【正文】 取工藝條件，著重研究乙醇濃度、回流時(shí)間、提取次數(shù)、乙醇用量等因素對(duì)浸膏得率的影響，得到其較優(yōu)的提取工藝條件，為工業(yè)化提取工藝的設(shè)計(jì)提供理論依據(jù)。 （1周）第三部分 準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備，藥材，試劑，藥品。提取中藥中有效成分的傳統(tǒng)方法主要有堿提酸沉法，水提取法，乙醇提取法，聚酰胺分離提取法，堿提樹(shù)脂工藝，超臨界CO2萃取等，其中乙醇提取法由于價(jià)廉、污染小、適合工業(yè)生產(chǎn)等特點(diǎn)而被廣泛使用。 關(guān)鍵詞：厚樸酚，提取工藝；正交試驗(yàn)法；醇提法。葉革質(zhì)，倒卵形或倒卵狀橢圓形，長(zhǎng)2045厘米，寬1225厘米，上面綠色，無(wú)毛，下面有白霜，幼時(shí)密被灰色毛；側(cè)脈2030對(duì)；?；ㄆ?5月，花與葉同時(shí)開(kāi)放，單生枝頂，杯狀，白色，芳香，直徑約15厘米。分布于浙江、廣西、湖南、湖北、四川、貴州、云南、陜西、甘肅等地。宜生長(zhǎng)于8001700米左右海拔山區(qū)，在溪谷、河岸、山麓處生長(zhǎng)良好。?；焐诼淙~闊葉林內(nèi)，或生于常綠闊葉林緣。3．現(xiàn)狀 厚樸為漸危樹(shù)種，是我國(guó)特有的珍貴樹(shù)種，在北亞熱帶地區(qū)分布較廣，樹(shù)皮可供藥用。目前尚存的小片純林或零星植株，多系人工栽培。藥用部位為根皮、干皮、枝皮，藥材性狀為干皮，呈卷筒狀或雙卷筒狀，長(zhǎng)3035cm，習(xí)稱“筒樸”；近根部的干皮一端展開(kāi)如喇叭口，長(zhǎng)1325cm，習(xí)稱“靴簡(jiǎn)樸”。氣香，味辛辣、微苦。質(zhì)脆，易折斷，斷面纖維性。韌皮部射線多為2列薄壁細(xì)胞，近皮層處稍加寬，細(xì)胞長(zhǎng)方形徑向排列；韌皮纖維分布密集，由736個(gè)纖維相聚成群，與篩管薄壁細(xì)胞相間排列，腔小，壁強(qiáng)木化；篩管細(xì)胞成群，形較大，壁略增厚，有時(shí)可見(jiàn)篩板；油細(xì)胞散列，于韌皮部外側(cè)分布較密集。據(jù)現(xiàn)代藥理研究表明，厚樸有中樞鎮(zhèn)靜、抗痙攣及抗鏈球菌等多方面藥理作用，并證明這些作用的有效成分為厚樸酚和β桉油醇。草酸鈣方晶較少，棒狀結(jié)晶較多，.。同時(shí)他們發(fā)現(xiàn)同一厚樸株，枝皮的揮發(fā)油含量最高，枝、干、根皮依次降低；不同樹(shù)齡問(wèn)，五年生與二十年生厚樸的揮發(fā)油含量較高，十年生與十五年生的含量較低。厚樸酚與和厚樸酚是一對(duì)同分異構(gòu)體，由兩分子苯丙素通過(guò)33’碳原子相連，主要從厚樸的樹(shù)皮、根皮中得到，也有從葉中獲得的[13]，還有厚樸酚與和厚樸酚結(jié)構(gòu)類似的化合物及二聚體，如厚樸三醇B（Magnatriol B）、厚樸醛B，D（Magnoldehyde B，D）、單菇木脂素、木蘭醌、4Omethylhonokiol，3Omethylmagnolol、magnaldehyde B、magnolignan A 和magnolignan C等[14]。其余生物堿類成分主要為厚樸堿（Mcurarine），此外還有木蘭花堿（Salicifoline）、武當(dāng)木蘭堿（magnosprengerine）、白蘭花堿（michelarbine）、木蘭箭毒堿（magnocurarine）等[12，14]。厚樸活性成分厚樸酚有顯著抑制胃酸分泌和抗?jié)冏饔谩：駱阋掖继崛∥? g／kg、15 g／kg均有明顯鎮(zhèn)痛作用，明顯減少乙酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高，并明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳腫及角叉菜膠引起的小鼠足跖腫脹。