雙向凝膠電泳技術(shù)ppt課件-免費閱讀
【正文】 它不僅作用于蛋白質(zhì)，還可用于周圍溶劑（通常是水）?？捡R斯亮蘭是 3種染色法中靈敏度最低的，檢測限度約為每點 10ng蛋白，但可以染色多種蛋白質(zhì)，并能與蛋白量呈兩個最高數(shù)量級的線性關(guān)系。此外，碘乙酰胺還可以烷基化 IEF膠內(nèi)的自由 DTT，否則自由 DTT在第二向 SDSPAGE膠遷移，會產(chǎn)生點條紋的假象。根據(jù)電泳方式的不同， IEF可分為管狀、薄層、垂直和水平等電聚焦。 (4)難溶蛋白的檢測，這類蛋白中包括一些重要的膜蛋白 (5)得到高質(zhì)量的雙向凝膠電泳需要精湛的技術(shù)，因此迫切需要自動二維電泳儀的出現(xiàn)。一般的雙向電泳也能分辨 10003000個蛋白質(zhì)點。 蛋白質(zhì)定量和上樣： （ 1）固相 PH梯度干膠條（ immobilinePH Gradient,IPG）水化、 等電聚焦 ； （ 2） IPG的平衡； （ 3） SDSPAGE； (4)蛋白質(zhì)檢測 ：考馬斯亮蘭 染色 或銀染色； 圖像分析及數(shù)據(jù)處理： 將染色后凝膠放在 GS710,光密度掃描儀上，掃描后的圖像用 PDQUEST 2DE軟件分析，選擇部分匹配的蛋白質(zhì)斑點進行比較。 雙向凝膠電泳技術(shù) twodimensional gel electrophoresis technology (2DE) ? 定義一 ：以凝膠為載體的雙向電泳。 制備原則： 由于雙向電泳所分析樣品的多樣性，沒有一種通用的制備方法適用于各種樣品。因此，雙向電泳被廣泛應(yīng)用與農(nóng)業(yè)，醫(yī)學(xué)等研究領(lǐng)域。 細胞處理： 對于組織細胞，首先需將其破碎，盡可能地將蛋白質(zhì)組分溶解在緩沖液中，以便在適當(dāng)?shù)碾娪緱l件下分離。 聚焦完成后，膠條既可以在中間電壓 5001000V下短時間保持，便于隨時進行第二向的平衡，也可以置于 80℃冰箱中進行長期保存。為減少酰胺基組的烷基
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