12基因工程的基本操作程序zl4-預覽頁
【正文】 基因的核苷酸序列 四種脫氧核苷酸 一對引物 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq酶） DNA的兩條鏈為模板 溫度控制 一、目的基因的獲取 變性： 加熱至 90～95℃ 雙鏈 DNA解鏈成為單鏈 DNA 退火： 冷卻至 55～60℃ 部分引物與模板的單鏈 DNA的特定互補部位相配對和結合 延伸： 加熱至 70～75℃ 以目的基因為模板，合成互補的新 DNA鏈 退火 變性 延伸 PCR(多聚酶鏈式反應 ) (二）利用 PCR技術擴增目的基因 (三 ) 通過 DNA合成儀用化學的方法直接人工合成 一、目的基因的獲取 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結構基因的核苷酸序列 推測 推測 目的基因 化學合成 根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法： 在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最方便方法是 A、化學合成法 B、基因組文庫法 C、 cDNA文庫法 D、多聚酶鏈式反應 下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是 ①從基因文庫中獲取目的基因 ②利用 PCR技術擴增目的基因 ③反轉錄法 ④通過 DNA合成儀利用化學方法人工合成 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③ A D 的內(nèi)容，正確的組合是 C 在基因工程中，把選出的目的基因（共 1000個脫氧核苷酸對，其中腺嘌呤脫氧核苷酸是 460個）放入 DNA擴增儀中擴增 4代，那么，在擴增儀中應放入胞嘧啶脫氧核苷酸的個數(shù)是 B 目的基因主要是指 _______________的結構基因。 編碼蛋白質(zhì) 核苷酸 染色體 轉錄 表達 體外 核苷酸 引物 人工合成 二、基因表達載體的構建 （核心） _________切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切 口，露出 ____________。 。 ，聯(lián)系前面有關細胞器功能的知識，結合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？ 有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價結合的糖鏈，這些糖鏈是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復合體存在于真核細胞中，大腸桿菌不存在這兩種細胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。 （ 2）將 cDNA前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動子，另外加上抗四環(huán)素的基因，構建成一個表達載體。 補：原核細胞的基因結構 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與 RNA聚合酶結合位點 啟動子 終止子 RNA聚合酶能夠識別調(diào)控序列中的結合位點，并與其結合。 ② 檢測是否轉錄出了 mRNA， 利用 DNA分子雜交技術， 目的基因DNA一條鏈（作探針）與受體細胞中提取的 mRNA雜交，看是否有雜交帶。 提示：① DNA分子雜交技術首先提取受體細胞中的 DNA，然后高溫解成單鏈，再與同位素標記的 DNA探針雜交；②抗原－抗體雜交所用到的抗體是用表達出的蛋白質(zhì)注射動物進行免疫，產(chǎn)生相應的抗體，并提取出而來的。 基因工程的基本操作程序 ?目的基因的獲取 ?基因表達載體的構建 ?將目的基因?qū)胧荏w細胞 ?目的基因的檢測與鑒定 cDNA文庫 演講完畢，謝謝觀看！
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