【正文】 ? 裸大鼠 (rnu/rnu)： 1953年在英國 Rowett Research Institute發(fā)現(xiàn) ? 有觸須，皮膚有稀疏的毛，胸腺發(fā)育不良但有一定數(shù)量的 T細(xì)胞 ? 免疫功能嚴(yán)重缺損，脾淋巴細(xì)胞對促有絲分裂劑及胸腺依賴抗原不起反應(yīng)，淋巴結(jié)細(xì)胞對 PHA和ConA起反應(yīng) ? 同種皮膚移植可被接受，而異種皮膚移植可能被接受或排斥，對異種腫瘤移植一般可被接受 ? 體型較大，可接受裸小鼠難以接受的手術(shù)，對不適宜的環(huán)境的耐受力較小鼠強(qiáng) ? 無毛免疫缺陷豚鼠：體形小，皮皺、毛干、觸須短，胸腺發(fā)育不良或缺如，對移植排斥反應(yīng)推遲，低 γ 球蛋白血癥，對病毒感受性增加 ? 丹麥黑牛的突變型 為常染色體隱性遺傳。結(jié)果 :注入大腸桿菌 3h后 ,動物 100%出現(xiàn)內(nèi)毒素血癥 ,5h后全部出現(xiàn) MODS,制模成功 ? 多因素隨機(jī)性慢性刺激引起慢性應(yīng)激 /抑郁癥 ? 移植性腫瘤模型 ? 我國已建立小鼠可移植腫瘤株 10余種 ? 1969年 Rygarrd首次用人的結(jié)腸癌移植于裸小鼠獲得成功；直腸癌、黑色素瘤、鼻咽癌、骨肉瘤、胰腺癌、胃癌、結(jié)腸癌等百余種；我國建成的人類腫瘤的裸鼠移植瘤數(shù)十種 ? 病毒誘發(fā)的腫瘤模型 ? 目前幾乎所有禽類的腫瘤和小鼠的腫瘤以及部分其他動物的腫瘤均可用腫瘤的無細(xì)胞濾液誘發(fā)，電鏡下可見濾液中有病毒顆粒，應(yīng)用無細(xì)胞濾液或病毒的培養(yǎng)物可將動物的腫瘤傳遞下去，并可誘發(fā)其他種類動物新的腫瘤模型，如 Rous雞肉瘤病毒 ? 動物腫瘤病毒： RNA病毒和 DNA病毒，僅小鼠白血病病毒就多于 14種 ? 化學(xué)致瘤物誘發(fā)的動物腫瘤模型 ? 多環(huán)碳?xì)浠衔?、氨基偶氮染料、芳香胺、亞硝? ? 黃曲霉毒素 B B G G2等 ? 重金屬 ? 農(nóng)藥 3. 病理過程上 80只 Wistar大鼠 ,雌雄各半。kg1。 CCl4加乙醇法 :20只大鼠 ,以正常飼料喂養(yǎng) ,余條件同復(fù)合因素法前 6周。其中 Bcl2/GFAPTK雙轉(zhuǎn)基因小鼠皮下植入緩釋泵 ,連續(xù) 7d釋放更昔洛韋 (GCV)100mg采用免疫熒光染色特異性檢測再生軸突纖維并進(jìn)行定量分析，結(jié)合羅丹明的霍亂毒素 B亞單位 (CTBR)或增強(qiáng)表達(dá)綠色熒光蛋白的復(fù)制缺陷型腺相關(guān)病毒 (AAVEGFP)為標(biāo)記物以顯示再生軸突是否到達(dá)大腦靶器官。但自體血注入法在取血過程中需控制在 3min內(nèi)完成 ,否則血液凝固；注血過程中血液大多從進(jìn)針處冒出 ,血腫大小很不穩(wěn)定；神經(jīng)功能損傷不明， Bederson評分一般在 2分左右。這類動物由于外源性目的基因的穩(wěn)定存在而賦于子代動物個體 ? 這些可以遺傳的改變包括： ?外源 DNA片段至少整合到一條染色體的一個位點(diǎn)上 ?外源 DNA的插入使基因組中任何一個基因的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變 ?外源 DNA的插入使染色體發(fā)生重排 ?