【正文】 ． 蛋白質(zhì)組學(xué)3． 二維凝膠電泳4． 質(zhì)譜技術(shù)5． 凝膠滯后實驗問答題1．蛋白質(zhì)組學(xué)的研究特點有哪些？2．蛋白質(zhì)組學(xué)的研究內(nèi)容有哪些？3．目前在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中主要采用了哪些技術(shù)？4．等電聚焦凝膠電泳的原理是什么？5．簡述酵母雙雜交系統(tǒng)的優(yōu)缺點。是在生物體或其細胞的整體蛋白質(zhì)水平上進行的，并從一個機體或一個細胞的蛋白質(zhì)整體活動來揭示生命的規(guī)律。 5. 凝膠滯后實驗是近年來發(fā)展起來的用聚丙烯酰胺凝膠電泳直接分析核酸與蛋白質(zhì)結(jié)合的簡單、快速、敏感方法。在等電聚焦過程中，電場所采用的載體兩性電解質(zhì)含有脂肪族多氨基多羧酸，可在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續(xù)pH梯度，蛋白質(zhì)分子在一個載體兩性電解質(zhì)(ampholyte)形成的連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)遷移到其等電點位置時，凈電荷為零，在電場中不再移動，因此可將各種不同等電點性質(zhì)的蛋白質(zhì)分離開來5．酵母雙雜交系統(tǒng)所具有的優(yōu)點：①蛋白質(zhì)作為被研究的對象不用被純化；②檢測在活細胞內(nèi)進行，可以在一定程度上反映體內(nèi)（細胞內(nèi)）的真實情況；③由于這一系統(tǒng)可以反映基因表達產(chǎn)物的累積效應(yīng)，因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間微弱或短暫的相互作用；④采用不同組織、器官、細胞類型和分化時期材料構(gòu)建cDNA文庫，可用于分析多種不同功能的蛋白。核酸的分離與純化一、選擇題1. 真核生物染色體DNA主要以下列哪種形式存在 A 環(huán)狀單鏈分子B 線性單鏈分子C 環(huán)狀雙鏈分子D 線性雙鏈分子E 線性或環(huán)狀雙鏈分子[本題答案] C2. DNA在細胞核內(nèi)通常與下列哪種物質(zhì)結(jié)合A 蛋白質(zhì)B 糖類 C 脂類 D 無機鹽 E 水[本題答案] A3. RNA主要存在于A 細胞質(zhì)B 線粒體C 細胞核D 溶酶體E 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)[本題答案] A4. 人的二倍體細胞DNA大約由多少堿基對（bp）組成109bp109bp109bp109bp109bp[本題答案] C A 200nmB 230nmC 260nmD 280nmE 320nm[本題答案] C6. 在純化核酸時往往含有少量共沉淀的鹽，常用下列哪種濃度的乙醇洗滌去除 A 100% B 95%C 70~75%D 50~60%E 30~40%[本題答案] C7. 在核酸的分離與純化過程中，不需去除的污染物是 A 蛋白質(zhì)B 脂類C 對后續(xù)實驗有影響的溶液和試劑D 不需要的核酸分子E 水[本題答案] E8. 紫外分光光度法對DNA進行測定中，下列哪項是正確的A DNA的最大吸收波長為280nmB A260為1的光密度大約相當(dāng)于50181。[本題答案] 電泳洗脫法是將待回收的DNA片段電泳出凝膠介質(zhì)，使其進入一個便于回收的固定的小容積溶液中；再通過一些方法分離純化出DNA片段。提取應(yīng)在0～4℃的條件下進行；另外避免強力的機械剪切力對核酸的破壞。