優(yōu)《血紅蛋白的提取和分離》-預(yù)覽頁
【正文】 , 利用緩沖液 模擬細胞內(nèi)的 PH環(huán)境 ，保證 血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能 ，便于觀察 (紅色 )和科 學研究 (活性 ) 磷酸緩沖液 : 其目的是 : （三） 電泳： ： 帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程。 影響蛋白質(zhì)分子運動速度的因素 決定 運動方向 形成 庫侖力 形成 阻力 決定 運動速率 電荷性質(zhì) 電荷量 分子形狀 分子大小 √ √ √ √ √ √ √ : 瓊脂糖 凝膠電泳、 聚丙稀酰胺 凝膠電泳。 ： SDS能使 蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。 3. SDS作用機理 : 用 SDS測定蛋白質(zhì)分子量的方法 使用 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳 測定蛋白質(zhì)的分子量時，可選用一組 已知分子量的標準蛋白 同時進行電泳，根據(jù)已知分子量的標準蛋白的 電泳區(qū)帶位置 ，可以測定未知蛋白質(zhì) 的分子量。 血紅蛋白 兩個 α －肽鏈 兩個 β 一肽鏈 四個亞鐵 血 紅素基團 每個肽鏈環(huán)繞一個 亞鐵血紅素基團， 此基團可攜帶 一分子 O2或一分子 CO2，血紅蛋白因含有 血紅素 而 呈 紅色 。 (2)血紅蛋白的釋放： 加蒸餾水到 原血液體積 ， 加 40％體積的甲苯 （溶解細胞膜） 置于 磁力攪拌器 攪拌 10min（加速細胞破裂） 紅細胞破裂，釋放出血紅蛋白 (3)分離血紅蛋白溶液： ① 過程 ： 將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以 2022r/min的速度 離心 10 min。 或用于更換樣品的緩沖液。 ③ 頂塞的制作： 打孔 → 安裝玻璃管 。 B、代表意義 ： “ G” 表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度 及分離范圍 。 B、裝填：將 凝膠懸浮液一次性 緩慢倒入色譜柱 內(nèi)，裝填時輕輕敲動色譜柱，使凝膠填裝均勻 注意： 裝填時盡量緊密： 降低凝膠顆粒之間的空隙。 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 50cm高 （ 3）樣品加入與洗脫 ① 調(diào)節(jié)緩沖液面： 打開下端出口，使 緩沖液下降到與凝膠面 平齊，關(guān)閉出口 ② 滴加透析樣品 ： 吸管吸 1ml樣品加到色譜柱的 頂端 ， 注意： 不要觸及并破壞凝膠面。貼壁加樣。這使血紅蛋白的分離過程 非常直觀，大大簡化了實驗操作。 ： ：（略） 觀察處理的血液樣品離心后 是否分層，如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。如果 色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好
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