20xx年醫(yī)學專題—大豆蛋白的提取與含量測定-預覽頁
【正文】 蛋白質濃度見第二實驗部分酚法測定蛋白質濃度見第二實驗部分第八 頁 ，共十八 頁 。?? 目的要求目的要求?? 掌握掌握 Folin酚法測定蛋白濃度的原理和方法實驗原理酚法測定蛋白濃度的原理和方法實驗原理?? 蛋白質濃度可以從它們的物理化學蛋白質濃度可以從它們的物理化學 (hu224。)方法，如定氮、雙縮脲反方法，如定氮、雙縮脲反應，應， Folin酚試劑反應等方法來計算。 Folin酚法靈敏度高，比雙縮脲法靈敏酚法靈敏度高，比雙縮脲法靈敏 100倍。試劑乙中的磷鉬酸和磷鎢酸在堿性條件下不穩(wěn)定，易被酚類還原而呈蘭色（鉬蘭和鎢蘭混合物）。?? 由于蛋白由于蛋白 (d224。i)濃度有較好的線性關系。?? 樣品中含酚類化合物及檸檬酸均有干擾作用，如果樣品酸樣品中含酚類化合物及檸檬酸均有干擾作用，如果樣品酸度較高則顯色較淺，要提高碳酸鈉一氫氧化鈉的濃度。?? Folin酚法有不少具有操作方法，但基本原理都是一個，只是在酚法有不少具有操作方法，但基本原理都是一個，只是在各溶液的濃度及填加量上，保溫的溫度及保溫時間上有所不同各溶液的濃度及填加量上，保溫的溫度及保溫時間上有所不同而已，本實驗所介紹的是本室常用的，靈敏度較高的操作方法而已，本實驗所介紹的是本室常用的，靈敏度較高的操作方法。)和器材和器材材料：、材料：?? 本實驗所提取大豆蛋白水提取液，經合適稀釋至可測定本實驗所提取大豆蛋白水提取液，經合適稀釋至可測定 (c232。的磷酸緩沖液。冰箱保存可用一個月。2M2O）） 25g， 蒸餾水蒸餾水700ml， 85%的磷酸的磷酸 50ml， 濃鹽酸濃鹽酸 100ml， 充分混合后，小火回充分混合后，小火回流流 10小時，再加硫酸鋰（小時，再加硫酸鋰（ Li2SO4）） 150g， 蒸餾水蒸餾水 50ml及數滴溴。?? 上述制備的上述制備的 Folin試劑乙的貯備液濃度一般在試劑乙的貯備液濃度一般在 2mol/L左右，幾種操作方左右，幾種操作方案都是把案都是把 Folin試劑乙稀釋至試劑乙稀釋至 1mol/L的酸度作為應用液，我們的酸度作為應用液，我們 (wǒ men)是是把貯備液于作用前稀釋把貯備液于作用前稀釋 18倍，使之濃度為倍，使之濃度為 。如果用 NaOH去滴定去滴定 Folin乙，終點不太好掌握，溶液的顏乙，終點不太好掌握，溶液的顏色是由淺黃色變?yōu)闇\綠色，再變?yōu)榛易仙珵榻K點。器材、器材 (q236。 操作方法操作方法標準曲線的制作：、標準曲線的制作：?? 標準酪蛋白溶液：用標準酪蛋白溶液：用 ，濃的磷酸緩沖液溶解的酪蛋白，濃度為度為 200μg/ml。于上述試管緩沖液作空白對照。 取出后用自來水冷卻取出后用自來水冷卻 1min。第十四 頁 ，共十八 頁 。tā)操作同工作曲線（可取兩支試管編號操作同工作曲線（可取兩支試管編號 9，與，與 工作曲線同時進行反應和工作曲線同時進行反應和比色測定）比色測定） ；；試管號試管號 8 9蛋白質稀釋液（蛋白質稀釋液（ ml）） （（ mg) 1 1 buffer（（ ml）） 0 0Folin甲試劑甲試劑 ? (n243。第十七 頁 ，共十八 頁 。掌握 Folin酚法 測 定蛋白 濃 度的原理和方法 實驗 原理。)中酪氨酸的色氨酸的 濃 度。 標 準酪蛋白溶液 (r243。
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