另外，抑制溶酶體酶的釋放也可能是厚樸酚抗炎作用機(jī)制之一。和厚樸酚具有鎮(zhèn)靜、抗焦慮作用。在解除結(jié)扎后的10分鐘再灌注，室性心律失常的發(fā)生也大為減少。厚樸酚與和厚樸酚具有明顯抗真菌作用。在藥物、對(duì)致齲菌產(chǎn)酸能力的影響研究中發(fā)現(xiàn)，厚樸酚及和厚樸酚對(duì)致齲菌產(chǎn)酸均有一定的抑制作用，且隨著藥物濃度增加，抑制作用增強(qiáng)[24] 。6．抗腫瘤作用 厚樸酚與和厚樸酚在體內(nèi)和體外均被發(fā)現(xiàn)可以抑制新生血管及腫瘤生長(zhǎng)，并且在有效劑量范圍內(nèi)能夠被宿主很好的耐受，其作用機(jī)制是在人的內(nèi)皮細(xì)胞通過(guò)干擾血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2（VEGFR2）的磷酸化來(lái)抑制血管生成[27,28]。Fong等通過(guò)在體外使用人早幼粒白血病細(xì)胞系HL60進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察到和厚樸酚在小劑量的l，25二羥維生素D3和全反式維甲酸的協(xié)同下可以作為細(xì)胞分化的強(qiáng)化因子，增強(qiáng)人早幼粒白血病細(xì)胞系HL60細(xì)胞的分化作用[29] 。特別是變形鏈球菌有更加顯著的抗菌作用，其抗菌活性強(qiáng)于典型的抗菌生物堿，[6]。3．厚樸治慢性咽炎 健脾行氣，化痰散結(jié)，養(yǎng)陰利咽。4．厚樸湯治療頸淋巴結(jié)腫大 頸淋巴結(jié)腫大，多由氣、郁、痰、火互結(jié)所致。結(jié)果為治療組平均排氣時(shí)間為（177。）h、（177。6．厚樸三物湯治療腸粘連 腸粘連是腹部手術(shù)后的常見(jiàn)并發(fā)癥，中醫(yī)把腸粘連歸入腹痛腹脹范疇，病機(jī)為腑氣不通，氣血阻滯。如此則腑易通，氣乃順，血得和而諸癥愈。加入HCl溶液調(diào)至pH23，靜置，收集析出的沉淀，用蒸餾水洗滌沉淀物至pH67。近年來(lái)，物理方法，如色譜、逆流分溶進(jìn)展很快，縮短了對(duì)中藥有效成分研究的周期。1．溶劑提取法的原理 中藥成分在溶劑中的溶解度直接與溶劑性質(zhì)有關(guān)。生物堿是親脂性化合物，而生物堿鹽，能夠離子化，加大了極性，就變成了親水性化合物。但有時(shí)又可能相互生成難溶性化合物，改變了欲提取成分的溶解性能而提取不出。（1）浸漬法 浸漬法是將處理過(guò)的藥材，用適當(dāng)?shù)娜軇┰诔鼗驕責(zé)幔?080℃）的情況下浸漬一溶出七種成分。當(dāng)溶劑滲進(jìn)要分溶出成分比重加大而向下移動(dòng)時(shí)，上層的溶劑或稀浸液便置換其位置，造成良好的濃度差，使擴(kuò)散能較好地進(jìn)行，故浸出效率較高，浸出液較澄清，但溶劑消耗量大、費(fèi)時(shí)長(zhǎng)、操作仍嫌麻煩。但受熱易破壞的成分不宜用此法，且溶劑消耗量仍大，操作亦麻煩。3．水提取法 取厚樸粗粉，加510倍量的水， mol結(jié)果表明此方法厚樸酚含量高，厚樸浸膏收率高，是傳統(tǒng)的工業(yè)提取方法[18]。L1HCl溶液調(diào)pH至7。一定時(shí)間后，有效成分通過(guò)分離柱降壓解析，得淡黃色膏狀物，總厚樸酚提取率為80%。 研究意義中藥厚樸為木蘭科木蘭屬喬木(Magnolia officinalis Rehd．et Wils)凹葉厚樸 (Magnolia officinalis Rehd．et Wils．var．biloba Rehd．