【正文】 ，皮膚攝取能力遠(yuǎn)大于鰓，因此， 口腔和腹腔免疫可明顯刺激系統(tǒng)免疫應(yīng)答，浸泡和肛門免疫更適宜于誘導(dǎo)粘膜免疫反應(yīng) 。 1。 2。 免疫： 水產(chǎn)動(dòng)物免疫的基本概念 3. NK細(xì)胞 它為發(fā)現(xiàn)較晚的一群淋巴細(xì)胞，最主要功能為非特異性殺傷靶細(xì)胞，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞具較強(qiáng)殺傷作用。 5. 其他免疫細(xì)胞 除上述免疫細(xì)胞外，血液中許多細(xì)胞均直接或間接參與免疫應(yīng)答過(guò)程，如中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和血小板等。 細(xì)胞因子種類繁多，具有多種生物學(xué)活性，在免疫系統(tǒng)的調(diào)控中作用重大。 1) 自動(dòng)免疫： 因感染病 原 或注射抗 原 （疫苗）而獲得的免疫 抗原： 凡能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反應(yīng)的物質(zhì)。 作用： 與哺乳動(dòng)物 NK細(xì)胞類似，能夠殺傷病毒感染的 靶細(xì)胞，從而具有抗感染作用 免疫： 非特異性免疫 4. 非特異性體液因子 1) 補(bǔ)體： A. 來(lái)源與成分： 存在于血清中，由多種非特異性血清蛋白 (肝細(xì)胞、單核細(xì)胞 產(chǎn)生 )組成，它對(duì)熱敏 感， 45℃ 20min失活 B. 作用： a. 在抗原抗體反應(yīng)中通過(guò)補(bǔ)體第二激活通路（ 經(jīng)典 途徑 ）補(bǔ)充抗體作用（ 增強(qiáng)吞噬 ）； b. 激活后的補(bǔ)體 (形成 膜攻擊復(fù)合物 )能溶解細(xì)胞膜，殺 滅病原（ 溶解 ）； c. 激活后的補(bǔ)體可促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬和釋放組 胺等多種功能協(xié)助殺滅病原（有助于 炎癥應(yīng)答 ）， 。 c. 抑制腫瘤生長(zhǎng)活性： ①可抑制腫瘤細(xì)胞的分裂增殖 。 ： 通過(guò)激活巨噬細(xì)胞 ,產(chǎn)生呼吸爆發(fā) ,釋放氧自由基，通過(guò)氧自由基攻擊 脂質(zhì)膜，寄生蟲(chóng)體被破壞。 免疫： 非特異性免疫 免疫： 非特異性免疫 6) 轉(zhuǎn)鐵蛋白： 為 ? 球蛋白，血清中多見(jiàn)； 7）植物凝集素（ Lectin）： 是非免疫源性蛋白，結(jié) 合（凝集）微生物或抑制其生長(zhǎng)，可能與免疫 防御有關(guān)。 b. 免疫反應(yīng)性： 指抗原分子能與相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合產(chǎn)生免疫反應(yīng)的性能。該復(fù)合物不但可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)半抗原的抗體，也可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)蛋白質(zhì)載體的抗體。 免疫類型： 特異性免疫 2. 抗原的特性 1) 特異性： 具有與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性反應(yīng)的能力； 2) 異物性： 正常情況下，能引起機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的抗原都是異種或 異體物質(zhì)，機(jī)體本身的物質(zhì)或細(xì)胞不能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答；并且， 親緣關(guān)系越遠(yuǎn)、組織結(jié)構(gòu)間差異越大，抗原性越強(qiáng)。 2) 化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成： 大分子物質(zhì)并不都有良好免疫原性，還與組成與結(jié)構(gòu)有關(guān) 如：明膠分子量雖達(dá) 10萬(wàn)，但其組分為直鏈 . ，易被分解破壞，免疫原性弱 。 具有異物性的物質(zhì)包括以下三類： a. 