植物組織培養(yǎng)步驟-免費(fèi)閱讀
【正文】 要選擇適當(dāng)?shù)念w粒狀基質(zhì)，保證良好的通氣作用。 （3）一定的溫、光條件。當(dāng)57天后，發(fā)現(xiàn)小苗有生長趨勢，可逐漸降低濕度，減少噴水次數(shù)，將拱棚兩端打開通風(fēng)，使小苗適應(yīng)濕度較小的條件。但要輕輕除去，應(yīng)避免造成傷根。 ?。?）腐殖土 腐殖土是由植物落葉經(jīng)腐爛所形成。或用至少小時(shí)烘烤來消滅其中的微生物。因此，為了改善試管苗的上述不良生理、形態(tài)特點(diǎn)，則必須經(jīng)過與外界相適應(yīng)的馴化處理，通常采取的措施有：對(duì)外界要增加濕度、減弱光照；對(duì)試管內(nèi)要通透氣體、增施二氧化碳肥料、逐步降低空氣濕度等。移植到試管外的植物苗光強(qiáng)度應(yīng)比移植前培養(yǎng)有所提高，并可適應(yīng)強(qiáng)度較高的漫射光，（約4000lx左右），以維持光合作用所需光照強(qiáng)度。但因經(jīng)胚狀體發(fā)育的苗數(shù)特別多，并且個(gè)體較小，所以也常需要一個(gè)低濃度或沒有植物激素的培養(yǎng)基培養(yǎng)的階段，以便壯苗生根。而第三種對(duì)幼根的生長有抑制作用。 呈現(xiàn)玻璃化的試管苗，其莖、葉表面無蠟質(zhì)，體內(nèi)的極性化合物水平較高，細(xì)胞持水力差，植株蒸騰作用強(qiáng)，無法進(jìn)行正常移栽。從某種意義上講，增殖只是儲(chǔ)備母株，而生根才是增殖材料的分流，生產(chǎn)出成品。這種方法簡便易行，能保持母種特性。 連續(xù)轉(zhuǎn)移 對(duì)容易褐變的材料可間隔224小時(shí)的培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上，這樣經(jīng)過連續(xù)處理710天后，褐變現(xiàn)象便會(huì)得到控制或大為減輕。 c、培養(yǎng)基成分 濃度過高的無機(jī)鹽會(huì)使某些觀賞植物的褐變程度增加，此外，細(xì)胞分裂素的水平過高也會(huì)刺激某些外植體的多酚氧化酶的活性，從而使褐變現(xiàn)象加深。它的出現(xiàn)是由于植物組織中的多酚氧化酶被激活，而使細(xì)胞的代謝發(fā)生變化所致。在許多常規(guī)方法中不能無性繁殖的種類，在試管條件下卻能較容易地產(chǎn)生不定芽而再生，如柏科，松科，銀杏等一些植物。 用靠培養(yǎng)定芽得到的培養(yǎng)物一般是莖節(jié)較長，有直立向上的莖梢，擴(kuò)繁時(shí)主要用切割莖段法，如香石竹、矮牽牛、菊花等。在幾個(gè)月內(nèi)可以將這種叢生苗的一個(gè)枝條轉(zhuǎn)接繼代，重復(fù)芽苗增殖的培養(yǎng)，并且迅速獲得多數(shù)的嫩莖。雖然該方法設(shè)備簡單，易行，但養(yǎng)分分布不均，生長速度不均衡，并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。然后用鑷子夾取一塊切好的外植體送入試管內(nèi)，輕輕插入培養(yǎng)基上。 無菌接種步驟： （1）將初步洗滌及切割的材料放入燒杯，帶入超凈臺(tái)上，用消毒劑滅菌，再用無菌水沖洗，最后瀝去水分，取出放置在滅過菌的紗布上或?yàn)V紙上。該表所列數(shù)字是徹底滅菌很保險(xiǎn)的數(shù)字，如果容器體積較大，但是放置的數(shù)量很少，也可以減少時(shí)間。高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。 滅菌是指用物理或化學(xué)的方法，殺死物體表面和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質(zhì)全部殺死。有菌的范疇是：凡是暴露在空氣中的物體，接觸自然水源的物體，至少它的表面都是有菌的。 1當(dāng)量NaOH配制：稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。 ?。?）分別取上面八種母液10ml倒入。 依次稱取 肌醇 10g 鹽酸硫胺素（VB1） 煙酸 甘氨酸 鹽酸吡哆醇（VB6） 配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。7H2O 配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放于冰箱中。7H2O 37g 各自配成1L的母液。 植物組織培養(yǎng)概念（狹義）指用植物各部分組織，也指在培養(yǎng)過程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再經(jīng)過再分化形成再生植物。 配制幾種母液 ?。?）配制MS大量元素母液 一般將大量元素分別配制成100倍的母液，使用時(shí)再分別稀釋100倍。5H2O MnSO45H2O CoCl2 激素母液的配制 各種生長素和細(xì)胞分裂素要單獨(dú)配制，不能混合在一起，生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當(dāng)量的NaOH溶解，細(xì)胞分裂素一般要先用1當(dāng)量的鹽酸溶解，然后再加蒸餾水定容。 ?。?）。 ?。?0）滅菌后從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基，平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上令其冷卻凝固。在自然條件下忍耐力強(qiáng)，生活條件要求簡單，繁殖力極強(qiáng)，條件適宜時(shí)便可大量滋生。 常用的滅菌方法可分為物理的和化學(xué)的兩類，即：物理方法如干熱（烘燒和灼燒）、濕熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（紫外線、超聲波、微波）、過濾、清洗和大量無菌水沖洗等措施；化學(xué)方法是使用升汞、甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、來蘇水、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理。常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。然后搽拭工作臺(tái)面； （5）先用酒精棉球搽拭接種工具，再將鑷子和剪刀從頭至尾過火一遍，然后反復(fù)過火尖端處，對(duì)培養(yǎng)皿要過火烤干； ?。?）接種時(shí)，接種員雙手不能離開工作臺(tái)，不能說話、走動(dòng)和咳嗽等； ?。?）接種完畢后要清理干凈工作臺(tái)，可用紫外線燈滅菌30分鐘，若連續(xù)接種，每5天要大強(qiáng)度滅菌一次。 ?。?）用灼燒消毒過的器械將切割好的外植體插植或放置到培養(yǎng)基上。 四、培養(yǎng) 培養(yǎng)指把培養(yǎng)材
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