高二生物血紅蛋白的提取和分離-預(yù)覽頁
【正文】 雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有 DNA，便于進(jìn)行 DNA的提??；人的紅細(xì)胞無細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡單，血紅蛋白含量豐富，便于提取血紅蛋白。 一、血紅蛋白的提取和分離 （一） 凝膠色譜法（ 分配色譜法 ） ： 大多數(shù)凝膠是由 多糖類化合物 （如 葡聚糖或 瓊脂糖 ）構(gòu)成的 多孔 小球體， 內(nèi)部有許多貫穿的通道 。相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子因此得以分離。 : : 通常由 1－ 2 種緩沖劑 溶解于水 中配制而成。 ②在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑 N,N’ 亞甲基雙丙烯酰胺在 引發(fā)劑 和 催化劑 的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。由幾條肽鏈組成的 蛋白質(zhì)復(fù)合體 在 SDS的作用下會(huì) 解聚成單條肽鏈 ，因此測定的結(jié)果只是 單條肽鏈的分子量 。 市場上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售。 低速短時(shí)間離心（速度越高和時(shí)間越長，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果） 吸取血漿：上層透明的黃色血漿。 (3)分離血紅蛋白溶液： ① 過程： 將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以 2020r/min的速度離心 10 min。 ②透析目的： 除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)。 ③頂塞的制作： 打孔 → 安裝玻璃管 。 B、代表意義： “ G” 表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍 。 B、裝填：將凝膠懸浮液一次性緩慢倒入色譜柱內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝均勻。 注意： 液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最終生物大分子物質(zhì)的分離效果。 ③樣品滲入凝膠床： 加樣后打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口。 貼壁加樣。 使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng)。 血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括： 樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定 。 此外，離心速度過高和時(shí)間過長，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。 如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時(shí)要重新裝柱。 A溫度 B pH C滲透壓 D氧氣濃度 3．電泳是指帶電粒子在電場的作用下向著與其所帶電荷（ ）的電極移動(dòng)。 A. NaCl 7．將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到離心管中，離心后，可以明顯看到試管中的溶液分為 4層， 其中第 3層是（ ） A無色透明的甲苯層 B脂溶性物質(zhì)的沉淀層 C血紅蛋白的水溶液 D其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物 CDC
醫(yī)療健康相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1