【正文】 因此，真正用于生產(chǎn)還需要做大量工作。已取得了巨大發(fā)展，已成功地在水果、蔬菜、糧食作物中表達了人類或動物的病原體抗原蛋白，并進行 I／ Ⅱ期臨床試驗，取得了一定效果。 ? 許多 IgG單抗已能在植物中表達，且在治療中有應用價值。 ? 1981年 Tabata和 Fujita等又用大的培養(yǎng)容器進行細胞懸浮培養(yǎng)并獲得了紫草寧衍生物。 ? 性味性寒，味甘、咸。該藥 1992年底獲美國 FDA批準上市。 ? 翻譯水平的檢測： ELISA， Western ? 選擇標記基因檢測法： ?抗生素抗性基因 ?除草劑抗性基因 ? 報告基因檢測法： ? 冠癭堿基因 ? Gus基因 (β 葡糖苷酸酶基因 ) ? Cat(氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶基因 ) ? (GFP)綠色熒光蛋白基因 Gus基因（ β 葡糖苷酸酶基因） 在植物細胞中所產(chǎn)生的葡糖苷酸酶在檢測上具有以下特點： ①在一定條件下與 XG1ucuionic acid底物發(fā)生作用，產(chǎn)生藍色沉淀，既可以用分光光度法測定，又可以直接觀察到植物組織中形成的藍色斑點。 ? 愈傷組織易接受外源 DNA，轉(zhuǎn)化效率高 ,適用性廣，變異大 ? 優(yōu)點：外植體來源廣，繁殖快，易接受外源基因， 轉(zhuǎn)化效率高。 ? 在禾本科作物上應用較廣泛 ? 基因槍法轉(zhuǎn)化的優(yōu)點有： 無宿主限制 ：農(nóng)桿菌介導法只對雙子葉植物敏感，限制了它的應用范圍。 ? 需要注意的是其他病毒侵染植株后可能會跟所用的載體病毒之間發(fā)生信息交換 ,進而導致載體病毒重新獲得其致病能力 Promoters used for expression in transgenic plants 35S, cauliflower mosaic virus 35S promoter CaMV 35S is a strong promoter that is active in essentially all dicot plant tissues. CaMV is a circular dsDNA genome virus ? 農(nóng)桿菌載體轉(zhuǎn)化系統(tǒng)對單子葉植物的局限性 ? （ 1） DNA直接吸收到植物細胞 制備原生質(zhì)體， 電穿孔法 PEG等介導基因轉(zhuǎn)化 （ 2）顯微注射法 ? 顯微注射，是利用顯微注射儀將外源 DNA直接注入受體細胞質(zhì)或細胞核中。 ? ② TLDNA區(qū)。該 DNA片段上的基因與腫瘤的形成有關 ? 直接參與轉(zhuǎn)移并整合的，僅是 TDNA兩端與其它序列交界處的 25bp不完全直接重復，為右界 (right border, RB)和左界 (left border,LB)。 ? Ti質(zhì)粒是約 160240kb的環(huán)狀 DNA分子。以除草劑為底物的酶的基因轉(zhuǎn)移 ? :從細菌中、植物組織中和動物體內(nèi)分離出相關抗性基因 ,轉(zhuǎn)入植物中 ? ? :抗旱、抗寒、抗熱和抗鹽 ? ? ? 二、轉(zhuǎn)基因植物技術原理和方法 （一）基因獲得 ? （ 1）氨基酸序列反推核酸序列，合成探針，從基因組或 cDNA文庫中篩選 ? 利用這種方法人類首次人工合成了胰島素基因。 ? 形態(tài)方面： Ri質(zhì)粒誘導快速生長的、非定向性、高分支的毛狀根的形成 ? 代謝方面： Ri質(zhì)粒轉(zhuǎn)化根能合成與原植物相同或相似的次生代謝物，并且發(fā)根合成次生代謝物具有遺傳穩(wěn)定性。 