12基因工程的基本操作程序zl4-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 基因的核苷酸序列 四種脫氧核苷酸 一對(duì)引物 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶 (Taq酶） DNA的兩條鏈為模板 溫度控制 一、目的基因的獲取 變性： 加熱至 90～95℃ 雙鏈 DNA解鏈成為單鏈 DNA 退火： 冷卻至 55～60℃ 部分引物與模板的單鏈 DNA的特定互補(bǔ)部位相配對(duì)和結(jié)合 延伸： 加熱至 70～75℃ 以目的基因?yàn)槟０?，合成互補(bǔ)的新 DNA鏈 退火 變性 延伸 PCR(多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ) (二）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 (三 ) 通過(guò) DNA合成儀用化學(xué)的方法直接人工合成 一、目的基因的獲取 蛋白質(zhì)的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列 推測(cè) 推測(cè) 目的基因 化學(xué)合成 根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法： 在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最方便方法是 A、化學(xué)合成法 B、基因組文庫(kù)法 C、 cDNA文庫(kù)法 D、多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈的是 ①?gòu)幕蛭膸?kù)中獲取目的基因 ②利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 ③反轉(zhuǎn)錄法 ④通過(guò) DNA合成儀利用化學(xué)方法人工合成 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③ A D 的內(nèi)容，正確的組合是 C 在基因工程中，把選出的目的基因（共 1000個(gè)脫氧核苷酸對(duì)，其中腺嘌呤脫氧核苷酸是 460個(gè)）放入 DNA擴(kuò)增儀中擴(kuò)增 4代，那么，在擴(kuò)增儀中應(yīng)放入胞嘧啶脫氧核苷酸的個(gè)數(shù)是 B 目的基因主要是指 _______________的結(jié)構(gòu)基因。 編碼蛋白質(zhì) 核苷酸 染色體 轉(zhuǎn)錄 表達(dá) 體外 核苷酸 引物 人工合成 二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 （核心） _________切割 質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切 口，露出 ____________。 。 ，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識(shí)，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？ 有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價(jià)結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的。 （ 2）將 cDNA前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動(dòng)子，另外加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個(gè)表達(dá)載體。 補(bǔ)：原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu) 非編碼區(qū) 非編碼區(qū) 編碼區(qū) 編碼區(qū)上游 編碼區(qū)下游 與 RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn) 啟動(dòng)子 終止子 RNA聚合酶能夠識(shí)別調(diào)控序列中的結(jié)合位點(diǎn)，并與其結(jié)合。 ② 檢測(cè)是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA， 利用 DNA分子雜交技術(shù)， 目的基因DNA一條鏈（作探針）與受體細(xì)胞中提取的 mRNA雜交，看是否有雜交帶。 提示：① DNA分子雜交技術(shù)首先提取受體細(xì)胞中的 DNA，然后高溫解成單鏈，再與同位素標(biāo)記的 DNA探針雜交；②抗原－抗體雜交所用到的抗體是用表達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動(dòng)物進(jìn)行免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取出而來(lái)的。 基因工程的基本操作程序 ?目的基因的獲取 ?基因表達(dá)載體的構(gòu)建 ?將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 ?目的基因的檢測(cè)與鑒定 cDNA文庫(kù) 演講完畢，謝謝觀(guān)看！
職業(yè)教育相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1