【正文】 .................................................................................. 12 3 結(jié)果與討論 ...................................................................................................... 13 草果 HSGCMS 條件選擇 .................................................................. 13 草果超聲提取直接進(jìn)樣揮發(fā)性成分分流比、柱流量、色譜柱的選擇 .......................................................................................................... 13 草果超聲提取頂空進(jìn)樣揮發(fā)性成分振蕩箱溫度和振蕩時(shí)間的紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 選擇 .............................................................................................................. 17 草果干粉頂空進(jìn)樣揮發(fā)性成分振蕩箱溫度和振蕩時(shí)間的選擇...................................................................................................................... 20 草果揮發(fā)性成分提取和進(jìn)樣方式的比較 ................................ 22 草果不同部位揮發(fā)性成分的測(cè)定 ....................................................... 24 草果不同部位揮發(fā)性成分 GCMS 指紋圖譜研究 ............................ 33 草果不同部位揮發(fā)性成分指紋圖譜的建立 ............................. 33 草果不同部位 揮發(fā)性成分指紋圖譜的相似度分析 ................. 33 草果不同部位揮發(fā)性成分指紋圖譜的聚類分析 ..................... 35 草果不同部位揮發(fā)性成分指紋圖譜的主成分分析 ................ 35 草果不同部位揮發(fā)性成分的主成分分析 ................................ 38 草果不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)性成分 GCMS 指紋圖譜研究 ............................ 42 草果不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)性成分指紋圖譜的建立 ............................. 42 草果不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)性成分指紋圖譜的相似度分析 ................ 43 草果不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)性成分指紋圖譜的聚類分析 ..................... 44 草果不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)性成分指紋圖譜的主成分分析 ................ 45 草果不同炮制方法揮發(fā)性成分 GCMS 指紋圖譜研究 .................... 48 草果不同炮制方法揮發(fā)性成分指紋圖譜的建立 ..................... 48 草果不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)性成 分指紋圖譜的相似度分析 ................ 48 草果不同炮制方法揮發(fā)性成分指紋圖譜的聚類分析 ............. 50 草果不同炮制方法揮發(fā)性成分指紋圖譜的主成分分析 ........ 50 4 結(jié)論 .................................................................................................................. 54 參考文獻(xiàn) .............................................................................................................. 57 致 謝 .................................................................................................................. 