質(zhì)的消耗，增殖趨于減緩乃至停止，進(jìn)入所謂的平臺期。移入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取接種于 DBA/2小鼠第 6～7 天之腹水，制成細(xì)胞懸液，每只小鼠（ DBF1 或 CDF1）腹腔接種活細(xì)胞 1 105，觀察體重變化，計(jì)算平均存活時(shí)間 T/C（ T治療組存活時(shí)間， C對 照組存活時(shí)間）。方法是取接種于 C57BL/6小鼠肌肉或腋窩皮下的 13～ 15天的 Lewis肺癌，制成細(xì)胞懸液接種 2 106個細(xì)胞于 BDF1小鼠皮下或腹腔內(nèi)， 12天后處死動物，作皮下接種者直接摘取腫瘤稱重，作腹腔接種者，將雙側(cè)后肢從髖關(guān)節(jié)處剪下，荷瘤肢重減去正常肢重即為瘤重。 離心洗脫法 離心洗脫法的原理是進(jìn)入細(xì)胞周期的的體積呈線性增加。 熒光光譜移動法 原理是在激發(fā)光的激發(fā)下， DNA藥物復(fù)合物的熒光發(fā)射光譜發(fā)生改變，譜峰向短波方向移動，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，同時(shí)激發(fā)光譜說發(fā)生
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