【正文】 法 干燥法 菌體細(xì)胞膜滲透性變化，自溶 較劇烈，易引起蛋白質(zhì)或其他組分變性 凍融法 胞內(nèi)冰晶引起細(xì)胞 膨脹破碎 較溫和，但破碎作用較弱，常需反復(fù)凍融，實(shí)驗(yàn)室使用 滲透壓沖擊法 滲透壓突然變化，細(xì)胞快速膨脹變化 較溫和，但破碎作用較弱，常與酶法合用 化學(xué)法 化學(xué)試劑處理 化學(xué)試劑溶解細(xì)胞或抽提某些細(xì)胞成分 需選擇合適的試劑，減少對(duì)活性物質(zhì)的破壞，可應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn) 制成丙酮粉 丙酮迅速脫水，破壞蛋白質(zhì)與脂質(zhì)結(jié)合的鍵 迅速脫水，減少蛋白質(zhì)變性，促進(jìn)某些結(jié)合酶釋放 生物法 酶解法 用酶反應(yīng)分解破壞細(xì)胞壁上特有的化學(xué)鍵 反應(yīng)條件溫和，但成本較高，一般僅適用于小規(guī)模應(yīng)用 組織自溶法 利用組織中酶改變、 破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)、使組織自溶 反應(yīng)條件溫和、成本低，不適用于易受酶降解的目的物的提取 超聲波破碎細(xì)胞的原理： 超聲波的破碎作用與液體中空穴的形成有關(guān)。 術(shù)語(yǔ)： 凝聚作用：（ coagulation）是指在某些電解質(zhì)的作用下，使膠體粒子的擴(kuò)散 雙電層的排斥作用降低，破壞了膠體系統(tǒng)的分散狀態(tài)，而使膠體粒子聚集的過(guò)程。 第四章 萃取法 溶液萃取法的基本原理： 如某一抗生素在有機(jī)溶劑（不溶于水）中溶解度較大，當(dāng)料液與有機(jī)溶劑接觸后，抗生素就從水相轉(zhuǎn)移到有機(jī)相中。多級(jí)逆流與錯(cuò)流萃取相比，萃取劑耗量較少，萃取液平均濃度較高。 （ 3）、介質(zhì)黏度：乳化劑能增加乳狀液的黏度，增加保護(hù)膜的機(jī)械強(qiáng)度，則形成的界面膜不 易被破壞，并可阻止液珠的聚結(jié)。由于料液移動(dòng)的方向和萃取劑移動(dòng)的方向相反，故稱(chēng)為逆流萃取。 基本原理：一、鹽離子與蛋白質(zhì)表面具相反電性的離子基團(tuán)結(jié)合，形成離子對(duì)，因此鹽離子部分中和了蛋白質(zhì)的電性，使蛋白質(zhì)分子之間電排斥作用減弱而能相互結(jié)合。（ 3）攪拌速度：攪拌能促進(jìn)成核和加快擴(kuò)散，提高晶核長(zhǎng)大的速度，過(guò)快則晶體會(huì)被打碎。等電點(diǎn)沉淀法操作簡(jiǎn)便，試劑消耗少，給 體系引入的外來(lái)物質(zhì)少，常用的純化方法，主要適用于水化程度不大，在等電點(diǎn)時(shí)溶解度很低的物質(zhì)。 7 術(shù)語(yǔ) Ks 鹽析：在一定的 pH和溫度下改變離子強(qiáng)度（鹽濃度）進(jìn)行鹽析。 透 析結(jié)晶法：為了使蛋白質(zhì)溶解度的變化緩慢而且連續(xù)，而進(jìn)行透析的方法；在鹽濃度緩慢降低的結(jié)晶情況下，進(jìn)行透析。物理吸附與吸附劑的表面積、孔分布和溫度等因素有密切的關(guān)系。如活性炭從水中吸附有機(jī) 化合物；硅膠是極性的，適宜從有機(jī)溶劑中吸附極性物質(zhì)。吸附量是指單位重量吸附劑所吸附物質(zhì)的量。除雜，生化藥物的分離。 磷酸鈣凝膠：吸附作用主要是鈣離子與蛋白質(zhì)負(fù)電基團(tuán)結(jié)合。 