【正文】 免疫效能。 A. 人類 1) 脾的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞組成： a. 脾表面由結(jié)締組織包裹，被膜向?qū)嵸|(zhì)內(nèi)延伸成若干小梁，脾實(shí)質(zhì)由紅髓和白髓組成，兩者交界處為邊緣區(qū)（又稱為移行區(qū)）。 c. 紅髓：分布在白髓周圍，由脾索和脾竇組成。 免疫： 水產(chǎn)動(dòng)物免疫的基本概念 2) 脾的功能： a. 在胚胎期為造血干細(xì)胞增殖分化的場(chǎng)所，具有造血功能； b. 是血液的濾過器，可以清除血中的病原微生物和自身衰老損傷的血細(xì)胞。 b. 與頭腎相比，脾在體液免疫反應(yīng)中處于相對(duì)次要的地位，其受抗原刺激后的增殖反應(yīng)以彌散的方式發(fā)生在整個(gè)器官上。 b. 魚類 MALT相對(duì)于其系統(tǒng)免疫系統(tǒng)有一定自主性，在其免疫接種方法選擇和改進(jìn)中有實(shí)際意義：口服免疫后，頭腎、血液和腸都出現(xiàn) ASC，但鰓中和皮膚粘液中無；肛門插管接種抗原后可誘導(dǎo)腸、皮膚粘液和膽汁中產(chǎn)生特異性抗體，但血清中無；腹腔免疫 4周后，頭腎、血液和鰓中抗體分泌同時(shí)達(dá)到峰值，而腸只有到第 7周才有顯著反應(yīng)；顆粒抗原浸泡免疫時(shí)，皮膚攝取能力遠(yuǎn)大于鰓，因此，口腔和腹腔免疫可明顯刺激系統(tǒng)免疫應(yīng)答，浸泡和肛門免疫更適宜于誘導(dǎo)粘膜免疫反應(yīng)。 1。 2。 免疫： 水產(chǎn)動(dòng)物免疫的基本概念 3. NK細(xì)胞 它為發(fā)現(xiàn)較晚的一群淋巴細(xì)胞，最主要功能為非特異性殺傷靶細(xì)胞，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞具較強(qiáng)殺傷作用。 5. 其他免疫細(xì)胞 除上述免疫細(xì)胞外，血液中許多細(xì)胞均直接或間接參與免疫應(yīng)答過程，如中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和血小板等。 細(xì)胞因子種類繁多，具有多種生物學(xué)活性，在免疫系統(tǒng)的調(diào)控中作用重大。 1) 自動(dòng)免疫： 因感染病原或注射抗原（疫苗）而獲得的免疫 抗原： 凡能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反應(yīng)的物質(zhì)。 作用： 與哺乳動(dòng)物 NK細(xì)胞類似，能夠殺傷病毒感染的 靶細(xì)胞，從而具有抗感染作用 免疫： 非特異性免疫 4. 非特異性體液因子 1) 補(bǔ)體： A. 來源與成分： 存在于血清中，由多種非特異性血清蛋白 組成，它對(duì)熱敏感， 45℃ 20min失活 B. 作用： a. 在抗原抗體反應(yīng)中通過補(bǔ)體第二激活通路補(bǔ)充 抗體作用； b. 激活后的補(bǔ)體能溶解細(xì)胞膜，殺滅病毒； c. 激活后的補(bǔ)體可促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬和釋放組 胺等多種功能，協(xié)助殺滅病原 . 免疫： 非特異性免疫 2) 干擾素： A. 定義： 是一類在同種細(xì)胞上具有抗病毒活性的蛋白質(zhì) . (其活性的發(fā)揮受細(xì)胞基因組的調(diào)節(jié)和控制，涉及 RNA和 DNA的合成 ) B. 來源與成分： 主要為由巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)； 機(jī)體產(chǎn)生干擾素的數(shù)量產(chǎn)生受溫度影響明顯。 2) 抗原的兩種性能： a. 免疫原性： 指抗原分子能刺激機(jī)免疫細(xì)胞，并使之活化、增殖、分化，最終產(chǎn)生效應(yīng)分子（抗體）或細(xì)胞體（致敏 T細(xì)胞） 的性能 。 大多異種蛋白質(zhì)、細(xì)菌、病毒、細(xì)菌外毒素和動(dòng)物免疫血清等都為完全抗原 b. 