異種物質(zhì)：如細(xì)菌、病毒、異種血清、植物蛋白等； b. 同種異體物質(zhì)：如人類紅細(xì)胞表面血型抗原（ A、 B、 O、 Rh）等； c. 改變和隱蔽的自身物質(zhì)：主要包括在外傷、感染、輻射或藥物作用下，組織結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的“自身”物質(zhì)和釋放入血的自身抗原，如甲狀腺蛋白，等。 此外，抗原的免疫原性還與抗原劑量、佐劑、 機(jī)體年齡與生理狀態(tài) 等因素有關(guān)。 1) 抗原決定簇（ antigenic determinant）： 指位于抗原分子表面、決定抗原特異性的特定化學(xué)基團(tuán)，它是決定免疫應(yīng)答和免疫反應(yīng)呈現(xiàn)高度特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。 b. 抗原結(jié)合價(jià)： 一個(gè)抗原分子上能與相應(yīng)抗體分子結(jié)合的抗原決定簇的總數(shù) 單價(jià)抗原： 有些半抗原只能和抗體分子中一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合，為單價(jià)抗原 多價(jià)抗原： 多數(shù)抗原有多個(gè)相同和不同抗原決定簇，能和多個(gè)抗體分子結(jié)合。其中： 類屬抗原： 存在于同一種屬或近緣種屬中的共同抗原稱 類屬抗原 ； 異嗜性抗原： 存在于不同種屬生物間的共同抗原稱 異嗜性抗原 。 A. 根據(jù)抗原的來(lái)源及與機(jī)體的親緣關(guān)系分類 (1) 異種抗原： 指來(lái)自另一物種的抗原物質(zhì)。 C. 抗原的其它分類方法： 如依性能分完全抗原和半抗原，依組分分蛋白質(zhì)抗原、脂蛋白抗原、糖蛋白抗原、多糖抗原和核蛋白抗原等，依獲得方式分天然、人工和合成抗原等 。 a. 完全氟氏佐劑： 以上三種成分俱全的佐劑 b. 不完全氟氏佐劑： 不含分支桿菌的氟氏佐劑，其對(duì)機(jī)體刺激作用較弱 免疫： 特異性免疫 4) 作用： a. 增加抗原的免疫原性（增加抗原的表面積）； b. 增強(qiáng)抗體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答能力； c. 改變抗體產(chǎn)生的類型； d. 引起或增強(qiáng)遲發(fā)型超敏反應(yīng)。 (2) 膜表面免疫球蛋白 (Surface membrane immunoglobulin, SmIg)：B細(xì)胞膜上可作為 抗原識(shí)別受體 的免疫球蛋白。 體液免疫： 由抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。 2. 作為抗體必須具備的條件： 1) 只有脊椎動(dòng)物的漿細(xì)胞才能產(chǎn)生； 2) 必須有抗原刺激； 3) 能與相應(yīng)抗原產(chǎn)生特異性結(jié)合； 4) 其化學(xué)本質(zhì)是一種具免疫功能的球蛋白。它有 2類： ?型和 ?型 每條肽鏈包括 可變區(qū) (V區(qū) ) 和 穩(wěn)定區(qū) (C區(qū) )。 b. 兔： IgG, IgA, IgM。 4) 魚(yú)類 ： IgM。 (2) 不少自身抗體和引起 II、 III型變態(tài)反應(yīng)的抗體也屬 IgG。 b. 作用： 其作用與 IgG類似，具有殺菌、溶菌、調(diào)理吞噬及凝集作用等，不過(guò)，由于 IgM抗原結(jié)合效價(jià)最高，是高效能的抗菌抗體，它的上述作用均比IgG強(qiáng)。 (3) 是少數(shù)在消化道中不被消化的 Pr之一； (4) 嬰兒出生 46個(gè)月后才能合成，但可從母乳中獲得 SIgA (5) SIgA主要分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜表面以及唾液、淚液、初乳和與粘膜相關(guān)的分泌液中，是局部粘膜防御感染的重要因素； (6) 血清型 IgA具有中和毒素、調(diào)理吞噬的作用。 免疫： 特異性免疫 第四節(jié) 免疫學(xué)方法及其應(yīng)用 一、基本概念 1. 血清學(xué)反應(yīng)： 抗原與相應(yīng)抗體在 體外 發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng) 。 