1）堿裂解法：在NaOH存在的強堿性（～）的條件下，用強陽離子去垢劑SDS破壞細胞壁和裂解細胞，并使宿主細胞的蛋白質(zhì)與染色體DNA發(fā)生變性，釋放出質(zhì)粒DNA。本法只能用于小質(zhì)粒DNA（小于15kb）的小量或大量制備，適用于大多數(shù)從大腸桿菌（）菌株中分離出質(zhì)粒DNA。4. 簡述從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的主要方法有哪幾種？[本題答案] 從瓊脂糖凝膠中回收DNA片段的方法主要包括 DEAE纖維素膜插片電泳法、電泳洗脫法、低熔點瓊脂糖凝膠挖塊回收法、冷凍擠壓法及現(xiàn)在有試劑盒供應(yīng)的以硅為基礎(chǔ)的純化系統(tǒng)等。這里的基因探針是指（　 ）A．用于檢測疾病的醫(yī)療器械B．用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的DNA分子C．合成β球蛋白的DNAD．合成苯丙羥化酶的DNA片段基因工程的操作步驟：①使目的基因與運載體結(jié)合②將目的基因?qū)胧荏w細胞③檢測目的基因的表達④提取目的基因。答案一、選擇題1．B 　2．B 3．A 4．A 5．B 6．C 二、名詞解釋限制性核酸內(nèi)切酶簡稱限制酶，是一類能識別雙鏈DNA分子中某特定的核苷酸序列，并在識別序列內(nèi)或附近切割DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。按功能可分為克隆載體和表達載體。 將重組噬菌體DNA直接引入受體細胞的過程則稱為轉(zhuǎn)染。質(zhì)粒一般具有以下特性：①自主復(fù)制性，它能獨立于宿主細胞的染色體DNA而自主復(fù)制；②質(zhì)粒不相容性；③可擴增性；④可轉(zhuǎn)移性。重組的DNA分子能夠通過一定的方式進入相應(yīng)的宿主細胞，并在宿主細胞中進行無性繁殖，獲得大量的目的基因或DNA片段。然后由DNA連接酶催化連接接頭處的缺口，形成重組質(zhì)粒。臨床基因擴增檢驗技術(shù)一、A型選擇題1．下列哪種不是基因擴增檢驗技術(shù)（D）A．PCR B．LCR C．NASBA D．bDNA E．SDA2．以下基因擴增檢驗技術(shù)中，哪一種屬于等溫擴增（E）A．PCR B．RTPCR C．LCR D．Hybrid capture E．NASBA3．能使擴增靈敏度提高的方法是（B）A．多重PCR B．巢式PCR C．原位PCR D．反向PCR E．不對稱PCR4．能對未知序列進行擴增的PCR是（D）A．多重PCR B．巢式PCR C．原位PCR D．反向PCR E．不對稱PCR5．在定量PCR中，對原始模板準(zhǔn)確定量的影響因素中，最大的是（B）A．原始模板的量 B．?dāng)U增效率 C．循環(huán)次數(shù) D．?dāng)U增產(chǎn)物的量 E．循環(huán)閾值6．外標(biāo)定量方法最大的缺點是（B）A．不能測定原始模板的絕對量 B．測定的重復(fù)性和精密性有問題C．標(biāo)準(zhǔn)品制備困難 D．不能排除樣本間的測定差異E．測定必須在擴增的指數(shù)期進行7．最早推出的熒光定量探針是（A）A．TaqMan探針 B．相鄰探針 C．分子信標(biāo) D．陰陽探針 E．端粒探針8．PCR測定中的污染主要是指（D）A．標(biāo)本間的交叉法治 B．環(huán)境中的細菌污染 C．灰塵污染D．PCR擴增產(chǎn)物的污染 E．試劑中的污染物9．UNG防污染預(yù)防下列哪種污染（A）A．產(chǎn)物 B．靶核酸 C．氣溶膠 D．標(biāo)本間 E．病原微生物10．TaqMan探針采用的是（A）A．熒光標(biāo)記的探針 B．生物素標(biāo)記的探針 C．同位素標(biāo)記的探針 D．