堿性磷酸酶的分離提取-預(yù)覽頁
【正文】 性而失活，為了獲得較好的分離提取效果，在工作中特別注意以下幾點： (1) 取用新鮮的材料，提取工作應(yīng)在獲得材料后立刻開始，否則應(yīng)在低溫下保存。 (3) 在酶的制備過程中，每經(jīng)一步處理，都需測定酶的活力和比活力。 ? 酶活力定義為：在 37℃ 下，以 2 mmol/L pNPP為底物，在 2 mmol/L Mg2+的測活體系中每分鐘催化產(chǎn)生 1 ?mol/L pNP的酶量定為 1個酶活力單位。（ 留 2 mL上清液 ，待測酶的比活力。（ 留 2 mL上清液 ，對 mol/L TrisHCl 緩沖液 pH mol/L NaCl 透析平衡，待測酶的比活力。 (7) 得到沉淀物，溶于 5 mL含 mol/L NaCl 的 mol/L TrisHCl pH 。裝入棕色瓶于 4℃ 冰箱保存。 室溫離心， 4000 r/m 20 min，收集離心上清液，并量體積。 沉淀 溶于 5 mL含 mol/L NaCl 的 mol/L TrisHCl pH 。 ?＝ 103( mol/L)1﹒ cm1 管 號 空白 1 2 3 5 mM pNPP(mL) 各 Na2CO3NaHCO3 (mL) 各管加入 mL 20 mmol/L MgCl2 (mL) 各管加入 mL H2O (mL) 各 混勻， 37℃ ， 5分鐘 酶液（ mL） / 各 37℃ ，精確反應(yīng) 10分鐘 mol/L NaOH (mL) 各管加入 mL 酶液（ mL） OD 405 nm 酶活力的測定 以 0號管調(diào)零點，測定各管的 OD405nm值，從對照標準曲線求出產(chǎn)物的 ?mol數(shù)，算出酶活力。 4 4 39。（一般稀釋 510倍）。攪拌要緩慢，盡量防止泡沫的形成，以免酶蛋白在溶液中表面變
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