不完全抗原 (inplete antigen)： 那些本身沒有免疫原性而只有免疫反應(yīng)性的物質(zhì) ,又稱 半抗原 （ hapten） 半抗原大多為小分子物質(zhì)，如大多數(shù)多糖、脂類、某些藥物和簡(jiǎn)單化合物等、 半抗原單獨(dú)作用無免疫原性，當(dāng)與大分子蛋白質(zhì)載體結(jié)合形成半抗原 — 載體復(fù)合物使，便可獲得免疫原性。 免疫類型： 特異性免疫 2. 抗原的特性 1) 特異性： 具有與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性反應(yīng)的能力； 2) 異物性： 正常情況下，能引起機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的抗原都是異種或 異體物質(zhì)，機(jī)體本身的物質(zhì)或細(xì)胞不能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答；并且， 親緣關(guān)系越遠(yuǎn)、組織結(jié)構(gòu)間差異越大，抗原性越強(qiáng)。 2) 化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成： 大分子物質(zhì)并不都有良好免疫原性，還與組成與結(jié)構(gòu)有關(guān) 如：明膠分子量雖達(dá) 10萬，但其組分為直鏈 . ，易被分解破壞，免疫原性弱 。 具有異物性的物質(zhì)包括以下三類： a. 異種物質(zhì)：如細(xì)菌、病毒、異種血清、植物蛋白等； b. 同種異體物質(zhì)：如人類紅細(xì)胞表面血型抗原（ A、 B、 O、 Rh）等； c. 改變和隱蔽的自身物質(zhì)：主要包括在外傷、感染、輻射或藥物作用下，組織結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的“自身”物質(zhì)和釋放入血的自身抗原，如甲狀腺蛋白，等。 此外，抗原的免疫原性還與抗原劑量、佐劑、機(jī)體年齡與生理狀態(tài)等因素有關(guān)。 1) 抗原決定簇（ antigenic determinant）： 指位于抗原分子表面、決定抗原特異性的特定化學(xué)基團(tuán)，它是決定抗原反應(yīng)性呈現(xiàn)高度特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。 b. 抗原結(jié)合價(jià)： 一個(gè)抗原分子上能與相應(yīng)抗體分子結(jié)合的抗原決定簇的總數(shù) 單價(jià)抗原： 有些半抗原只能和抗體分子中一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合，為單價(jià)抗原 多價(jià)抗原： 多數(shù)抗原有多個(gè)相同和不同抗原決定簇，能和多個(gè)抗體分子結(jié)合。其中： 類屬抗原： 存在于同一種屬或近緣種屬中的共同抗原稱 類屬抗原 ； 異嗜性抗原： 存在于不同種屬生物間的共同抗原稱 異嗜性抗原 。 A. 根據(jù)抗原的來源及與機(jī)體的親緣關(guān)系分類 (1) 異種抗原： 指來自另一物種的抗原物質(zhì)。 C. 抗原的其它分類方法： 如依性能分完全抗原和半抗原，依組分分蛋白質(zhì)抗原、脂蛋白抗原、糖蛋白抗原、多糖抗原和核蛋白抗原等，依獲得方式分天然、人工和合成抗原等。 a. 完全氟氏佐劑： 以上三種成分俱全的佐劑 b. 不完全氟氏佐劑： 不含分支桿菌的氟氏佐劑，其對(duì)機(jī)體刺激作用較弱 免疫： 特異性免疫 4) 作用： a. 增加抗原的免疫原性（增加抗原的表面積）； b. 增強(qiáng)抗體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答能力； c. 改變抗體產(chǎn)生的類型； d. 引起或增強(qiáng) IV型超敏反應(yīng)。 (2) 膜表面免疫球蛋白 (Surface membrane immunoglobulin, SmIg)：B細(xì)胞膜上可作為抗原識(shí)別受體的免疫球蛋白。 體液免疫： 由抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。 