生物工藝學(xué)下游技術(shù)第三章細(xì)胞破碎-免費(fèi)閱讀
【正文】 細(xì)胞的破碎與上游培養(yǎng)過(guò)程有關(guān)。 1. 破碎率的測(cè)定 1)直接測(cè)定法 2)目的產(chǎn)物測(cè)定法 3)導(dǎo)電率測(cè)定法 采用染色的方法把破碎的細(xì)胞與未破碎的細(xì)胞區(qū)別開(kāi)來(lái)。 僅適用于細(xì)胞壁較脆弱的細(xì)胞或細(xì)胞壁預(yù)先用酶處理或在培養(yǎng)過(guò)程中加入某些抑制劑（如抗生素等），使細(xì)胞壁有缺陷，強(qiáng)度減弱。 （ 3）有機(jī)溶劑 （ 4）變性劑 鹽酸胍（ Guanidine hydrochloride）和脲（ Urea）是常用的變性劑。 如 Triton X100是一種非離子型清潔劑 ，對(duì)疏水性物質(zhì)具有很強(qiáng)的親和力，能結(jié)合并溶解磷脂，破壞內(nèi)膜的磷脂雙分子層，使某些胞內(nèi)物質(zhì)釋放出來(lái)。 酶溶法的優(yōu)點(diǎn)： 選擇性釋放產(chǎn)物，條件溫和，核酸泄出量少，細(xì)胞外形完整。 ?易造成堵塞的團(tuán)狀或絲狀真菌， ?較小的革蘭氏陽(yáng)性菌， ?含有包含體的基因工程菌（因包含體堅(jiān)硬，易損傷勻漿閥） 不宜采用高壓勻漿法。在珠液分離器的協(xié)助下，珠子被滯留在破碎室內(nèi)，漿液流出從而實(shí)現(xiàn)連續(xù)操作。 革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌 酵母菌的細(xì)胞壁 ? 主要成分為 葡聚糖與甘露聚糖以及蛋白質(zhì) 等，比革蘭氏陽(yáng)性菌稍厚，而且其厚度隨菌齡增加而增加。 ? 細(xì)胞膜 使細(xì)胞內(nèi)外保持一定的 濃度差 ，它主要由蛋白質(zhì)和脂質(zhì)組成 ，強(qiáng)度比較差，易受滲透壓沖擊而破碎。 ? 對(duì)于 胞外產(chǎn)物 只需直接將發(fā)酵液預(yù)處理及過(guò)濾，獲得澄清的濾液，作為進(jìn)一步純化的出發(fā)原液， ? 對(duì)于 胞內(nèi)產(chǎn)物 ，則需首先收集菌體進(jìn)行細(xì)胞破碎，使代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)入液相中，然后，再進(jìn)行細(xì)胞碎片 的分離。短肽接在 N－乙酰胞壁酸上，相鄰的短肽又交叉相聯(lián)，形成了網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。 ? 幾丁質(zhì)就是由 N 乙酰葡萄糖胺分子，以 b 1,4 葡萄糖苷鍵連接而成的多聚糖。 （ Highpressure homogenization） —— 大規(guī)模細(xì)胞破碎的常用方法 利用高壓使細(xì)胞懸浮液通過(guò)針形閥，由于突然減壓和高速?zèng)_擊撞擊環(huán)使細(xì)胞破碎，細(xì)胞懸浮液自高壓室針形閥噴出時(shí)，每秒速度高達(dá)幾百米，高速噴出的漿液又射到靜止的撞擊環(huán)上，被迫改變方向從出口管流出。 但超聲波產(chǎn)生的化學(xué)自由基團(tuán)能使某些敏感性活性物質(zhì)失活。 ?缺點(diǎn)是：對(duì)不穩(wěn)定的微生物，易引起所需蛋白質(zhì)的變性，自溶后細(xì)胞懸浮液粘度增大，過(guò)濾速度下降。這些區(qū)域由內(nèi)層膜的磷脂來(lái)填補(bǔ)，從而導(dǎo)致內(nèi)層膜通透性的增強(qiáng)。細(xì)胞破碎是由于冰晶體的磨損，使包埋在冰中的微生物變形而引起的。當(dāng)采用丙酮、丁醇或緩沖液等對(duì)干燥細(xì)胞進(jìn)行處理時(shí)，胞內(nèi)物質(zhì)就容易被抽提出來(lái)。 如用溶解酶預(yù)處理面包酵母，然后高壓勻漿， 95MPa壓力下勻漿 4次，總破碎率接近 100%。 。 細(xì)胞破碎與固液分離緊密相關(guān) 。 適用于細(xì)胞壁較脆弱的菌體，破碎率較低，需反復(fù)多次，此外，在凍
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