過氧化物酶同工酶的提取、分離-預(yù)覽頁
【正文】 之越快； ③溶液的粘度： 粘度越大，電泳速度越慢，反之越快； 電泳： ④ 溶液的 pH值： 影響被分離物質(zhì)的解離度，離等電點越近，電泳速度越慢，反之越快； ⑤電場強(qiáng)度： 電場強(qiáng)度越小，電泳速度越慢，反之越快； ⑥離子強(qiáng)度： 離子強(qiáng)度越大，電泳速度越慢，反之越快； ⑦電滲現(xiàn)象： 電場中，液體相對于固體支持物的相對移動； ⑧支持物篩孔大?。? 孔徑小，電泳速度慢，反之則快。 引發(fā)產(chǎn)生自由基的方法有兩種： ① 化學(xué)法 ② 光聚合法 (1)聚丙烯胺凝膠的生成： ① 化學(xué)聚合： 引發(fā)劑 是過硫酸銨 (AP)， 催化劑 N、 N、 N’、 N’－四甲基乙二胺 （ TEMED） ， 它的堿基催化 AP產(chǎn)生氧自由基 ， 激活單體形成自由基 ， 發(fā)生聚合 。 (2)聚丙烯酰胺凝膠結(jié)構(gòu)上的特點： （ 1） 凝膠度： 是指 100mg凝膠溶液中含有單體 （ Acr） 和交聯(lián)劑 （ Bis） 的總克數(shù) ， 用 T%表示 。 （％）＋ 100?? ba bC（％）100???mbaT 上式中： a為丙烯酰胺的克數(shù)， b為甲叉雙丙烯酰胺的克數(shù)， m為緩沖液體積（ ml）。 常用 29 ： 1 第一 、 三個不連續(xù)性： ① 凝膠孔徑的不連續(xù)； ② 緩沖液離子組成及各層凝膠 pH的不連續(xù)； ③ 在電場中形成的電位梯度的不連續(xù) 。 濃縮膠的制備： 按下表制備濃縮膠 試劑名稱 濃縮膠緩沖液 濃縮膠丙膠貯液 Ap 蔗糖 體積比 1 2 2 2 取用量 1 2 2 2 用濾紙吸干水 → 倒入濃縮膠 → 插入梳子 → 封水，照光 → 當(dāng)膠色由黃變?yōu)槿榘咨砻骶酆虾谩? 電泳： 接通電源 → 穩(wěn)流 → 調(diào)節(jié)電流到每孔1mA左右 → 當(dāng)溴酚藍(lán)前沿進(jìn)入分離膠后 ，可適當(dāng)加大電流 → 待前沿下行到距膠末1cm處 ， 停止電泳
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