導(dǎo)入可以持久存在的遺傳實(shí)體，如一條人工染色體或者可以自我復(fù)制并傳遞給子細(xì)胞的非染色體 DNA元件 ? 不屬于轉(zhuǎn)基因動物范疇的其它手段 ： ?由于化學(xué)品的誘變作用導(dǎo)致基因發(fā)生改變 ?由于輻射作用導(dǎo)致基因發(fā)生改變 ?由于化學(xué)品或輻射的作用使染色體發(fā)生畸變 ?通過核移植交換遺傳物質(zhì) ?使用基因治療技術(shù)導(dǎo)入 DNA ? 轉(zhuǎn)基因動物在基礎(chǔ)生物學(xué)研究和醫(yī)學(xué)及農(nóng)業(yè)應(yīng)用研究上有其獨(dú)特作用，不可能被其它方法所取代 ? 研究基因的功能和基因間互作，最有效的手段是基因剔除技術(shù)和把人工修飾后的基因序列定向地整合到它原來的基因座上 ? 基因定向整合只能在細(xì)胞中完成，經(jīng)過基因修飾的細(xì)胞需要變成動物，只有在活的動物體才能觀察和檢驗(yàn)基因的功能 ? “ 多莉 ” 技術(shù)表明：動物體上多種類型的體細(xì)胞都可以通過克隆變成動物個體，再沒必要研究胚胎干細(xì)胞， 體細(xì)胞培養(yǎng) 條件比胚胎干細(xì)胞簡單很多 ? 體細(xì)胞核移植 技術(shù)為基因結(jié)構(gòu)、功能和表達(dá)調(diào)控的研究提供了飛速發(fā)展的基本條件 ? 體細(xì)胞克隆 技術(shù)的出現(xiàn)，使我們可以能動地改進(jìn)動物的基因組，應(yīng)用基因工程的手段培育動物優(yōu)良品種 ? 使用 基因定向轉(zhuǎn)移 技術(shù)，在基因座上對基因的結(jié)構(gòu)部分和調(diào)控部分進(jìn)行修改，并把這種經(jīng)過基因修改的細(xì)胞變成動物個體 ? 獲得理想的基因修飾的細(xì)胞可以大量繁殖，并使用它們克隆出一批動物 ? 在基因座上對基因進(jìn)行修改相當(dāng)于一種自然發(fā)生的有利突變，并可成批生產(chǎn) ? 基因定向轉(zhuǎn)移和體細(xì)胞克隆，是生命科學(xué)中兩項(xiàng)重大技術(shù)，二者結(jié)合就獲得了按照事先的設(shè)計，有計劃地修改動物基因組的能力 ? 轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù) ?廣義的轉(zhuǎn)基因小鼠技術(shù)是指將外源基因?qū)氲叫∈蠼M織細(xì)胞內(nèi)，并發(fā)揮作用的過程 ?將外源基因?qū)氲叫∈篌w內(nèi)，并且導(dǎo)入的基因可以通過遺傳傳給子代 (將 SV40病毒的 DNA注射到小鼠囊胚腔中；小鼠受精卵原核 DNA顯微注射 ) ?明確了 2個概念：導(dǎo)入的基因可以在小鼠體內(nèi)表達(dá)并發(fā)揮作用；人類的基因同樣可以在小鼠體內(nèi)發(fā)揮與原來相同或相似的作用 ?應(yīng)用或意義：研究導(dǎo)入基因表達(dá)產(chǎn)物的體內(nèi)功能；建立疾病動物模型；進(jìn)行基因表達(dá)調(diào)控的研究如特定基因表達(dá)的時空特性；結(jié)合反義技術(shù)和 RNAi技術(shù)，用于專一性抑制小鼠體內(nèi)特定基因表達(dá) ?轉(zhuǎn)基因小鼠實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：導(dǎo)入基因表達(dá)載體的構(gòu)建；轉(zhuǎn)基因小鼠的建立和鑒定；轉(zhuǎn)基因小鼠品系的繁復(fù)；表型鑒定 ? 