et Wil)的干燥樹(shù)皮、根皮以及枝皮，具有行氣燥濕、降逆平喘之功效，用于脘腹脹痛、宿食不消、嘔吐瀉痢、氣逆喘咳等功效。并且可為深入研究厚樸的藥理活性提供物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)于厚樸藥材有效成分的提取和進(jìn)一步深入研究具有一定的指導(dǎo)意義。經(jīng)過(guò)80目篩，40目篩，20目篩篩選。先加入95%乙醇xml，再加入蒸餾水至刻度線，混合均勻。加熱回流m次，每次n h，合并提取液。 因素水平表水平因素A提取時(shí)間（min）B乙醇濃度（%）C乙醇用量（倍）D提取次數(shù)160656121207082318075103 厚樸正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)號(hào)因素ABCD111112122231333421235223162312731328321393321 鑒定薄層層析過(guò)程如下，結(jié)晶品的甲醉液在硅膠G板上點(diǎn)樣，分別用苯甲醇（27：1）和石泊醚乙酸乙酯（9：l）展開(kāi)，碘液顯色。 結(jié)果與討論 實(shí)驗(yàn)結(jié)果。ki=Ki／s，其中s為任一列上各水平出現(xiàn)的次數(shù)，所以ki表示任一列上因素取水平i時(shí)所得試驗(yàn)結(jié)果的算術(shù)平均值。例如，在第一列上，最大的ki為k2（），最小的ki為k1（），所以R==，或R==。各因素優(yōu)水平的確定與試驗(yàn)指標(biāo)有關(guān)，若指標(biāo)越大越好，則應(yīng)選取指標(biāo)較大的水平，即各列Ki中最大的那個(gè)值對(duì)應(yīng)的水平；反之，若指標(biāo)越小越好，則應(yīng)選取使指標(biāo)小的那個(gè)水平。例如，本實(shí)驗(yàn)的A因素（提取時(shí)間）的重要性排在末尾，則可以考慮采用水平1的提取時(shí)間，即60分鐘，縮短了提取時(shí)間降低了能耗，即方案組合為A1B2C1D3，可以做實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其浸膏得率，確定是否為較優(yōu)方案。 驗(yàn)證試驗(yàn)設(shè)計(jì)表實(shí)驗(yàn)號(hào)因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果ABCD浸膏得率（%）123122221331213通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得到，如預(yù)期分析的一樣， A2B2C1D3為最優(yōu)方案，A1B2C1D3為較優(yōu)方案。浸膏得率對(duì)乙醇濃度做趨勢(shì)圖。浸膏得率對(duì)提取次數(shù)做趨勢(shì)圖?？紤]降低過(guò)篩目數(shù)是否可以解決這一問(wèn)題，于是設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，用同一厚樸原料分別過(guò)20目、40目、80目的篩，選正交設(shè)計(jì)表中1號(hào)試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)。植物的許多部位都含有葉綠素，葉綠素在醇提過(guò)程中，會(huì)被大量的提取出來(lái)，使抽濾液變?yōu)榫G色干擾試驗(yàn)，并且會(huì)使實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。尤其在需要回流多次的時(shí)候，在第二次回流時(shí)，由于是使用前一次的濾渣進(jìn)行回流，因此藥材很粘稠，需要加沸石。4．