dna復(fù)制是半保留式的-免費(fèi)閱讀
【正文】 8. 復(fù)制的忠實(shí)性非常高，主要是由于 DNA聚合酶具有3′→ 5′ 外切酶的活性。真核生物 DNA的復(fù)制也是雙向進(jìn)行的，但與 ，可以在許多復(fù)制起點(diǎn)同時(shí)雙向進(jìn)行復(fù)制。新鏈按 5′→ 3′ 方向生長(zhǎng)。 ? 損傷誘導(dǎo)一種特異性較低的新的 DNA聚合酶 ， 以及重組酶等的產(chǎn)生 。 這樣的錯(cuò)誤可以通過 3個(gè)蛋白質(zhì)（ MutS、 MutH和 MutL） 校正 。然后在 DNA聚合酶催化下按照互補(bǔ)鏈填充缺口，切口最后通過 DNA連接酶連接。 胸腺嘧啶形成的示意圖 2 在 5種基本的修復(fù)系統(tǒng) 5種基本類型的 DNA修復(fù)系統(tǒng)：直接修復(fù) ， (核苷酸與堿基 )切除修復(fù) 、 錯(cuò)配修復(fù) 、 重組修復(fù)和 SOS修復(fù) 。 利用 RNA作為模板，逆轉(zhuǎn)錄酶可以催化 DNA合成 mRNA RNADNA雜化體 單鏈 DNA 雙鏈 DNA mRNA的cDNA拷貝 逆轉(zhuǎn)錄病毒生活循環(huán)中的 7個(gè)主要過程 ① 逆轉(zhuǎn)錄病毒 進(jìn)入宿主細(xì)胞 ； ② 在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下 ， 以病毒的 RNA為模板合成 互 補(bǔ) DNA（ cDNA） ， 形成 RNADNA雜化體 ， 逆轉(zhuǎn)錄酶 將雜化體中的 RNA降解 ， 同時(shí)以剩下的 DNA鏈為模 板合成另一條互補(bǔ)的 DNA鏈 ， 結(jié)果形成雙鏈 DNA； ③ 雙鏈 DNA整合到宿主 DNA中； ④ 利用宿主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄機(jī)器生產(chǎn)大量的 病毒 RNA； ⑤ 轉(zhuǎn)錄出的 mRNA翻譯成病毒的包膜蛋白 ， 逆轉(zhuǎn)錄酶 和殼體蛋白； ⑥ 將病毒 RNA、 逆轉(zhuǎn)錄酶和殼體蛋白組裝成病毒 的核殼體； ⑦ 核殼體結(jié)合包膜蛋白形成 完整的逆轉(zhuǎn)錄病毒 。但前導(dǎo)鏈和滯后鏈的起點(diǎn)不在同一位點(diǎn)。真核生物快速生長(zhǎng)時(shí)，往往采用更多的復(fù)制起點(diǎn)。雖然染色體數(shù)目的增加使得基因組更復(fù)雜， 但所有生物中的 DNA復(fù)制的生物化學(xué)機(jī)制基本上是類似的 。 順時(shí)針陷井 由 terB和 terC構(gòu)成 ， 反時(shí)針陷井由 terA、 terD和terE構(gòu)成 。oriC區(qū)含有兩種重復(fù)類型的多個(gè)拷貝 ， DnaA結(jié)合部位含有一個(gè)特殊的 9堿基對(duì)重復(fù)序列 （ 4個(gè)拷貝 ） ， 另一部位是富含 AT13堿基對(duì)的重復(fù)區(qū) （ 3個(gè)拷貝 ） （ 圖 a） 。 在復(fù)制起點(diǎn)處前導(dǎo)鏈合成開始時(shí)也需要引發(fā)酶 。 拓?fù)洚悩?gòu)酶 I和 II： 是用來將解旋酶作用后產(chǎn)生的扭轉(zhuǎn)張力釋放掉 。 通過這種方式 ， 使得切口沿滯后鏈移動(dòng) 。 DNA聚合酶 III不能從頭開始進(jìn)行聚合反應(yīng) ， 它只能將核苷酸加到已有的多核苷酸鏈上 。 DNA聚合酶 III催化復(fù)制叉處的聚合反應(yīng) 表 大腸桿菌和哺乳動(dòng)物 DNA 聚合酶特征DNA 聚合酶 主要功能 分子量 3 ˊ 5 ˊ 外切酶活性 其它功能 i 酶聚合酶 I 切去滯后鏈上的 RN A引物，并填充核苷酸109,000 有 還有 5 ˊ 3 ˊ外切酶活性聚合酶 II DNA 修復(fù) 90,000 有聚合酶 III DNA 合成中鏈的延伸 900,000 有哺乳動(dòng)物酶? （ I ） 滯后鏈的合成 300,000 沒有? （ III ） 前導(dǎo)鏈的合成 200,000 有? （ II ） DNA 修復(fù) 250,000 有? DNA 修復(fù) 40,000 沒有? 線粒體 DNA 復(fù)制 250,000 有見 P414；其中； Klenow片段： PolIII的結(jié)構(gòu)和功能，見P416 聚合反應(yīng)的基本過程都是通過新合成的鏈的 3ˊ OH對(duì)進(jìn)入的新的核苷三磷酸（用 d NTP）的 ?磷進(jìn)行親核攻擊 ，導(dǎo)致磷酯鍵斷裂，結(jié)果在鏈的 3ˊ 末端加上了一個(gè)新的核苷酸，即延長(zhǎng)了一個(gè)核苷酸 。 DNA復(fù)制方式是半保留式 首先在 15NH4Cl培養(yǎng)基中培養(yǎng) 然后轉(zhuǎn)到 14NH4Cl培養(yǎng)基中培養(yǎng) 只在15NH4Cl 中培養(yǎng) 只在14NH4Cl 中培養(yǎng) 14N對(duì)照系統(tǒng) 15N對(duì)照系統(tǒng) 第一代 第二代 提取 DNA，進(jìn)行密度梯度超離心 細(xì)胞 用 15N標(biāo)記的親本 DNA 14N中第一次復(fù)制 14N中第二次復(fù)制 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 DNA復(fù)制是半保留復(fù)制 （ a）密度梯度離心的 DNA帶 （ b）對(duì)應(yīng)于左側(cè) DNA帶的解釋 Meselsonstahl 實(shí)驗(yàn) 從前面圖可以看出，在含有 14N氮源介質(zhì)中培養(yǎng)一代的 DNA經(jīng)密度梯度離心后， DNA帶位于在 15N培養(yǎng)基中的 DNA帶的上面。 在含有 14N氮源介質(zhì)中培養(yǎng)兩代后的 DNA經(jīng)密度梯度離心后，出現(xiàn)兩條帶，第一條帶位置與培養(yǎng)一帶的DNA帶相同，另一條 DNA帶位于第一條帶上面，說明第二條帶密度更輕。 釋放出的焦磷酸經(jīng)焦磷酸酶水解有利于聚合反應(yīng)的進(jìn)行 雙重核對(duì)功能：① DNA聚合酶的選擇作用； ② 3’5’外切酶的校對(duì)作用。 所以為了合成滯后鏈 ， 需要在復(fù)制叉處合成一系列的短的 RNA引物 。 在完成切去RNA引物
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