反芻動物源性枯草芽孢桿菌的分離與鑒定畢業(yè)論文-預(yù)覽頁
【正文】 孢桿菌作為微生態(tài)制劑在反芻動物養(yǎng)殖中的研究越來越多。 細菌微量生化反應(yīng)管、藥敏紙片 購自 杭州天和微生物 試劑有限公司。 染色鏡檢 染色 采用革蘭氏染色法，見文獻 [13]。 在參考了國內(nèi)外相關(guān)文獻后 [19]，由華大生物工程有限公司合成了一對芽孢桿菌屬特異性引物： Primer 1： 539。預(yù)期擴增片段長度為 1436 bp。測序結(jié)果采用 BLAST軟件和 GenBank 數(shù)據(jù)庫中的國內(nèi)外相關(guān)芽孢桿菌 16S rDNA 的序列對比，用 Clustal 5 X Method 進行同源性比較。每天觀察和記錄， 14 d 后結(jié)束試驗，剖檢觀察內(nèi)臟及組織器官變化。 表 21 菌 K 生化試驗結(jié)果 菌 K 菌 K 菌 K 葡萄糖 + 山梨醇 + 明膠液化試驗 + 蔗糖 + MR 試驗 + 觸媒試驗 + 乳糖 + VP 試驗 KOH 試驗 圖 21 菌 K 菌落 形態(tài) （ 1000）。 產(chǎn)氣； H2S 根據(jù)《伯杰細菌鑒定手冊》 [14]和《常見細菌鑒定手冊》 [15]，上述結(jié)果均屬于芽孢桿菌屬的生化特性，證明分離菌為 芽孢桿菌 屬 。 1. 接種菌 K K 對照 1 2 7 圖 27 接種菌 K 的培養(yǎng)基呈紅色，MR 試驗為陽性。 2 1 2 1 滴加碘液 碘液消失 8 圖 211接種菌 K的試管戊醇層呈玫瑰紅色，吲哚試驗為陽性。 1. 接種菌 K K 對照 2 1 1 2 空白對照 2 1 2 1 9 PCR 鑒定結(jié)果 對菌 K 進行 16S rDNA 的 PCR 擴增 ，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示 在 1500bp 左右有特異性條帶（如圖 229） 。 1. 接種菌 K K 對照 圖 216 KOH 試驗陰性。 圖 219 7 對菌 K 有抑制作用， 6 對菌 K 無抑制作用。 圖 223 ○ 4 、 ○ 7 、 ○ 8 、 ○ 9 對菌 K 有抑制作用， ○ 3 、 ○ 5 、 ○ 6 對菌 K 無抑制作用。 表 22 枯草芽孢桿菌的藥敏試驗結(jié)果 抗菌藥物名稱 紙片含藥 量（ ug/片） 抑菌圈直徑判斷標準（ mm） 枯草芽孢桿菌 試驗結(jié)果 R I S 乳酸環(huán)丙沙星 5 ≤ 15 1620 ≥ 21 27mm S 鹽酸環(huán)丙沙星 5 ≤ 15 1620 ≥ 21 26mm S 氟苯尼考 30 ≤ 12 1317 ≥ 18 22mm S 克林霉素 2 ≤ 14 1520 ≥ 21 R 多粘菌素 300 ≤ 8 911 ≥ 12 19mm S 頭孢噻肟鈉 30 ≤ 14 1522 ≥ 23 27mm S 頭孢曲松鈉 30 ≤ 13 1420 ≥ 21 30mm S 硫酸阿米卡星 30 ≤ 14 1516 ≥ 17 S 慶大霉素 10 ≤ 12 1314 ≥ 15 21mm S 克拉霉素 15 ≤ 13 1422 ≥ 23 R 鏈霉素 10 ≤ 11 1214 ≥ 15 0 R 青霉素 10IU ≤ 28 ≥ 29 0 R 萬古霉素 30 ≤ 15 ≥ 16 S 新霉素 30 ≤ 13 1417 ≥ 18 19mm S 丁胺卡那霉素 10 ≤ 11 1213 ≥ 14 23mm S 復(fù)方新諾明 ≤ 24 2531 ≥ 32 R 桿菌肽 10 ≤ 8 912 ≥ 13 16mm S 紅霉素 15 ≤ 13 1422 ≥ 23 14mm I 多粘菌素 B 300 ≤ 8 911 ≥ 12 S 阿奇霉素 30 ≤ 13 1417 ≥ 18 18mm S 諾氟沙星 10 ≤ 12 1316 ≥ 17 0 R 四環(huán)素 30 ≤ 14 1518 ≥ 19 0 R 先鋒霉素Ⅳ 30 ≤ 14 1517 ≥ 18 I 注： R 耐藥、 I 中敏、 S 敏感 由表看出，枯草芽孢桿菌對 克林霉素、克拉霉素、鏈霉素、青霉素、復(fù)方新諾明、諾氟沙星、四環(huán)素 等有一定的耐藥性，其中對 鏈霉素、青霉素、諾氟沙星、四環(huán)素 耐藥性較強，而對 慶大霉素、卡那霉素、環(huán)丙沙星等 幾種抗生素表現(xiàn)敏感。 圖 227 灌服菌液的小鼠剖檢后腹腔內(nèi)臟器胃、腸、肝、腎、脾無異常變化。 目前，牛用微生態(tài)制劑魚龍混雜，動物專屬性不強，常常將人、豬、禽的菌種用于牛，結(jié)果效果不明顯，我們從反芻動物的新鮮糞便分離到一株枯草芽孢桿菌為開辟反芻動物專用產(chǎn)品做一嘗試。 安全性分析 枯草芽孢桿菌在大多數(shù)動物腸道內(nèi)被認為是過路菌 [17]，但在牛糞中分離到該菌，說明該菌對反芻動物的消 化吸收有一
研究報告相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1