抽濾過(guò)后的濾液由于時(shí)間不足，有需要過(guò)夜才旋蒸的，在旋蒸前要加熱下錐形瓶，使其中由于溫度降低析出的厚樸酚重新溶解，再轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中進(jìn)行旋蒸，避免浸膏的損失。因此，需要尋找和擴(kuò)大新的藥用資源。厚樸是我國(guó)特有的珍貴中藥材，對(duì)其栽培技術(shù)研究很少，為了保護(hù)和發(fā)展厚樸資源，建議要把厚樸的科學(xué)研究作為中藥資源開(kāi)發(fā)工作的一項(xiàng)重要措施來(lái)抓，近期內(nèi)加強(qiáng)厚樸生產(chǎn)技術(shù)研究，加強(qiáng)厚樸種源保護(hù)和收集，加強(qiáng)以利用為主的綜合開(kāi)發(fā)研究以發(fā)揮厚樸的多種經(jīng)濟(jì)效益。醇提取厚樸中的厚樸酚與和厚樸酚，工藝簡(jiǎn)單，價(jià)廉，可作為厚樸有效成分工業(yè)化提取的提取方法。用于提取傳統(tǒng)中藥厚樸中厚樸酚與和厚樸酚，有多種方法，如堿提酸沉法，水提取法，乙醇提取法，聚酰胺分離提取法，堿提樹(shù)脂工藝，超臨界CO2萃取等。各因素影響趨勢(shì)為乙醇濃度對(duì)浸膏得率的影響最大，乙醇濃度提高時(shí)浸膏得率提高，在70%的時(shí)候浸膏得率最高，其次是提取次數(shù)，提取次數(shù)越大，浸膏得率越高。參考文獻(xiàn)[1] 龔建明，[J]，2008，10（2）：125126[2] [J]，2001，32（8）：686[3] 朱自平，張明發(fā)，沈雅琴，[J]，1997，22（11）：686[4] 張永太，[J]，2005，5（3）：40[5] [J]，l997，28（7）：444[6] 景向東，[J]，2000，32（12）：50[7] 、[J]，2001，32（1）：33[8] 李志亮，[J]，2000，（14）：1373[9] 寇俊萍，[J]，2004，26（1）：57.[10] [J]，2007，32（1）：4248[11] 王承南，[J]，2003，21（3）：8081.[12] 王立青，江榮高，[J]，2005，36（10）：15911594[13] 鄧世明，程永現(xiàn)，周俊，[J]，2001，23（1）：121125[14] 楊云，張晶，：中國(guó)中醫(yī)藥出版社[M]，2003，540542[15] 朱東亮，李翔，婁子洋，[J]，2006，27（7）：790791[16] 蘆金清，、[J]，1989，11（8）：23[17] 孟麗珍，[J]，1992，15（3）：7676[18] 鄒建華，[J]，2001，24（3）：194195[19] 郭信芳，陳昌彪，李 弘，[J]，1995，26（4）：214214[20] 蘇子仁，雷正杰，曾健青，[J]，2001，26（1）：3132[21] [J]，1999，21（7）：331331[22] 張忠義，黃昌金，[J]，1999，9（3）：2020[23] 狄維，王林，[J]，2003，13（6）：326328[24] 劉彤焱，張勝?gòu)?qiáng)，石濤，（醫(yī)學(xué)版）[J]，2006，25（1）：2427[25] 陳延清，[J]，2005，27（3）：289291[26] 王明娟，胡昌勤，[J]，2002，I6（7）：43I433[27] 王立青，江榮高，[J]，2005，36（10）：15911594[28] Xianhe B，F(xiàn)rancesca C，Masuko U，et ，a SmallMolecular Weight Natural Product，Inhibits AngiogenesisinVitro and Tumor Growth in Vivo[J].J Biol Chem，2003，278（37）：3550135507[29] 克強(qiáng)，[J]，2007，22（5）：818