大網(wǎng)格高聚物吸附劑與傳統(tǒng)吸附劑相比的優(yōu)點(diǎn)： 選擇性好、解吸容易，理化性質(zhì)穩(wěn)定，機(jī)械強(qiáng)度好，反復(fù)使用，流體吸力較小。 第七章 凝膠層析 公式 Ve=Vo+KdVi 各字母的含義，凝膠層析的原理。平衡條件只是在流速很慢時(shí)一個(gè)極端情況。 選柱：層析柱的有效體積與柱比的選擇必須根據(jù)樣品的數(shù)量、性質(zhì)及分離目的加以確定。要求不漏不堵，不吸附樣品，且能保持一定的流速。為了防止柱中出現(xiàn)氣泡，凝膠懸液溫度必須與室溫平衡并用水泵減壓排氣。應(yīng)用小而均勻的填料緊密地裝在內(nèi)徑適當(dāng)?shù)闹锌梢詼p少由渦流擴(kuò)散造成的峰加寬，提高效柱。填充介質(zhì)粒度越小所造成的峰加寬效應(yīng)也小。（ 2）標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法 以多個(gè)已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白過(guò)柱，測(cè)取各自的 Ve 值。外水體積：凝膠柱床中凝膠顆粒之間的液相體積。全滲入： Kd=1 全排阻： Kd=0 分離限 ..分辨率： R=△ Ve/(1/2(Wa +Wb))分辨率與洗脫體積的差值成正比，而與兩物質(zhì)的洗脫峰寬度成反比。舉兩種樹(shù)脂骨架。強(qiáng)酸 1X7，交聯(lián)度為 7%。偶極離子的排斥作用，所以使樹(shù)脂對(duì)氨基酸的吸附量大大降低。 大孔、均孔樹(shù)脂的特點(diǎn)：大孔型離子交換樹(shù)脂的特征： 1 載體骨架交聯(lián)度高，有較好的化學(xué)和物理穩(wěn)定性及機(jī)械強(qiáng)度。 離子交換纖維素的特點(diǎn)及洗脫。 酸堿性蛋白選擇合適的離子交換纖維素。在 CM纖維素上層析則需限制在（ ~）之間。 （ 3）聚焦效應(yīng)：當(dāng)一種蛋白質(zhì)在柱上隨洗脫液下移至等電點(diǎn)處，移動(dòng)速度明顯減慢。 9舉例三種常用離子交換樹(shù)脂和離子交換纖維素。 偶極離子排斥：被吸附的氨基酸的羧基所帶的負(fù)電荷與樹(shù)脂之負(fù)電荷產(chǎn)生排斥力。 主要特點(diǎn)：經(jīng)過(guò)一此簡(jiǎn)單的處理就可以獲得所需的高純度活性物質(zhì)。 手臂，其長(zhǎng)短與親和層析的效果的聯(lián)系，為什么。配基濃度對(duì)親和力的影響。載體孔徑的大小對(duì)吸附劑的親和能力有決定性的作用。親和介質(zhì)結(jié)合目的分子后，通過(guò)改變物理場(chǎng)使介質(zhì)與目標(biāo)分子共同沉淀的方法。 缺點(diǎn)：理論塔板很低，吸附和清洗率低。阻流值： Ve/Vo。 有機(jī)染料親和層析：有機(jī)染料如蒽醌化合物和偶氮 化合物具有類(lèi)似于 NAD+的結(jié)構(gòu)，一些需要核酸類(lèi)物質(zhì)為輔酶的酶，對(duì)這些染料具有一定的親和力，將這些染料共價(jià)偶聯(lián)到纖維素或瓊脂等多糖載體上，就制得親和層析柱。 第十章 離心技術(shù) 相對(duì)離心力：（ RCF）離心力與重力的比值。 （ 2）水平轉(zhuǎn)子：結(jié)構(gòu)復(fù)雜，加工困難，機(jī)械強(qiáng)度低，重心高，容量小，低速運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)易搖擺，離心時(shí)間長(zhǎng)，壽命短而價(jià)格高。