《理學(xué)酶工程》ppt課件-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 樣，因此調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)中鹽的濃度，可以使不同的蛋白質(zhì)分別沉淀。 2022/3/13 19 3)有機(jī)溶劑沉淀法 —— 溶解度的差異 ?與水互溶的極性有機(jī)溶劑如 甲醇、乙醇、丙酮等能使蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著降低。 2022/3/13 20 4）等電點(diǎn)沉淀法 —— 溶解度的差異 ? 蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，其溶解度與其凈電荷數(shù)量有關(guān)，隨溶液 pH變化而變化。 2022/3/13 21 5）熱變性沉淀法 —— 熱穩(wěn)定性的差異 適用于熱穩(wěn)定性酶。 1）凝膠過(guò)濾層析： 分 離酶蛋白時(shí)， 分子大小 大于凝膠孔徑的蛋白被凝膠排阻，因而在凝膠顆粒間隙中移動(dòng)，速度較快；小分子蛋白質(zhì)則可自由出入凝膠顆粒的小孔內(nèi)，路徑加長(zhǎng)，移動(dòng)緩慢。陰離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有負(fù)電荷的蛋白質(zhì)，陽(yáng)離子交換基質(zhì)結(jié)合帶有正電荷的蛋白質(zhì) . 2） 離子交換層析法 Ion Exchange 2022/3/13 26 2022/3/13 27 離子交換層析的基本原理 ?物質(zhì)在樹(shù)脂上結(jié)合的牢固程度即親和力大小有差異，因此選用適當(dāng)?shù)南疵撘罕憧蓪⒒旌衔镏械慕M分逐個(gè)洗脫下來(lái)，達(dá)到分離純化的目的。 3） 親和層析法 2022/3/13 29 利用對(duì)配體的特異生物學(xué)親和力的純化方法 親和色譜顆粒 具有極強(qiáng)的專(zhuān)一性 2022/3/13 31 親和層析的四個(gè)要素 Affinity 2022/3/13 32 4） 高效液相色譜層析（ HPLC） ? 特點(diǎn)： ①使用的固相支持劑顆粒很細(xì)，表面積很大 ,因而分辨率很高?；旌衔镏懈鹘M分性質(zhì)不同，因而它們?cè)谥鶅?nèi)移動(dòng)速度不同而逐漸分離。區(qū)帶的位置可用專(zhuān)一蛋白質(zhì)染料染色顯示，有些也可利用伴有顏色變化的酶催化反應(yīng)來(lái)顯示。 一維電泳 2022/3/13 37 支持物：聚丙烯酰胺凝膠。 2022/3/13 41 ? 濃度梯度凝膠電泳 從凝膠頂部到底部丙烯酰胺的濃度呈梯度變化，如通常頂部凝膠濃度為 5％，底部凝膠濃度為 25％。 ? 各種蛋白質(zhì)各自都有一個(gè)等電點(diǎn) ,在一特殊的 pH環(huán)境中 ,蛋白質(zhì)分子呈電中性 ,在電場(chǎng)中不會(huì)遷移。 pH范圍： pH3~10 丙烯酸 +多乙烯多胺 →→→ Ampholine（ LKB） 加成反應(yīng) 2022/3/13 45 ㈠ 沒(méi)通電時(shí)的變化 所有的載體兩性電解質(zhì)分子都荷電 ， 只是溶液中荷正電和荷負(fù)電的基團(tuán)數(shù)目相等 ， 凈電荷為零 。 2022/3/13 48 ㈢ 電泳結(jié)束后的變化 所有的載體兩性電解質(zhì)分子以增加 pI級(jí)數(shù)的辦法將分別在陽(yáng)、陰極之間到達(dá)它們自己的位置而給出一個(gè) pI梯度。是 將完整細(xì)胞固定 在載體上的技術(shù) : ? (1)它免去了破碎細(xì)胞提取酶等步驟，直接利用細(xì)胞內(nèi)的酶， ? (2)固定后酶活基本沒(méi)有損失。 廢水處理中的 生物膜法 是其代表性的例子。 1）凝膠包埋法 —— 將酶或含酶菌體包埋在各種凝膠內(nèi)部的微孔中，制成一定形狀的固定化酶，大多數(shù)為球狀或片狀。 使用時(shí)一定要嚴(yán)格控制好 pH值、離子強(qiáng)度和溫度。 物理交聯(lián)法： 利用細(xì)胞自絮凝形成顆粒（顆粒污泥）作為固定化的方法，此法在高濃度有機(jī)廢水的處理方面正在發(fā)揮越來(lái)越大的作用。 這種方法又稱為雙重固定化法 。 2022/3/13 68 1. 穩(wěn)定性： 固相酶的穩(wěn)定性比游離酶高 ， （ 1） 熱穩(wěn)定性： 固定化酶熱穩(wěn)定性較之天然酶提高 。 如： 天然胰凝乳蛋白酶在 ， 4℃ 保存 4個(gè)月 ， 殘留活力僅為原活力的 2%。 2022/3/13 73 (2) 同種酶 ， 采用不同的方法或不同載體固定化后 ， 其最適溫度可能不同 。 用帶正電荷載體制備的固定化酶 ， 最適 pH比游離酶最適 pH低 。 若酶催化反應(yīng)產(chǎn)物為中性時(shí) ， 固定化酶最適 pH不變 。 2022/3/13 77 1．酶制劑可用于 化驗(yàn)診斷、 治療疾病 。 此固定化酶在國(guó)內(nèi)外均進(jìn)行過(guò)廣泛的研究和應(yīng)用， 1973年就已用于工業(yè)化生產(chǎn)。 用同一種固定化青霉素?；?， 只要改變 pH等條件 ， 就既可以催化青霉素或頭孢霉素水解生成 6氨基青霉烷酸 (6APA)或 7氨基頭孢霉烷酸 (7ACA)， 也可以催化 6APA或 7ACA與其他的羧酸衍生物進(jìn)行反應(yīng) ， 以 合成新的具有不同側(cè)鍵基團(tuán)的青霉素或頭孢霉素 。 2022/3/13 81 b. 食品工業(yè)廢水 將固定化蛋白酶應(yīng)用于糧食加工廢水的預(yù)處理，其后續(xù)工藝可以采用任何一種生物處理法。 Ⅱ 、最新研究發(fā)現(xiàn)以蛋白磷酸酶活力來(lái)檢測(cè)微囊藻毒素量，最低檢出限量可達(dá) mg/L，靈敏度極高，可用來(lái)監(jiān)測(cè)水體的富營(yíng)養(yǎng)化。 2022/3/13 84 復(fù)習(xí)題 ? 酶分離純化方法的基本原理 ? 酶的固定化方法 ? 舉例說(shuō)明固定化酶在環(huán)境污染治理中的應(yīng)用
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