可逆性是 免疫吸附層析法 提取免疫純抗原或抗體的理論基礎(chǔ)。 免疫： 免疫學(xué)方法及其應(yīng)用 三、主要的抗原抗體反應(yīng) （一）凝集反應(yīng)（ Agglutination） 1. 定義： 顆粒性抗原 (如完整的紅細(xì)胞或細(xì)菌 )與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間形成肉眼可見(jiàn)的凝集物，稱為凝集反應(yīng)。 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 (2) 間接凝集反應(yīng) (indirect or passive agglutination) ： 將可溶性抗原先吸附于一種與免疫無(wú)關(guān)的載體顆粒表面，再與相應(yīng)抗體作用，在合適電解質(zhì)存在時(shí)，出現(xiàn)載體顆粒被動(dòng)凝集現(xiàn)象。其中，前兩者敏感性不高，已少用，派生方法現(xiàn)仍廣泛應(yīng)用。若反應(yīng)中有兩種或兩種以上抗原抗體系統(tǒng)，在瓊脂中即可出現(xiàn)兩條或兩條以上的沉淀線。 抗體等電點(diǎn)較抗原高 ，在此緩沖液中帶陰離子少，分子量大，泳動(dòng)較慢，同時(shí)因電滲作用（電滲是電場(chǎng)中溶液對(duì)于固體的相對(duì)移動(dòng)，瓊脂是酸性物質(zhì)含有較多的硫酸根，在堿性緩沖液中帶負(fù)電，而與它接觸的溶液帶正電，因此液體向陰極移動(dòng)，產(chǎn)生電滲），反而向陰極泳動(dòng)，這樣就使抗原、抗體在電場(chǎng)中相對(duì)移動(dòng)，而形成對(duì)流。 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 （三）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 1. 定義： 有補(bǔ)體參與，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素作指示系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng) 2. 組成： 有 2個(gè)系統(tǒng)共 5種成分 1) 檢測(cè)系統(tǒng)： 包括已知抗原 (或抗體 )和待測(cè)抗體 (或抗原 ) 2) 指示系統(tǒng)： 包括綿羊紅細(xì)胞和溶血素 (綿羊紅細(xì)胞的特異性抗體 ) 3) 補(bǔ)體： 取自豚鼠的新鮮血清 3. 補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的基本原理 1) 補(bǔ)體可與任何抗原抗體復(fù)合物相結(jié)合； 2) 指示系統(tǒng)遇補(bǔ)體后就出現(xiàn)明顯的溶血反應(yīng) 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 4. 操作過(guò)程和結(jié)果 1) 陽(yáng)性反應(yīng) ： + 補(bǔ)體 抗原 (體 )+待測(cè)抗體 (原 ) ?抗原抗體復(fù)合物 抗原抗體和補(bǔ)體復(fù)合物 + 指示系統(tǒng) (綿羊紅細(xì)胞和溶血素復(fù)合物 ) 結(jié)果：（因此時(shí)無(wú)游離的補(bǔ)體與指示系統(tǒng)結(jié)合） 不發(fā)生溶血 2) 陰性反應(yīng) ： + 補(bǔ)體 抗原 (體 )+待測(cè)抗體 (原 ) ?抗原 +抗體 抗原 +抗體 +補(bǔ)體 (游離 ) + 指示系統(tǒng) (綿羊紅細(xì)胞和溶血素復(fù)合物 ) 發(fā)生溶血 綿羊紅細(xì)胞、溶血素及補(bǔ)體復(fù)合物 3）作用： 用于檢測(cè)血清中抗體的存在與否？ 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 （四） 中和反應(yīng) 定義： 特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，能抑制抗原的多種生物學(xué)活性（ 如：毒性、酶活性和病毒感染性等 ）的反應(yīng)。該試驗(yàn)也可用于抗毒效價(jià)的測(cè)定。 (1) 過(guò)程： +待測(cè)抗原 熒光素 +抗體 ? 