配有附屬設(shè)備和儀器，操作過(guò)程復(fù)雜，設(shè)備較貴，但離心機(jī)使用效率 高。 （ 5）連續(xù)離子轉(zhuǎn)子：低速或高速離心機(jī)轉(zhuǎn)子，可用于超速離心機(jī)。最適于自動(dòng)植物培養(yǎng)液或發(fā)酵液中連續(xù)分離單細(xì)胞和菌體，回收濃度及回收率均較高。本法適于分離顆粒大小不同而密度相近的組分，如 DNA 與 RNA 混合物、核蛋白體亞單位及線(xiàn) 粒體、溶酶體及過(guò)氧化酶體。 密度梯度的設(shè)計(jì)包括：（ 1）密度梯度介質(zhì)的選用（ 2）梯度的密度范圍（ 3）梯度的形狀 （ 4）梯度的容量、（ 5）直線(xiàn)型梯度的斜率 “密度梯度”通常的制備方法：（ 1）不連續(xù)梯度的制備、（ 2）混合梯度法（ 3）離心平衡法 梯度的取出與收集的方法：（ 1）底部穿刺法（ 2）頂步收集法 取代法 虹吸法 （ 3）切割法 凍結(jié)切割法 聚合切割法 8術(shù)語(yǔ) 區(qū)帶轉(zhuǎn)子： Anderson 轉(zhuǎn)子，無(wú)離心管，“十”字隔板將樣品槽分為四個(gè)扇形室。原理是依據(jù)不同大小和密度的顆粒在離心力場(chǎng)中沉降速度的差異進(jìn)行離心分離。 第十一章 過(guò)濾和膜分離技術(shù) 用于制作透析膜的材料所應(yīng)具有的特點(diǎn)： （ 1） 在使用的溶劑介質(zhì)中能形成具有一定孔徑的分子篩樣薄膜。 （ 3） 有良好的物理性能。不過(guò)這種措施沒(méi)有通用性，只適用于一些特殊情況。 K—— 。 P—— 壓力差， dyn/cm2 。它以特殊的超濾膜為分離介質(zhì)，以膜兩側(cè)的壓力差為推動(dòng)力，將不同分子量的物質(zhì)進(jìn)行選擇性分離。孔隙率：微孔濾膜孔隙總體積與濾膜總體積之比各向異性膜：在厚度方向上物質(zhì)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)不同的膜。開(kāi)動(dòng)真空泵，使壓力穩(wěn)定于 700mmHg 柱，然后加入潔凈蒸餾水 100ml，記錄下抽濾 100ml 水所需要的時(shí)間。 第十二章 制備高效液相色譜 HPLC 的 組成部分：進(jìn)樣器、高壓泵、預(yù)柱、色譜柱、柱頭、檢測(cè)器 理論塔板數(shù)及分離度的計(jì)算公式：理論塔板數(shù) N ： )2( 21ttN R?? 分離度 Rs : ? ?21 21 )()(21 bb RRs WWttR??? 制備型高效液相色譜的重要參數(shù)： 分離度（ resolution）、分離速度（ speed）、回收率（ recovery）、樣品容量（ capacity） 主要考慮樣品容量、回收率、和產(chǎn)率。 （ 2） 流動(dòng)相通過(guò)色譜柱呈間歇式前進(jìn)運(yùn)動(dòng)，每次前進(jìn)為一個(gè)塔板體積。用塔板高度 H 對(duì)載氣流量μ作圖為二次曲線(xiàn)，曲線(xiàn)最低點(diǎn)對(duì)應(yīng)的塔板高度最小，柱效最高，此時(shí)流速為最佳流速（ 最佳? ）其數(shù)學(xué)表達(dá)式為 H=A+B/μ +Cμ 容量因子：溶質(zhì)在固定相中的總摩爾數(shù)與流動(dòng)相中的總摩爾數(shù)之比。（ 3）毒副作用較少，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。（ 3）生物材料易染菌，腐敗。 （ 2） 發(fā)酵法：微生物通過(guò)固氮作用，硝化還原及外界吸收氨使酮酸氨基化成相應(yīng)的氨基酸。 