59 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 1 1 引言 草果為姜科豆蔻屬多年生草本植物 草果的果實(shí) ，全株有辛香味，為一種藥食同源的植物 [1]，干燥成熟的草果果實(shí)既是一種傳統(tǒng)的中藥材，又是日常生活中必備的食用香辛料。通過比較供試品和標(biāo)準(zhǔn)品圖譜間的相似程度 , 可鑒別中藥材真?zhèn)?，判斷中藥材或中成藥批次間質(zhì)量差異， 從而實(shí)現(xiàn)中藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)和控制。頂空分析包括靜態(tài)頂空分析、動(dòng)態(tài)頂空分析（吹掃捕集）、頂空 固相微萃取三大類，其中靜態(tài)頂空分析法具有快速、自動(dòng)化程度高、樣品消耗量少、檢測(cè)費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，并且可以最大程度地避免溶劑提取所帶來(lái)的分析本底，近年來(lái)在揮發(fā)油的氣味 分析方面得到了快速的發(fā)展 [9]。現(xiàn)在常用的方法是通過評(píng)價(jià)中藥指紋圖譜之間的相似度來(lái)判斷中藥的質(zhì)量是否穩(wěn)定合格。 《四川省中藥飲片炮制規(guī)范》 炒制 取原藥材放入鍋內(nèi)，用文火炒至外表黑褐，發(fā)泡，有香氣時(shí)取出， 放冷，篩去灰屑，用時(shí)搗碎 [13]。 主成分 分析 主成份分析是一種常用的多元統(tǒng)計(jì)方法，它在社會(huì)經(jīng)濟(jì)、企業(yè)管理及地質(zhì)、生化、醫(yī)藥等各個(gè)領(lǐng)域中都有著廣泛的應(yīng)用，如服裝行業(yè)的服裝定型、企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益分析、新開發(fā)項(xiàng)目目標(biāo)的制訂等問題 [19]。國(guó)內(nèi)眾多的研究人員正在嘗試運(yùn)用各種方法構(gòu)建中藥指紋圖譜應(yīng)用 于中藥材和中成藥的質(zhì)量控制，以尋求一種可行的中藥指紋圖譜控制質(zhì)量的法定標(biāo)準(zhǔn)。 WTO 在中草藥指南中同樣對(duì)植物制品和最終產(chǎn)品如果有效成分不能鑒別，可提供特征成分或混合成分的指紋圖譜鑒別以保證產(chǎn)品質(zhì)理的一致性。 樣品的制備 準(zhǔn)確稱取三份 的 草果干粉樣品 ， 其中兩份 分別置 于 50mL 的 具塞三角燒瓶中 ， 加入 正己烷 溶劑 ，超聲處理 30min， 超聲功率： 200W， 過濾 ，加 的 正己烷洗滌殘?jiān)?過濾 ，合并濾液 ， 取適量體積的溶液分別加入直接進(jìn)樣瓶和頂空進(jìn)樣瓶 ； 另 一份 草果干粉樣品直接加入頂空進(jìn)樣瓶，待測(cè)。柱 流量為 時(shí) GC 運(yùn)行時(shí)間很短，出峰很快 ， 但是 有 重疊峰 ； 當(dāng) 柱 流量為 時(shí) 重疊峰最少， GC 運(yùn)行 時(shí)間居中 ；當(dāng) 柱流量 為 時(shí)重疊 峰也少，但是 GC運(yùn)行 時(shí)間 最 長(zhǎng) ， 在實(shí)驗(yàn)過程中耗費(fèi)時(shí)間。 圖 311 不同振 蕩溫度 對(duì) 草果 干粉頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS 圖譜 注 ：從下往上 振 蕩溫度分別為 80℃、 100℃、 120℃、 150℃ 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 21 圖 312 不同振 蕩溫度 對(duì) 草果 干粉頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 時(shí)間 、信號(hào)三維圖譜 圖 313 不同振 蕩 時(shí)間對(duì) 草果 干粉頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS 圖譜 注 ：從下往上 振 蕩 時(shí)間 分別為 10min、 15min、 20min 3 結(jié)果與討論 22 圖 314 不同振 蕩 時(shí)間對(duì) 草果 干粉頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 時(shí)間、 信號(hào) 三維 圖譜 由 圖 31 313 和 31 314 可以 看出 ， 草果 干粉頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分的HS 振 蕩溫度為 150℃ ， 振 蕩時(shí)間為 10min 時(shí) ， GCMS 圖譜 出峰較多 、 重疊 峰 少、雜 峰少、峰形對(duì) 稱 、 分離效果 好 、節(jié)省 時(shí)間 ，因此 以下 干粉 頂空進(jìn)樣 實(shí)驗(yàn) 采用此HS 條件 為草果揮發(fā)性成分 測(cè)定 、 GCMS 指紋圖譜建立的 最佳 條件。 