SYBR Green標(biāo)記引物 E．圓形探針X型題選擇題1．DNA聚合酶要求下述哪些物質(zhì)才能進行DNA復(fù)制（ABCD）A．dDNA B．Mg2+ C．引物 D．模板 E．小牛血清白蛋白2．核酸擴增抑制物的主要來源是（ABCE）A．血清中的血紅素 B．尿標(biāo)本是的尿素 C．核酸提取中的有機溶劑D．Mg2+ E．部分抗凝劑3．臨床基因擴增中，弱陽性室內(nèi)質(zhì)控樣本發(fā)生失控，其原因可能是（ABDE）A．核酸提取中的丟失 B．標(biāo)本中擴增抑制物殘留 C．?dāng)U增儀孔間溫度不均一D．Taq酶和/或逆轉(zhuǎn)錄酶失后 E．?dāng)U增產(chǎn)物污染二、名詞解釋1．聚合酶鏈反應(yīng)2．原位PCR3．RTPCR4．反向PCR5．多重PCR6．巢式PCR7．不對稱PCR8．錨定PCR9．熒光定量PCR10．循環(huán)閾值11．TaqMan探針12．分子信標(biāo)13．LCR三、問答題1．影響PCR反應(yīng)的因素有哪些？2．試證明Ct值與模板DNA的起始拷貝數(shù)成反比。6．如何保證臨床基因擴增檢驗實驗室的質(zhì)量。3．RTPCR：逆轉(zhuǎn)錄PCR是一種檢測RNA的方法。5．多重PCR：是在一次反應(yīng)中加入多種引物，同時擴增一份DNA樣品中的不同序列。6．巢式PCR：巢式PCR有兩對引物，一對引物對應(yīng)的序列在模板外測，稱外引物，另一對引物互補序列在同一模板的外引物的內(nèi)側(cè)，稱內(nèi)引物，即外引物擴增產(chǎn)物較長，含有內(nèi)引物擴增的靶序列，經(jīng)過二次PCR放大將單拷貝的目的DNA序列檢出。8．錨定PCR：錨定主要用于擴增未知序列或未全知的序列。Ct值與模板DNA的起始拷貝數(shù)成反比。當(dāng)探針完整時，報告基團所發(fā)射的熒光能量被淬滅基團吸收，儀器檢測不到信號。探針設(shè)計與TaqMan探針相似，只不過是探針5′和3′端的一小段核苷酸序列被設(shè)計成互補的，沒有與靶序列雜交時會形成發(fā)夾狀態(tài)，此時熒光基團和淬滅基團極端靠近，熒光幾乎完全淬滅。LCR需要兩對引物A、B和A′、B′，其中引物A與引物A′互補，引物B與引物B′互補。三、問答題1．影響PCR反應(yīng)的因素有哪些？PCR反應(yīng)體系包含DNA模板、寡核苷酸引物、DNA聚合酶、dNTP及含有必需離子的反應(yīng)緩沖液，這些因素都對PCR反應(yīng)產(chǎn)生影響。3．簡述bDNA信號放大系統(tǒng)的原理。首先用親和素包被微孔，加入目標(biāo)探針，該組探針能與等檢核酸靶序列上不同區(qū)域互補，其5′端用生物素標(biāo)記，能與微孔中的親和素高度親和結(jié)合；再向微孔中加入待測標(biāo)本，目標(biāo)核酸與固定于微孔中的目標(biāo)探針結(jié)合；再加入前放大體，該組探針的一段能與目標(biāo)核酸的不同區(qū)域互補結(jié)合，另一段與放大體（即分枝DNA）的主鏈部分的序列互補結(jié)合，分枝DNA由主鏈和數(shù)十根寡核苷酸組成，每個分枝上都有標(biāo)記探針的雜交位點，由酶標(biāo)寡核苷酸組成的標(biāo)記探針與bDNA上的互補序列結(jié)合，加入底物后最后經(jīng)化學(xué)發(fā)光檢測儀檢測。5．臨床基因擴增檢驗實驗室應(yīng)如何設(shè)置。應(yīng)注意的是，各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。6．如何保證臨床基因擴增檢驗實驗室的質(zhì)量。核酸分子雜交技術(shù)一、 A型題：1． 