小鼠的基因剔除技術(shù) 指利用細(xì)胞內(nèi)染色體 DNA可以與導(dǎo)入細(xì)胞的外源 DNA在相同序列的區(qū)域內(nèi)發(fā)生同源重組的現(xiàn)象，在小鼠胚胎干細(xì)胞 (ES細(xì)胞 )中定點(diǎn)破壞內(nèi)源的基因，而后利用 ES細(xì)胞發(fā)育的全能性，獲得從 ES細(xì)胞發(fā)育而來的帶有預(yù)定基因缺陷的雜合子小鼠，通過遺傳育種最后獲得目的基因純合缺陷的小鼠個體 ?1981年 Evans和 Martin等利用小鼠胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)建立的體外可以連續(xù)擴(kuò)增和傳代的具有發(fā)育全能性的胚胎干細(xì)胞即 ES細(xì)胞 ?Robertson等對 ES細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作，并獲得ES細(xì)胞來源的小鼠個體 ?1988年 Thomas等在 ES細(xì)胞中利用 DNA同源重組的原理實(shí)現(xiàn)了對預(yù)定基因進(jìn)行缺失突變 (基因打靶 )，基因剔除技術(shù)正式建立 ?1993年 Gu等將 CreLoxP系統(tǒng)用于 ES細(xì)胞的打靶，建立了條件性基因剔除和基因敲入 (gene knockin)技術(shù) ? 建立一個基因剔除小鼠的步驟： ?基因打靶載體的構(gòu)建 ?ES細(xì)胞的 DNA轉(zhuǎn)染和基因剔除陽性細(xì)胞克隆的篩選 ?ES細(xì)胞的囊胚注射和胚胎移植 ?嵌合小鼠及基因剔除雜合子小鼠的獲得 ?純合小鼠的獲得及表型研究 ? 制備免疫缺陷型動物模型，用于免疫性疾病及抗腫瘤和抗感染的藥物研究 ? 制備各種與人類相應(yīng)遺傳病具有最接近的 遺傳改變的轉(zhuǎn)基因小鼠 ，并運(yùn)用基因敲除 (geneknockout)技術(shù)完全排除其他基因影響，精確檢測遺傳改變所導(dǎo)致的結(jié)果，研究致病基因的功能，闡明結(jié)構(gòu)、功能及在染色體上的定位 ? 利用 基因工程方法將致病基因?qū)肱咛?，誘發(fā)帶有特殊病種的動物模型，如將乙肝病毒核酸基因?qū)胄∈笊臣?xì)胞，得到篩選抗肝炎的藥物模型 ? 轉(zhuǎn)基因大動物 提供了一種生產(chǎn)特殊藥物的 生物工廠 (biofactories)，即在轉(zhuǎn)基因動物的乳汁中生產(chǎn)藥用蛋白質(zhì)，如能分泌 α1 抗胰蛋白酶 (ATT)的轉(zhuǎn)基因綿羊；可分泌人 tpA的轉(zhuǎn)基因山羊；如抗凝血酶 Ⅲ ，磷脂蛋白、血紅蛋白、生長激素等 ? 轉(zhuǎn)基因動物具有外源基因局限于乳腺表達(dá) ，受整個動物體影響少；乳腺可對蛋白質(zhì)進(jìn)行復(fù)雜的翻譯后加工，類似人體產(chǎn)品，天然活性較高；乳汁蛋白純化技術(shù)簡單，無污染 ? 基因工程技術(shù)使人類能定向改造生物，創(chuàng)造新產(chǎn)品，生產(chǎn)原先難于獲得的大量產(chǎn)品或更有效地生產(chǎn)現(xiàn)有產(chǎn)品。 ER缺陷的雄性小鼠睪丸較小，生精小管結(jié)構(gòu)改變；雌性小鼠卵泡發(fā)育受損，說明精子發(fā)生過程和卵泡發(fā)育過程有ER參與