在 GCMS 色譜工作站上 打開數(shù)據(jù) 文件，選擇 積分 方式：峰面積，方法： 標(biāo)準(zhǔn) ， 選擇 峰面積大于 %的 色譜 峰， 分別 對(duì)草果不同部位的揮發(fā)性 GCMS 離子色譜圖 進(jìn)行積分 ，注冊(cè) 到質(zhì)譜 進(jìn)行 檢索， 輸出 檢索結(jié)果， 通過 質(zhì)譜 圖 庫(kù)、 進(jìn)行檢索， 保留 相似度大于 90%以上的化合物， 與 積分后的定性峰表進(jìn)行對(duì)照，并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn) 對(duì) 檢索結(jié)果進(jìn)行 分析，確定 草果揮發(fā)性成分 的 化學(xué)名稱 、分子式 ，通過化合物的 CAS 號(hào) 鑒定其結(jié)構(gòu)，用峰面積歸一法測(cè)定草果不同部位的揮發(fā)性 成分的 相對(duì)百分含量。 以下 實(shí)驗(yàn)采取此優(yōu)化條件進(jìn)行 。 3 結(jié)果與討論 18 圖 37 不同振 蕩溫度 對(duì) 草果 超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS 圖譜 注 ：從下往上 振 蕩溫度分別為 120℃、 130℃、 140℃、 150℃ 圖 38 不同振 蕩溫度 對(duì) 草果 超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 時(shí)間、 信號(hào)三維圖譜 紅河學(xué)院本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 19 圖 39 不同振 蕩 時(shí)間對(duì) 草果 超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 GCMS圖譜 注 ：從 下往上 振 蕩 時(shí)間 分別為 10min、 15min、 20min、 25min 圖 310 不同振 蕩 時(shí)間對(duì) 草果 超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分 影響 的 時(shí)間 、信號(hào)三維圖譜 3 結(jié)果與討論 20 由 圖 3 39 和 3 310 可以 看出 ， 草果 超聲提取頂空 進(jìn)樣 揮發(fā)性 成分的HS 振 蕩溫度為 140℃ ， 振 蕩時(shí)間為 20min 時(shí) ， GCMS 圖譜 出峰較多 、 重疊 峰 少、雜 峰少、峰形對(duì) 稱 、 分離效果 好 、節(jié)省 時(shí)間 ，因此 以下 干粉 頂空進(jìn)樣 實(shí)驗(yàn) 采用此HS 條件 為草果揮發(fā)性成分 測(cè)定 、 GCMS 指紋圖譜建立的 最佳 條件。所以 分流比為 20:1 時(shí)草果提取 的揮發(fā)性成分多，而且準(zhǔn)確。 ，吳江梅塞爾工業(yè)氣體有限公司 ） 氣相毛細(xì)管色譜柱 HPFFAP（ 30m ） 程序升溫 初始 溫度 80℃ ，保持 3min， 以 6℃ /min 速度升至 180℃ ，保持 2min 總運(yùn)行時(shí)間 MS 條件 離子源溫度 200℃ 接口溫度 220℃ 檢測(cè)器電壓 溶劑延遲時(shí)間 2min m/z 351000 直接 進(jìn)樣 條件 Cycle（ 循環(huán)） GCInj Syringe（ 針體積 ） 10uL Sample Volume（進(jìn)樣 體積 ） Air Volume（ 空氣體積） 0nL Pre cln slv1（ 進(jìn)樣前清洗 溶劑 1） 2 2 實(shí)驗(yàn)部分 10 續(xù)表 23 直接 進(jìn)樣 條件 Pre cln slv2（ 進(jìn)樣前 清洗 溶劑 2） 2 Pre cln spl（ 進(jìn)樣前清洗 樣品） 2 Fill Volume（ 排氣體積） Fill Speed（ 針桿速度） 5uL/s Fill Stokes（ 拉桿次數(shù)） 5 Pullup Del（ 補(bǔ)償時(shí)間） 300ms Inject to（進(jìn)樣 口 ） GCInj1（ 進(jìn)樣口 1） Inject Speed（ 進(jìn)樣速度） 50uL/s Pre Inj Del（ 進(jìn)樣前補(bǔ)償時(shí)間） 500ms Pst Inj Del（ 進(jìn)樣后補(bǔ)償時(shí)間） 500ms Pst Cln Slv1（ 進(jìn)樣后清洗 溶劑 1） 3 Pst Cln Slv2（ 進(jìn)樣后清洗 溶劑 2） 0 靜態(tài)頂空（ HS）條件 Cycle（ 循環(huán)） HSInj Syringe（ 進(jìn)樣針體積） Sample Volume（進(jìn)樣體積） 250uL Incubat Temp（振蕩箱溫度） 140℃（液體 ） 、 150℃（ 干粉） Incubat time（振蕩時(shí)間） 20min（液體 ） 、 10min（ 干粉） Agi Speed（振蕩速度） 250rpm Agi on Time（振 蕩開啟 時(shí) 間） 5s Agi off Time（ 振蕩停止時(shí)間 ） 2s Syringe Temp（進(jìn)樣 針溫度 ） ℃ Fill Speed（針 桿速度 ） 200ul/s Pullup Del（ 補(bǔ)償時(shí)間 ） 1s Inject