【正文】 顯色方法的化合物，可以用熒光薄層進行分離。利用某些物質(zhì)的蒸 氣與樣品作用生成不同顏色或產(chǎn)生熒光，也可用于斑 點的檢出。 Rf =0，表示化合物在薄層上不隨溶劑的擴散而移動，仍在原點位置； Rf =1，表示溶質(zhì)不進入固定相，即表示溶質(zhì)和溶劑同步移動。 相對比移值 Rst Rst值是相對 Rf值，是樣品與參考物移動距離之 比，可消除許多系統(tǒng)誤差。 B 反射測定法 光束照到薄層斑點上測量，反射光強度。 透射法測定時， SX值越大，吸光度越大；反射法測 定時， SX值越大，反射度越小。 ? 鋸齒形掃描方式能消除展開后斑點形狀不規(guī)則而引 起的誤差，可獲得滿意的定量結(jié)果。 A 外標一點法 工作曲線通過原點（截距為零） 時可用外標一點法定量，需點一種 濃度的對照品溶液。 21 FAFC ?? 第一節(jié) 吸附色譜法 ② 內(nèi)標法 本法與外標法的主要區(qū)別，在于用內(nèi)標法時面 積累計值為被測樣品和內(nèi)際物的面積之比。 第一節(jié) 吸附色譜法 ? 六、高效薄層色譜 (HPTLC) 高效薄層色譜法是在七十年代中期由常規(guī) TLC 發(fā)展形成的，也稱毫微 (克 )量薄層色譜 (nano－ TLC)。 第二節(jié) ? 將某種溶劑涂布在吸附劑顆粒表面或紙纖維 上，形成一層液膜，稱為 固定相 。極性溶劑與極性溶質(zhì)之間有較強的分子間作用 力，而非極性溶劑與非極性溶質(zhì)之間也有較強的分 子間作用力，因此溶解度的“ 相似者相溶 ”經(jīng)驗規(guī)則 可用于分配色譜中。 (1) 硅膠 (2) 硅藻土 (3) 纖維素 是紙色譜的載體，也是分配柱色譜常 第二節(jié) ? 分配色譜根據(jù)固定相和流動相的相對極性，可以分為兩類： 一類稱為正相分配色譜，其固定相的極性大于流動相， 即以強極性溶劑作為固定相，而以弱極性的有機溶劑作為流 動相；在正相分配色譜中，被分離成分中極性大的親水性成 分移動慢 , 另一類為反相分配色譜則相反，其固定液具有較小的極 性，而流動相則極性較大?？上仁褂脤Ω? 組分溶解度大的溶劑為洗脫劑，再根據(jù)分離情況改變洗 脫劑的組成，即在流動相中加入一些別的溶劑，以改變 第二節(jié) ? (一 ) 用 硅膠、纖維素 等作載體時，可直接稱出一定量的 載體，再加入一定比例的固定液，混勻后按吸附劑裝柱 法裝入柱內(nèi)，也分干法和濕法兩種。 1. (1)濾紙的選擇 ① 濾紙的質(zhì)地要均勻，厚薄均一，紙面必須平整； ② 具有一定的機械強度，被溶劑潤濕后仍能懸掛； ③ 具有足夠的純度； ④要選擇纖維松緊適宜，厚薄適當，展開劑移動的速度適中的濾紙。適用于一些親脂性強、水溶性小的化合物的分 離。然后再將濾紙 紙色譜的展開方式，通常采用上行法，讓展開 劑借毛細管效應自下向上移動。 第三節(jié) 離子交換色譜法 ? 概念：以離子交換劑為固定相，用水或與水混合的溶劑作為流動相，利用它在水溶液中能與溶液中離子進行交換的性質(zhì)，根據(jù)離子交換劑對各組分離子親合力的不同而使其分離的方法。 根據(jù)樹脂所含活性基團的性質(zhì)，以及所交換離 子的電荷可分為陽離子交換樹脂和陰離子交換樹脂。 此類樹脂在水溶液中形成羥基型，商品一般為 氯型 強堿性陰離子交換樹脂在酸、堿和有機溶劑中較穩(wěn) 弱堿性陰離子交換樹脂對 HO離子的親合力大，故只 能在酸性介質(zhì)中與陰離子交換。