熒光抗體 (一段時(shí)間后沖洗 ) 熒光鏡檢測(cè)結(jié)果： (2) 結(jié)果： 陽(yáng)性 — 可見(jiàn)帶熒光的抗原抗體復(fù)合物； 陰性 — 無(wú)熒光 (因?yàn)閹晒獾目贵w不能與抗原結(jié)合，被沖洗掉 ) (3) 用途： 用以檢測(cè)病毒感染細(xì)胞、細(xì)菌和沉積于組織中的免疫復(fù)合物等。 以 酶標(biāo)儀 作定量或定性分析。 6. 常用方法： 目前應(yīng)用最多的為 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ enzyme linked immusorbent assay, ELISA) ：是利用抗原或抗體能非特異性吸附于聚苯乙烯等固相載體表面的特性，使抗原 抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行的一種免疫酶技術(shù)。 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 例 2. 雙抗體夾心法 ： 主要用于測(cè)定大分子抗原 過(guò)程： 以純化的特異性抗體或含抗體的血清包被酶標(biāo)反應(yīng)板，孵育后洗滌?封閉液封閉酶標(biāo)板，孵育后洗滌 ?加入待測(cè)樣品，孵育后洗滌 ?加入酶標(biāo)抗體，孵育后洗滌 ?加入酶底物，測(cè)定酶促反應(yīng)強(qiáng)度。 (3) 用層析等方法將 Ag*Ab和 AgAb復(fù)合物 (bind, B)與游離 Ag*和 Ag (free, F)分離，測(cè)定 B和 F的放射活性。 免疫應(yīng)用： 免疫學(xué)方法 （四）熒光和化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) A. 熒光免疫技術(shù) 1. 定義： 用熒光素（如異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明和四甲基異硫氰酸羅丹明）標(biāo)記來(lái)檢測(cè)抗原抗體反應(yīng)的免疫分析技術(shù)。這種方法兼具有發(fā)光分析的高靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的高度特異性。因該法不經(jīng)脫水和包埋等步驟，抗原保護(hù)較好，且有利于免疫試劑在組織中的滲透；但在技術(shù)上困難較多，需配制專用設(shè)備。該法只能用于病體已產(chǎn)生抗體的診斷。 三、用于疾病的預(yù)防 ? 水產(chǎn)動(dòng)物免疫最重要的應(yīng)用方向?yàn)檠兄埔呙邕M(jìn)行疾病的預(yù)防 ? 在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中，由于只有魚(yú)類、兩棲類和爬行類等脊椎動(dòng)物 才能在接種抗原后產(chǎn)生抗體，目前因此也認(rèn)為只有這些動(dòng)物才能用免疫學(xué)方法進(jìn)行疾病的預(yù)防。 免疫： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 4. 亞單位疫苗： 病原微生物中能使機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù)力的成分只占病原體小部分，將這些 成分分離 出來(lái)制成的疫苗為亞單位疫苗。 免疫： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 B. 根據(jù)疫苗的性質(zhì)和組成成分來(lái)分： 1. 單價(jià)疫苗： 由單一株型病菌培養(yǎng)制備的疫苗 2. 多價(jià)疫苗： 由同一種病菌的不同型或不同株培養(yǎng)制備的疫苗 3. 聯(lián)苗 (混合疫苗 )： 由一種以上的病菌或其代謝產(chǎn)物制備的疫苗 如：二聯(lián)疫苗、三聯(lián)疫苗 …… C. 根據(jù)抗原類別來(lái)分： 1. 病毒疫苗： 如草魚(yú)出血病疫苗 2. 細(xì)菌疫苗： 如石斑魚(yú)創(chuàng)傷弧菌疫苗 3. 寄生蟲(chóng)疫苗： 如小瓜蟲(chóng)疫苗 免疫： 免疫學(xué)原理的應(yīng)用 （二）魚(yú)用疫苗的接種方法 1. 注射法： 將疫苗直接注射到肌肉、腹腔或心臟的免疫接種方法。 5. 其他方法： 如超聲免疫法等，該法是在浸泡法基礎(chǔ)上外加超聲作用而實(shí)施的接種方法，目前尚