生化技術(shù)課件第一章生命大分子物質(zhì)的制備［ppt課件］-免費(fèi)閱讀
【正文】 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 液態(tài)貯藏時(shí)還應(yīng)注意以下幾點(diǎn)： 樣品不能太稀， 必須濃縮到一定濃度才能封裝貯藏，樣品太稀易使生物大分子變性。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 影響生物大分子樣品保存的主要因素有： ⑴ 空氣： 空氣的影響主要是潮解、微生物污染和自動(dòng)氧化。 ② 能較大地縮小體積 。 ④ 以生物學(xué)功能專(zhuān)一性為依據(jù)的方法： 親和層析等。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 在低溫低壓下，冰很易升華為氣體。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 : ?在生物大分子的制備過(guò)程中 ， 除鹽 、 除少量有機(jī)溶劑 、 除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品 等都要用到透析的技術(shù) 。 ?還有金屬離子 、 提取液的比例等因素 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 第五節(jié) 濃 縮 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 : ?沉淀 是溶液中的溶質(zhì)由液相變成固相析出的過(guò)程 。 ?加入抑制劑或調(diào)節(jié)提取液的 pH、離子強(qiáng)度或極性等方法使相應(yīng)的水解酶失去活性，防止它們對(duì)欲提純的蛋白質(zhì)、酶及核酸的降解作用。遠(yuǎn)離等電點(diǎn)的 pH值， 溶解度增加。 ： 利用各種水解酶，如溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶和酯酶等，于 37℃ ， pH8，處理 15分鐘，可以專(zhuān)一性地將細(xì)胞壁分解。 注意 溫度 的影響 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 二、物理法： ： 此法是借助超聲波的振動(dòng)力破碎細(xì)胞壁和細(xì)胞器。 最后與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)即可計(jì)算出該待測(cè)蛋白質(zhì)溶液的濃度 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 利用有些生命大分子物質(zhì)自身可以吸收特定光波的能量后，發(fā)出熒光的特性而建立的一種方法。 ?紫外光譜法、可見(jiàn)光光譜法、熒光光譜法、濁度法 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 紫外光譜法 利用某些生物大分子具有吸收紫外光的性質(zhì)而建立的一種方法。 如 葉片 :直接洗凈 植物種子 :泡脹或粉碎 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 微生物： 種類(lèi)多，繁殖快、培養(yǎng)簡(jiǎn)便、易誘變、不受季節(jié)的影響，是常用的材料。所選用的材料主要依據(jù) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?來(lái)確定。 ②在不同溫度、 pH值和各種緩沖液中生物大分子的 穩(wěn)定性 。 生物大分子的分離純化與制備是一件十分細(xì)致而困難的工作。 ?闡明生物大分子復(fù)雜的結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系是生物學(xué)的主要任務(wù) 。 ⑸生物材料的 組成極其復(fù)雜 ，常常包含有數(shù)百種乃至幾千種化合物，方法的通用性較差 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) ?蛋白質(zhì)的兩性電離和 等電點(diǎn) ?蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) ?蛋白質(zhì)的變性、復(fù)性、沉淀和凝固 ?蛋白質(zhì)的紫外吸收 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 ?目前純化蛋白質(zhì)等生物大分子的關(guān)鍵技術(shù)是電泳、層析和離心三大技術(shù)。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 例二： 酸性磷酸酶分離純化與活性測(cè)定 含量：小麥的胚芽中含量高 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 材料盡可能保持新鮮，盡快加工處理，以防有效成分降解、破壞，必要時(shí)可冷凍、干燥處理。 ?實(shí)際操作中盡可能多用 儀器分析方法 ，以使分析測(cè)定更加快速、簡(jiǎn)便。 ?可見(jiàn)光光譜法是基于 有色溶液對(duì)光的選擇性吸收而建立起來(lái)的一種分析方法。 ?如動(dòng)物臟器的細(xì)胞膜較脆弱，容易破碎，植物和微生物由于具有較堅(jiān)固的纖維素、半纖維素組成的細(xì)胞壁，要采取專(zhuān)門(mén)的細(xì)胞破碎方法。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 三、化學(xué)與生物化學(xué)方法： ： 將新鮮的生物材料存放于一定的 pH和適當(dāng)?shù)臏囟认?， 細(xì)胞結(jié)構(gòu)在自身所具有的各種水解酶 （ 如蛋白酶和酯酶等 ） 的作用下發(fā)生溶解 ， 使細(xì)胞內(nèi)含物釋放出來(lái) 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 二、抽提有效成分的影響因子 ?稀鹽溶液和緩沖液 對(duì)蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性好，溶解度大，是提取蛋白質(zhì)和酶最常用的溶劑。向水溶液中加入蔗糖或甘油可使其極性降低；增加離子強(qiáng)度（如加入 KCl、 NaCl、 NH4Cl或(NH4)2SO4）可以增加溶液的極性。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 6) 氧化： ?因?yàn)橐话愕鞍踪|(zhì)都含有相當(dāng)數(shù)量的巰基，有些巰基常常是活性部位的必需基團(tuán)。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 : ?超濾法 是使用一種特別的薄膜對(duì)溶液中各種溶質(zhì)分子進(jìn)行 選擇性過(guò)濾 的方法 ， 液體在一定壓力下（ 氮?dú)鈮夯蛘婵毡脡?） 通過(guò)膜時(shí) ， 溶劑和小分子透過(guò) ， 大分子受阻保留 。 生命科學(xué)學(xué)院：金晶 Copyright(C) 2022 : ?減壓加溫蒸發(fā)濃縮 :通過(guò)降低液面壓力使液體沸點(diǎn)降低，減壓的真空度愈高，液體沸點(diǎn)降得愈低，蒸發(fā)愈快，此法適用于一些 不耐熱 的
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