高二生物血紅蛋白的提取和分離-免費(fèi)閱讀
【正文】 A溫度 B pH C滲透壓 D氧氣濃度 3．電泳是指帶電粒子在電場的作用下向著與其所帶電荷（ ）的電極移動(dòng)。 此外，離心速度過高和時(shí)間過長，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。 使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng)。 ③樣品滲入凝膠床： 加樣后打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口。 B、裝填：將凝膠懸浮液一次性緩慢倒入色譜柱內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝均勻。 ③頂塞的制作： 打孔 → 安裝玻璃管 。 (3)分離血紅蛋白溶液： ① 過程： 將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以 2020r/min的速度離心 10 min。 市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售。聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’ 亞甲基雙丙烯酰胺在 引發(fā)劑 和 催化劑 的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。 : : 通常由 1－ 2 種緩沖劑 溶解于水 中配制而成。 一、血紅蛋白的提取和分離 （一） 凝膠色譜法（ 分配色譜法 ） ： 大多數(shù)凝膠是由 多糖類化合物 （如 葡聚糖或 瓊脂糖 ）構(gòu)成的 多孔 小球體， 內(nèi)部有許多貫穿的通道 。 本課題學(xué)習(xí)目標(biāo) 體驗(yàn)從復(fù)雜體系中提取生物大分子的基本過程和方法，并了解色譜法、電泳法等分離生物大分子的基本原理。 根據(jù)被分離物質(zhì)的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的大 小，利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，來進(jìn)行分離。調(diào)節(jié)緩沖劑的 使用比例 就可以制得在 不同 PH范圍內(nèi) 使用的緩沖液。 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺（形成交聯(lián)） 丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’亞甲基雙丙烯酰胺的交聯(lián)共聚反應(yīng) 蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的 遷移率 取決 于它所帶 凈電荷 的多少以及 分子的大小 等因素。 二、實(shí)驗(yàn)操作 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 ： （一）蛋白質(zhì)提取和分離步驟 （二）操作過程 本課題可選用豬、牛、羊或其他脊椎 動(dòng)物的血液來分離血紅蛋白。 ②試管中溶液層次： 第 1層（最上層）：甲苯層（ 無色透明 ）；第 2層（中上層）：脂溶性物質(zhì)沉淀層（ 白色薄層固體 ）；第 3層（中下層）：血紅蛋白的水溶液層（ 紅色透明液體 ）；第4層（最下層）：雜質(zhì)沉淀層（ 暗紅色 ）。④組裝： 將上述三者按相應(yīng)位置組裝成一個(gè)整體 。 注意： 凝膠裝填時(shí)盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙。 ④洗脫： 小心加入 pH= 的 20mmol/l的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口進(jìn)行洗脫。 思考下面的問題： 讓血紅
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