2. 作為抗體必須具備的條件： 1) 只有脊椎動(dòng)物的漿細(xì)胞才能產(chǎn)生； 2) 必須有抗原刺激； 3) 能與相應(yīng)抗原產(chǎn)生特異性結(jié)合； 4) 其化學(xué)本質(zhì)是一種具免疫功能的球蛋白。它有 2類： ?型和 ?型 每條肽鏈包括 可變區(qū) (V區(qū) ) 和 穩(wěn)定區(qū) (C區(qū) )。 b. 兔： IgG, IgA, IgM。 4) 魚類： IgM。 (2) 不少自身抗體和引起 II、 III型變態(tài)反應(yīng)的抗體也屬 IgG。 b. 作用： 其作用與 IgG類似，具有殺菌、溶菌、調(diào)理吞噬及凝集作用等，不過，由于 IgM抗原結(jié)合效價(jià)最高，是高效能的抗菌抗體，它的上述作用均比IgG強(qiáng)。 (3) 是少數(shù)在消化道中不被消化的 Pr之一； (4) 嬰兒出生 46個(gè)月后才能合成，但可從母乳中獲得 SIgA (5) SIgA主要分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜表面以及唾液、淚液、初乳和與粘膜相關(guān)的分泌液中，是局部粘膜防御感染的重要因素； (6) 血清型 IgA具有中和毒素、調(diào)理吞噬的作用。 免疫： 特異性免疫 第四節(jié) 免疫學(xué)方法及其應(yīng)用 一、基本概念 1. 血清學(xué)反應(yīng)： 抗原與相應(yīng)抗體在體外發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng) 。 可逆性是免疫吸附層析法提取免疫純抗原或抗體的理論基礎(chǔ)。 免疫： 免疫學(xué)方法及其應(yīng)用 三、主要的抗原抗體反應(yīng) （一）凝集反應(yīng)（ Agglutination） 1. 定義： 顆粒性抗原 (如完整的紅細(xì)胞或細(xì)菌 )與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，經(jīng)過一定時(shí)間形成肉眼可見的凝集物，稱為凝集反應(yīng)。 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 (2) 間接凝集反應(yīng) (indirect or passive agglutination) ： 將可溶性抗原先吸附于一種與免疫無關(guān)的載體顆粒表面，再與相應(yīng)抗體作用，在合適電解質(zhì)存在時(shí)，出現(xiàn)載體顆粒被動(dòng)凝集現(xiàn)象。其中，前兩者敏感性不高，已少用，派生方法現(xiàn)仍廣泛應(yīng)用。若反應(yīng)中有兩種或兩種以上抗原抗體系統(tǒng)，在瓊脂中即可出現(xiàn)兩條或兩條以上的沉淀線。將瓊脂板置于電泳槽內(nèi)，在負(fù)極端孔內(nèi)加抗原，正極端孔內(nèi)加抗體，然后通電。 免疫： 免疫學(xué)方法及其應(yīng)用 四、現(xiàn)代免疫標(biāo)記技術(shù)（ immunolabelling technique） 定義： 將抗原或抗體用熒光素、酶、放射性同位素或電子致密物質(zhì)等加以標(biāo)記，以提高抗原抗體反應(yīng)以及抗原或抗體檢測(cè)靈敏度的一類新技術(shù)。 (4) 特點(diǎn)： 簡(jiǎn)單、特異性高；敏感性低、同時(shí)檢測(cè)多種抗原時(shí)較復(fù)雜。 3. 標(biāo)記酶： 辣根過氧化物酶（ HRP）和堿性磷酸酶；它們與抗原或抗體結(jié)合后活性不受影響。它目前包括 直接法、間接法、雙抗體夾心法、雙夾心法、抗原競(jìng)爭(zhēng)法、抑制性測(cè)定法和橋聯(lián)法 等多種。 加待測(cè)抗原 加酶標(biāo)抗體 已知抗體吸附 抗原抗體復(fù)合物 酶聯(lián)抗體抗原抗體復(fù)合物 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 （三）放射免疫測(cè)定技術(shù) (Radioimmunoassay, RIA) 1. 