三、植物細胞生物反應器 ? 植物細胞易聚集化，比較脆弱，代謝途徑和代謝產(chǎn)物累積與細胞生長關系的復雜性，選擇合適的培養(yǎng)方法和反應器影像產(chǎn)物產(chǎn)量 ? 細胞培養(yǎng)周期長，次生代謝產(chǎn)物含量相對較低，提取困難，生物反應器技術還有待深入 各種生物反應器性能比較 ? 不同類型的生物反應器各有其優(yōu)缺點，而改進的攪拌式生物反應器和氣升式反應器可能更適合植物細胞的培養(yǎng)。 ? White的無機鹽含量較低 ， 適于 生根培養(yǎng) 。細胞高液泡化，極度脆弱，高度分化及有機化合物的高濃度。 ? 植物干細胞 ：植物胚性細胞（ embryogenic cells）即合子。第五章 植物細胞工程制藥 ? ，采用植物細胞和組織培養(yǎng)技術 培養(yǎng)植物的細胞，組織，器官 以獲得有 藥用價值的次生代謝產(chǎn)物 。 ? 分化的根莖葉中仍保留少數(shù)未分化或分化程度不高的細胞（遺留的胚性細胞） ? 細胞的脫分化 （ dedifferentiation):特定條件下，分化細胞被誘導，基因活動模式發(fā)生變化，改變原有的發(fā)育途徑，失去原有的分化狀態(tài)，轉(zhuǎn)變?yōu)榫叻稚芰Φ呐咝约毎? ? （ 1）植物細胞有獨特的培養(yǎng)時間及特征：重量的增加在對數(shù)期， 次生代謝產(chǎn)物在穩(wěn)定期積累 ? （ 2）植物細胞很少單一細胞生長，對數(shù)生長后期分泌量蛋白和粘多糖， 以非均相集合的細胞團懸浮生長 。 ? KM8p主要用于原生質(zhì)體培養(yǎng) ， 其特點是有機成分較復雜 ， 它包括了幾乎所有的單糖和維生素、呼吸代謝中的主要有機酸。 ? 一般來說，懸浮培養(yǎng)的細胞在干重不大于 20g/L時，以氣升式反應器為宜，而當干重超過 20g/L時，則改進的攪拌式生物反應器優(yōu)于其它類型的反應器 ? 我國發(fā)明的 “ 氣升內(nèi)錯流 ” 式植物細胞培養(yǎng)反應器，能夠適應植物細胞培養(yǎng)周期長，培養(yǎng)液隨培養(yǎng)進程而蒸發(fā)減少的生物反應過程；可抑制氣泡的聚合，減弱氣泡在液面破裂時產(chǎn)生的沖擊力對細胞的損傷；可提高降液區(qū)氣含率，消除降液區(qū)缺氧現(xiàn)象，并強化混合與氧傳遞，大大降低反應器高度。 ? 毛狀根生長快速和次級代謝產(chǎn)物含量高，特別適用于從木本植物和難于培養(yǎng)的植物中得到較高含量的次級代謝產(chǎn)物。 ? 雖然在早期采用這種方式已經(jīng)成功地克隆了許多基因。 ? Ti質(zhì)粒具有兩個區(qū)域， TDNA和 毒性區(qū)域 (vir) ? 還具有冠癭堿代謝 (opine catabolism)、復制原點 (ori) 。 TDNA區(qū)域內(nèi)的所有基因與轉(zhuǎn)移無關，將致瘤基因全部缺失即卸甲(disarmed)后，將其它序列插入到這個區(qū)域，形成的TDNA仍可將 RB至 LB內(nèi)的序列轉(zhuǎn)移并整合到植物基因組。該區(qū)中含有與毛狀根形成有關的 rolA、 B、 C、D基因群。顯微注射的一個重要問題是必須把受體細胞進行固定。而基因槍沒有物種限制。 ? 缺點：遺傳穩(wěn)定性差、嵌合體。 ②當加入 4甲基傘形酮基和葡萄糖苷酸時生成 4甲基傘形酮，發(fā)熒光（ λ=465nm ）。 ? 紫杉醇存在于紅豆杉屬植物的樹皮、葉及莖中， 其中樹皮中的含量最高。 ? 功能主治 涼血，活血，解毒透疹。 ? 日本在 1983年進行紫草細胞大規(guī)模培養(yǎng)來生產(chǎn)紫草寧。第一個在植物中表達的抗體是 IgG1，