xxxx年本科實(shí)驗(yàn)四 重組質(zhì)粒dna提取、雙酶切鑒定-預(yù)覽頁
【正文】 HCl組成 .(保護(hù) 、 緩沖 ) ① 葡萄糖 的作用是增加溶液的粘度 ,減少抽提過程中的 機(jī)械 剪切作用 ,防止破壞質(zhì)粒 . (保護(hù)作用 ) ② EDTA 的作用是絡(luò)合掉鎂等二價金屬離子 , 防止 DNA酶對質(zhì)粒分子的降解作用。l 溶液 I， 劇烈振蕩 EP管，室溫放置 3min 加入 200181。l的 酚與 氯仿 /異戊醇的混合物（ 1:1混合） ，充分顛倒混勻， 4 ℃ 12023rpm 5min 400181。l無水乙醇 ，顛倒混勻， 20 ℃ 冰箱中放置 15min， 4 ℃ 12023rpm ?10min 棄上清，沉淀中加 1ml 70%乙醇 ， 4 ℃ 12023rpm 5min 去上清，管平放室溫靜置 510min， 20 181。 26 作用 與甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制修飾系統(tǒng) ， 限制外源 DNA， 保護(hù)自身 DNA。C T T A A G539。T T C G A A539。 32 實(shí)驗(yàn)步驟 (1)建立反應(yīng)體系 (2)酶切反應(yīng)（溫育 12h） (3)電泳鑒定（下次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容） 33 雙酶切體系 質(zhì)粒 DNA 10μl 10 M buffer 2μl BamHⅠ 1μl HindⅢ 1μl ddH2O 6μl 34 合計(jì) 20μl 準(zhǔn)備室老師已加好 同學(xué)自己加 37 ℃ ， 12h（ ， PCR儀） 注：余下 10ulDNA保存于 20℃ 冰箱 思考題？ ?為什么要對重組質(zhì)粒 DNA進(jìn)行雙酶切？ 35 演講完畢，謝謝觀看！
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