定義： 用放射性同位素標(biāo)記來檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)的高靈敏度的技術(shù)。 (4) 預(yù)先用一系列已知濃度的未標(biāo)記抗原和一定量的標(biāo)記抗原及抗體混合，以相同方法繪制 B/F和 Ag量的關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線圖。 B. 發(fā)光免疫分析 定義： 利用物質(zhì)的發(fā)光特征 (如輻射光波長(zhǎng)、發(fā)光的光子數(shù) )與產(chǎn)生輻射的物質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)常數(shù)、構(gòu)型、數(shù)量等密切相關(guān)，通過受激分子發(fā)射的光譜，發(fā)光衰減常數(shù)、發(fā)光方向等來判斷該分子的屬性；通過發(fā)光強(qiáng)度來判斷物質(zhì)的量的免疫分析技術(shù)。因該法不經(jīng)脫水和包埋等步驟，抗原保護(hù)較好，且有利于免疫試劑在組織中的滲透；但在技術(shù)上困難較多，需配制專用設(shè)備。該法只能用于病體已產(chǎn)生抗體的診斷。 三、用于疾病的預(yù)防 ? 水產(chǎn)動(dòng)物免疫最重要的應(yīng)用方向?yàn)檠兄埔呙邕M(jìn)行疾病的預(yù)防 ? 在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中，由于只有魚類、兩棲類和爬行類等脊椎動(dòng)物 才能在接種抗原后產(chǎn)生抗體，目前因此也認(rèn)為只有這些動(dòng)物才能用免疫學(xué)方法進(jìn)行疾病的預(yù)防。 免疫： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 4. 亞單位疫苗： 病原微生物中能使機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)力的成分只占病原體小部分，將這些成分分離出來制成的疫苗為亞單位疫苗。 免疫： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 B. 根據(jù)疫苗的性質(zhì)和組成成分來分： 1. 單價(jià)疫苗： 由單一病菌培養(yǎng)制備的疫苗 2. 多價(jià)疫苗： 由同一種病菌的不同型或不同株培養(yǎng)制備的疫苗 3. 聯(lián)苗 (混合疫苗 )： 由一種以上的病菌或其代謝產(chǎn)物制備的疫苗 如：二聯(lián)疫苗、三聯(lián)疫苗 …… C. 根據(jù)抗原類別來分： 1. 病毒疫苗： 如草魚出血病疫苗 2. 細(xì)菌疫苗： 如石斑魚創(chuàng)傷弧菌疫苗 3. 寄生蟲疫苗： 如小瓜蟲疫苗 免疫： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 （二）魚用疫苗的接種方法 1. 注射法： 將疫苗直接注射到肌肉、腹腔或心臟的免疫接種方法。 5. 其他方法： 如超聲免疫法等，該法是在浸泡法基礎(chǔ)上外加超聲作用而實(shí)施的接種方法，目前尚在探索中。 4. 水產(chǎn)動(dòng)物的非特異性免疫有哪些？它們各有什么主要作用？ ？作為抗體應(yīng)具備的條件有哪些？ 6. 血清學(xué)反應(yīng)有哪些特點(diǎn)？ 7. 免疫學(xué)原理在水產(chǎn)病害防治中有哪些方面的應(yīng)用？ 8. 主要的抗原抗體反應(yīng)和現(xiàn)代免疫標(biāo)記技術(shù)有哪些？ 9. 以雙抗體夾心法為例，簡(jiǎn)述用 ELISA法檢測(cè)水產(chǎn)動(dòng)物病原的主要過程？ 10. 水產(chǎn)動(dòng)物疫苗分為哪些類型？它們各有哪些優(yōu)缺點(diǎn)？ 11. 魚用疫苗的接種方法有哪些？它們各有哪些優(yōu)缺點(diǎn)？ 12. 分別簡(jiǎn)述水產(chǎn)動(dòng)物病毒性疫苗、細(xì)菌性疫苗和 LPS疫苗的制備過程？ Chapter 2. 水產(chǎn)動(dòng)物免疫及其應(yīng)用