常用單位為 mmol/g，也有用 mmol/mL表示的， 即每 1毫升干樹脂中真正參加交換反應的基團數(shù)。 溶脹的程度取決于交聯(lián)度的高低，交聯(lián)度高， 溶脹小；反之，溶脹大。 ??? ? BAR ??? ? ABR]][[]][[/ ?????? BAR ARK BA第三節(jié) 離子交換色譜法 〔 RA+〕〔 RB+〕 分別表示在樹脂相中 A+、 B+ 的離子濃度， [A+]、 [B+]分別表示 A+、 B+離子在溶液 中的濃度。 ② 常溫下，在低濃度水溶液中，等價陽離子的交換 親合力隨水合離子半徑增大而變小，隨其裸離子半徑增 大而變大。 ⑧ 能與樹脂的交換基團生成配合物或難溶化合物的離子 都對樹脂具有較大的親合力。最后用蒸餾水洗去多余的酸或堿并洗至中 性，即可使用。 主要用于大分子物質(zhì)如蛋白質(zhì)等的分離。 (二 )分配系數(shù) VR＝ V0+KVi 如果溶質(zhì)分子足夠小，能自由進出凝膠顆粒 內(nèi)部，而且對凝膠的內(nèi)水和外水親合力相等，此 時洗脫體積就等于外水體積和內(nèi)水體積之和。 第四節(jié) 尺寸排阻色譜法 分子排阻色譜的洗脫順序 ＝ V0,完全不能進凝膠顆粒內(nèi)部的物質(zhì) ＝ V0+Vi，能自由進出顆粒內(nèi)部的物質(zhì) ＞ V0+Vi，具有特殊吸附作用的物質(zhì) 第四節(jié) 尺寸排阻色譜法 ? 二、凝膠的分類 (一 ) 葡聚糖凝膠是常用凝膠，由葡 聚糖和交聯(lián)劑甘油通過醚橋 (－ O－ CH2－ CHOH－ CH2 － O－ )相互交聯(lián)而形成的 多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) OOHOO HO HC H2OOHOHO HO HC H2OOHOHO HOC H2OOHOHO HO HC H2C HC H2C H2O HOOO HOHC H2OOOHOHO HO HC H2C H2C HC H2O HO HC H4第四節(jié) 尺寸排阻色譜法 (二 ) 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺與 N， N′－亞甲 基－二丙烯酰胺交聯(lián)聚合而成。溶脹時間 依交聯(lián)度而定，交聯(lián)度小的吸水量大，需要時間長，也 可加熱溶脹。 第四節(jié) 尺寸排阻色譜法 (三 ) 一般要求洗脫劑應與浸泡溶脹凝膠所用的溶劑 相同，因為如果換溶劑，凝膠體積會發(fā)生變化，從 而影響分離效果。既 可裝柱又可制成薄膜。 第五節(jié) 聚酰胺色譜法 聚酰胺吸附作用 第五節(jié) 聚酰胺色譜法 形成氫鍵的能力與溶劑有關(guān)，在水中形成氫鍵 的能力最強，在有機溶劑中較弱，在堿性溶液中最 弱，在水溶劑系統(tǒng)中各種化合物與聚酰胺形成氫鍵 (1) 形成氫鍵的基團數(shù)越多，吸附力越強，如： ＞ ＞O HO HO H O HO HO H第五節(jié) 聚酰胺色譜法 (2) 形成氫鍵的能力與形成氫鍵的基團的位置有 關(guān)，例如間位、對位酚羥基使吸附力增大，鄰位 使吸附力減小。黃酮苷元的 極性小于黃酮苷，因而黃酮苷易被洗脫。 聚酰胺的樣品容量較大。 第五節(jié) 聚酰胺色譜法 聚酰胺色譜是分離 黃酮類 及 某些酚類 最有效的 方