關(guān)鍵酶：固定化天冬氨酸酶、固定化 LAspβ 脫羧酶 簡(jiǎn)述氨基酸 輸液的組方原理和原則，常用的氨基酸輸液的類(lèi)型。（ 3）在輸液中通常加入山梨醇或木糖醇，作為添加劑。 AB 鏈合成法：以人工合成的人胰島素 A 鏈和 B 鏈基因，分別插入克隆載體質(zhì)粒所攜帶的β 半乳糖苷酶基因中，再將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌 ，在細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，并在β 半乳糖苷酶基因的信號(hào)序列的控制下，合成 mRNA,再翻譯出 A鏈和 B 鏈蛋白，用溴化氰（ CNBr） 將 A鏈和 B 鏈聯(lián)接起來(lái)組成人胰島素。 在多肽 的固相合成方法中，常用的氨基保護(hù)劑有： (1) Boc（叔丁氧羰基） （ 2） Fmoc(9芴甲氧羰基 ) 熟悉多肽的固相合成方法的過(guò)程 首先將一個(gè)用 Fmoc 基團(tuán)對(duì)α 氨基進(jìn)行保護(hù)的氨基酸通過(guò)一個(gè)支臂連接到一個(gè)不溶性載體上，隨后將α 氨基脫保護(hù)，用溶液洗滌氨基酸 — 支臂 — 樹(shù)脂。 1 依據(jù)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及臨床應(yīng)用核酸類(lèi)藥物分類(lèi)： （ 1） 具有天然結(jié)構(gòu)的核酸類(lèi)物質(zhì)，有助于改善機(jī)體的物質(zhì)代謝和能量平衡，加速受損組織的修復(fù)。 1用營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株發(fā)酵生產(chǎn)核苷及核苷酸的原理和方法。即 D葡萄糖醛酸和 L艾杜糖醛酸；有兩種氨基己糖，即：氨基 D葡萄糖和氨基 D半乳糖。（ 4）多糖中的取代基與生物活性的關(guān)系乙?；焊淖兌嗵堑亩ㄏ蛐院蜋M次性 ..硫酸基：抗凝 血 ?抗病毒（包括抗艾滋病病毒） :a多糖本身結(jié)構(gòu) (均一多糖 ) b分子量 c 硫酸基團(tuán)的含量 1鹽解 — 離子交換法生產(chǎn)肝素的工藝 1術(shù)語(yǔ) 生化藥物：（ biopharmaceutics）是利用生物體、生物組織、細(xì)胞或其成分，綜合應(yīng)用生物學(xué)與醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)、微生物學(xué)與免疫學(xué)、物理化學(xué)與工程學(xué)和藥學(xué)的原理與方法加工制造而成的一大類(lèi)用于預(yù)防、診斷、治療和康復(fù)保健的制品。青霉素的基本母核為β 內(nèi)酰胺環(huán)核噻唑烷環(huán)并聯(lián)組成的 N?；?6氨基青霉烷酸，其側(cè)鏈上的 R 基可為不同基團(tuán)取代。 頭孢菌素 C 為兩性化合物，分子中有 2個(gè)羧基和一個(gè)氨基， pK值分別為 (側(cè)1. 鹽解－離子交換生產(chǎn)工藝豬腸粘膜【提取】PH 9 . 0 , 5 0 ~ 5 5 ℃ , 2 h提取液【吸附】7 1 4 樹(shù)脂樹(shù)脂吸附物【洗滌】1 . 4 m o l / L N a C l 樹(shù)脂吸附物【洗脫】3 m o l / L N a C l洗脫液【沉淀】乙醇粗品肝素【溶解】1 % N a C l , p H 1 . 