要探知細胞內(nèi)某一蛋白質(zhì)的表達水平，可以通過_______實現(xiàn)。A. Northern印跡雜交 B. 原位雜交 C. 吸附雜交 D. Southern印跡雜交4． 染色體原位雜交結(jié)果如圖所示羊水細胞間期核與112X和Y 染色體的DNA探針雜交。A． 21三體B． 女性胎兒C． 染色體微缺失D． 正常男性胎兒5． 染色體原位雜交結(jié)果如下圖左圖：用13號染色體（綠）和21號染色體（紅）的探針與來自羊水的間期細胞雜交，右圖：用18號染色體（淺藍色）、X染色體（綠）和Y染色體(紅)的探針與羊水細胞雜交。A． 異硫氰酸熒光素B． 四乙基羅達明C． 德克薩斯紅D． 吲哚二羧菁二、 B型題A. 著絲粒探針 B. 染色體涂抹探針 C. 基因座特異探針 D. 端粒重復(fù)序列探針1. 可用于中期及間期細胞，檢測染色體的非整倍性2. 可用于中期及間期細胞，檢測微缺失和微重復(fù)3. 可用于中期及間期細胞，檢測染色體的非整倍性和端粒微小末端重排4. 只能用于中期細胞，確定小標(biāo)識染色體或畸變5. 重復(fù)序列探針A. 固相雜交 B. 液相雜交 C. Western 印跡 D. FISH E. RxFISH6. 菌落原位雜交7. 斑點和狹縫雜交8. Southern印跡雜交9. Northern印跡雜交10. 復(fù)性速率液相雜交11. 吸附雜交12. 發(fā)光液相雜交13. 液相夾心雜交14. 原位雜交A. DNA的濃度 B. DNA的大小和復(fù)雜性 C. 溫度 D. 離子強度15. 影響DNA復(fù)性的因素16. 影響DNA變性的因素17. 影響核酸分子雜交的因素 三、 X型題1． 根據(jù)性質(zhì)及來源不同，核酸探針又可被分為A. 基因組DNA探針B. DNA探針C. RNA探針D. 寡核苷酸探針等2． 常用的核酸探針非放射性標(biāo)記物有A. 地高辛B. 生物素C. 酶D. 熒光素系統(tǒng)3． 常用的核酸探針熒光素標(biāo)記物有A． 異硫氰酸熒光素B． 四乙基羅達明C． 德克薩斯紅D． 吲哚二羧菁等4． 非放射性探針檢測方法有A． 直接法B． 間接免疫法C． 直接親合法D． 間接親合法等5． Southern印跡技術(shù)是A． 檢測RNA的核酸雜交技術(shù)B． 是以發(fā)明者的名字命名的C． 屬于固相雜交的范疇D． 可用于遺傳病的檢測6． Northern印跡技術(shù)是A． 檢測RNA的核酸雜交技術(shù)B． 是以發(fā)明者的名字命名的C． 屬于固相雜交的范疇D． 與Southern印跡雜交的方法類似，只是變性劑不同7． 核酸原位雜交是A． 核酸分子雜交技術(shù)與組織細胞化學(xué)和免疫組織化學(xué)結(jié)合起來的一種雜交方法，B． 基本原理及探針的標(biāo)記方法與傳統(tǒng)核酸分子雜交技術(shù)相同C． 不能確定與探針互補的核酸序列在細胞內(nèi)的空間位置D． 不需要將核酸從細胞中提取出來8． 熒光原位雜交的標(biāo)本A． 中期染色體B． 間期核C． 完整細胞或組織切片D． 最廣泛應(yīng)用的標(biāo)本是中期染色體9． 液相分子雜交包括A． 吸附雜交B． 發(fā)光液相雜交C． 液相夾心雜交D． 復(fù)性速率液相分子雜交四、 名詞解釋1． 核酸分子雜交2． 核酸探針3． Southern 印跡4． Northern 印跡5． Western 印跡6． 染色體原位雜交7． 重復(fù)序列探針8． 單一序列探針9． 全染色體涂抹探針10． 基因座特異探針11． 變性12． 復(fù)性13． 增色效應(yīng)14． 雜交反應(yīng)的嚴格度15． 退火16． FISH17． RxFISH五、 問答題1. 原位雜交的基本原理2. 簡述原位雜交在臨床中的