限制性內(nèi)切酶ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 構(gòu)象的影響主要指切割線性 DNA 和超螺旋 DNA 時(shí)的活性，如與切割 λDNA 相比， EcoRⅠ 、 PstⅠ 、 SalⅠ 需要至少 倍的酶來切割 pBR322 的超螺旋 DNA 。相對來說， EcoRⅠ 對兩端的序列長度要求較小，在識別序列外側(cè)有一個堿基對時(shí)在 2 小時(shí)的切割活性可達(dá) 90% 。ClaⅠ AT↓CGAT AccⅠ GT↓MKAC （ pUC19） 6．識別特殊系列的 Ⅰ prefix 和 pⅠ prefix 系列酶 有些線粒體、葉綠體、核 DNA 、 T 偶數(shù)噬菌體含有一些編碼內(nèi)切酶的內(nèi)含子，有些 intein （ protein splicing element） 也有內(nèi)切酶的活性，這兩類內(nèi)切核酸酶稱為 Ⅰ prefix 和 pⅠ prefix 系列內(nèi)切酶，它們識別的序列很長。這些酶統(tǒng)稱為同尾酶。 ① 同序同切酶 這些酶識別序列和切割位置都相同，如 HindⅡ 與 HincⅡ 識別切割位點(diǎn)為 GTY↓RAC ， HpaⅡ 與 HapⅡ 識別切割位點(diǎn)為 C↓CGG ， MobⅠ 與 Sau3AⅠ 識別切割位點(diǎn)為 ↓GATC 。 突出粘性末端，如 KpnⅠ 。 有一些限制酶識別的序列呈間斷對稱，對稱序列之間含有若干個任意堿基。當(dāng)識別序列為 4 個和 6 個堿基時(shí)，它們可識別的序列在完全隨機(jī)的情況下，平均每 256 個和 4096 個堿基中會出現(xiàn)一個識別位點(diǎn)（ 4^4=256， 4^6=4096）。 AA176。 在 Ⅱ 型限制酶中還有一類特殊的類型，該酶只切割雙鏈 DNA 中的一條鏈，造成一個切口，這類限制酶也稱切口酶 （ nicking enzyme），如 NBI 。 Ⅱ 型（ type Ⅱ ）限制與修飾系統(tǒng)所占的比例最大，達(dá) 93% 。 104 的存活率是由宿主修飾系統(tǒng)作用的結(jié)果，此時(shí)限制系統(tǒng)還未起作用。它可以將外來的 DNA切斷的酶，即能夠限制異源 DNA的侵入并使之失去活力，但對自己的 DNA卻無損害作用，這樣可以保護(hù)細(xì)胞原有的遺傳信息。它能識別外源 DNA并將其降解。 l 噬菌體表現(xiàn)的現(xiàn)象便具有代表性和普遍性，其在不同宿主中的轉(zhuǎn)染頻率可說明這一問題（表 21）。通過甲基化作用達(dá)到識別自身遺傳物質(zhì)和外來遺傳物質(zhì)的目的。 Ⅱ s 型（ type Ⅱ s）限制與修飾系統(tǒng)，占 5% ，與 Ⅱ 型具有相似的輔因子要求，但識別位點(diǎn)是非對稱，也是非間斷的，長度為 47bp ，切割位點(diǎn)可能在識別位點(diǎn)一側(cè)的 20bp 范圍內(nèi)。 EcoB 編碼基因的結(jié)構(gòu)為 R2M4S2 。它們的識別位點(diǎn)分別是 AGACC 和 CAGCAG ，切割位點(diǎn)則在下游 2426bp 處。識別序列后面括號內(nèi)的數(shù)字表示在兩條鏈上的切割位置。 BcgⅠ ↓10（ N） CGA（ N） 6TGC（ N） 12↓； ↑12（ N） CGA（ N） 6ACG（ N） 10↑ TspRⅠ NNCAC（ G） TGNN↓ ↑NNGTG（ C） ACNN 1．限制酶產(chǎn)生匹配粘端（ Matched end） 識別位點(diǎn)為回文對稱結(jié)構(gòu)的序列經(jīng)限制酶切割后，產(chǎn)生的末端為匹配粘端，亦即粘性末端（ cohesive end），這樣形成的兩個末端是相同的，也是互補(bǔ)的。如 AccⅠ ，它的識別切割位點(diǎn)如下，其中 GTAGAC 和 GTCTAC 為非對稱： GT↓AT/CGAC CATA/GC↑TG 有些限制酶識別間隔序列，間隔區(qū)域的序列是任意的，如 DraⅢ 和 EarⅠ ，它們的識別切割位點(diǎn)分
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