畢業(yè)論文巴西橡膠樹(shù)乙烯途徑中抑制因子ein3的western印跡-免費(fèi)閱讀
【正文】 翟老師以認(rèn)真、負(fù)責(zé)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕虒W(xué)態(tài)度讓我受益匪淺。通過(guò)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳所得的凝膠染色脫色后與雙色預(yù)染寬分子量蛋白Marker的說(shuō)明書中的條帶大小進(jìn)行比對(duì)得出橡膠葉片總蛋白的大小介于40kD55kD之間。取二氨基聯(lián)苯胺40倍濃縮液、雙氧水40倍濃縮液、TBS40倍濃縮液各一滴于2ml試管中，加入2ml的去離子水震蕩使其混合均勻。 ④TBS漂洗5min，加入含10%的脫脂奶粉的TBS封閉液在4度的環(huán)境下封閉過(guò)夜。裝板全過(guò)程在盛有轉(zhuǎn)移液的培養(yǎng)皿中進(jìn)行，濾紙之間以及濾紙和PVDF膜要趕走所有的氣泡。 電泳完成后將兩塊膠分別拆下去掉濃縮膠后在其右上角切去一小塊膠以確定膠的正反面。（8） 取恢復(fù)室溫后的液體1ml在分光光度計(jì)中測(cè)OD612。尿素和β巰基乙醇會(huì)干擾BCA 法的測(cè)定, 所以BCA 法不適于含有尿素和β巰基乙醇的變性液中蛋白含量的測(cè)定。提取完成后稱其重量配平后在14000rpm的離心機(jī)中離心10min。l 1M Triscl 630181。［7］除此之外，物理壓力、昆蟲(chóng)或微生物的侵襲、化學(xué)處理、輻射、干旱和極端溫度等也能刺激植物組織產(chǎn)生乙烯。[4]在所有的維管植物生命活動(dòng)中乙烯都是通過(guò)楊氏循環(huán)合成的，即S腺苷甲硫氨酸被ACC合成酶所催化形成乙烯前體1氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC）。[1]中國(guó)植膠區(qū)地處熱帶和南亞熱帶地區(qū),水熱條件充沛,具有發(fā)展橡膠樹(shù)的一定條件,特別是海南、云南的西雙版納等地,常年基本無(wú)霜,年均日照時(shí)數(shù)達(dá)到17 00一2400hr ,℃,℃以上。在此過(guò)程中運(yùn)用三種不同的方法測(cè)定葉片蛋白的濃度，并對(duì)其準(zhǔn)確性進(jìn)行對(duì)比分析。因此對(duì)巴西橡膠樹(shù)的研究有著極其重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和戰(zhàn)略作用。保障我國(guó)的天然橡膠資源的安全,事關(guān)中國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和穩(wěn)定,對(duì)世界天然橡膠的安全保障也具有非常重要的意義。[3]我國(guó)橡膠產(chǎn)業(yè)發(fā)展的戰(zhàn)略定位是“鞏固”、“提升”、“穩(wěn)定”、“發(fā)展”。乙烯最重要的生物學(xué)反應(yīng)是黃化胚芽的三重反應(yīng)：即莖桿的偏向水平生長(zhǎng)、下胚軸膨脹變粗和頂端鉤狀芽彎曲的加劇。l 10% APS 70181。后面分別隔1h、4h、6h、12h、24h從兩株橡膠樹(shù)上取葉片鋁箔包裹并標(biāo)記后保存于80度冰箱。[1] BCA 法的測(cè)定原理為蛋白質(zhì)價(jià)銅離子還原成亞銅離子, 后者在堿性溶液中與BCA 結(jié)合生成紫紅色絡(luò)合物。（5） 棄去蛋白固定液后加入Esen staining buffer在搖床上染色15min。在凝膠的左邊第一個(gè)孔中各加入6μl的雙色預(yù)染寬分子量蛋白Marker。（2）平衡：將膠放入轉(zhuǎn)移液中在搖床上平衡以除去SDS。（6）交聯(lián)和封閉： ①將膜取出后，先用去離子水清洗，然后入1TBS中浸洗5min，%戊二醛的TBS中交聯(lián)45min。二氨基聯(lián)苯胺（DAB）是過(guò)氧化物酶的生色底物，在過(guò)氧化氫存在的情況下失去電子從而呈現(xiàn)出顏色的變化和積累，形成淺棕色不溶性的產(chǎn)物。相對(duì)于BCA法而言，Esen method和Bradford法所得樣品的OD值比較接近，且各個(gè)處理的濃度變化差異也相差不大。致 謝本論文是在翟金玲副教授的悉心指導(dǎo)下完成的。另外，還要感謝王啟超師兄、范玉龍師兄等師兄師姐在我實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)困難時(shí)的幫助和對(duì)此實(shí)驗(yàn)的支持。P4結(jié)果與分析 method 定蛋白濃度（1）OD612數(shù)據(jù)記錄表Protein probeOD612 wert1OD612 wert2averageBSA（mg/ml）Sample 0h 1h 4h 6h 12h 24h（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線（3）樣品蛋白濃度（OD612值代入y=+）樣品蛋白濃度(μg/μl)上樣量(μl)0h1h4h6h12h24h（1）Bradford數(shù)據(jù)記錄表Protein probeBradford wert1Bradford wert2averageBSA（mg/ml）0 000 Sample 0h 1h 4h 6h 12h 24h(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線（3）樣品蛋白濃度（OD值代入y=+）樣品蛋白濃度(μg/μl)上樣量(μl)0h1h4h6216h12h24h（1）BCA數(shù)
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