5濾液【脫色】H 2 O 2 ， p H 1 1濾液【沉淀】乙醇肝素鈉精品鏈羧基 )、 (核羧基 )、 (側(cè)鏈 NH?3 )，在中型和偏酸性下呈酸性，能與堿金屬結(jié)合生成鹽類(lèi)。它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)都是以氨基酸醇與氨基酸縮合而成的苷，其名稱(chēng)應(yīng)為氨基糖苷 氨基環(huán)醇類(lèi)抗生素。 硫酸卡那霉素為白色或類(lèi)白色粉末， 無(wú)臭，味苦，有吸濕性。 （ 3）大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素 :大環(huán)內(nèi)酯抗生素是以一個(gè)大環(huán)內(nèi)酯為母體，通過(guò)羥基，以苷鍵和 1~3 分子糖相連的一類(lèi)抗生素物質(zhì)。麥迪霉素 16元環(huán)內(nèi)酯抗生素，白色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭、有苦味，易溶于甲醇、乙醇、丙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙酸丁酯等溶劑，極微溶于水，不溶于石油醚及正己烷，在水中的溶解度隨溫度的升高而降低。固體四環(huán)類(lèi)抗生素很穩(wěn)定。四環(huán)類(lèi)抗生素在弱酸性溶液中比較穩(wěn)定。 P577P592 ：性質(zhì)很不穩(wěn)定，提煉過(guò)程應(yīng)在低溫、快速、嚴(yán)格控制 pH 下進(jìn)行，注意對(duì)設(shè)備清洗 消毒減少污染，盡量避免青霉素效價(jià)的破壞損失。 ：工藝要點(diǎn)：酸化過(guò)濾→粗品結(jié)晶→溶解→連續(xù)結(jié)晶→分離洗滌→氣流干燥→尿素復(fù)鹽結(jié)晶→溶解→結(jié)晶→分離洗滌→固定床氣流干燥 根據(jù)給定藥物的性質(zhì)，試設(shè)計(jì)其分離純化方法。 330— OH 型樹(shù)脂去除硫酸根等陰離子。 第十五章 生物制品制造工藝 試述 DNA 重組藥物制造的主要操作過(guò)程包括以下步驟： （ 1）獲得目的基因 （ 2）將目的基因和載體連接，構(gòu)建 DNA 重組體；（ 3）將 DNA 重組體轉(zhuǎn)入宿主菌構(gòu)建工程菌；（ 4）工程菌的發(fā)酵（ 5）外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化 （ 6）產(chǎn)品的檢驗(yàn)和制劑制備等。原核基因工程以原核細(xì)胞作為表達(dá)宿主，如大腸桿菌、枯草桿菌等；而 真核基因工程則以真核細(xì)胞為表達(dá)宿主，如酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞等。 8g/L。 疫苗：一切通過(guò)注射或黏膜途徑接種，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)特點(diǎn)病原特異性抗體或細(xì)胞免疫，用于預(yù)防、治療、診斷的藥品。 基因藥物：以基因物質(zhì)（ RNA 和 DNA 及其衍生物）作為治療的物質(zhì)基礎(chǔ)，包括基因治療用的重組目的 DNA片段、重組疫苗、反義藥物和核酸等 合成肽疫苗：是指用化學(xué)方法合成能夠誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)的多肽制成的疫苗。 載體疫苗：是指利用微生物做載體，將保護(hù)性抗原基因重組到微生物中，使用能表達(dá)保護(hù)性抗原基因的重組微生物制成