原生質(zhì)體無菌分離培養(yǎng)與融合-預(yù)覽頁
【正文】 （膠頭部分 70％的酒精浸泡；倒置顯微鏡；培養(yǎng)箱 實驗試劑 ? 70％的酒精 ? 3％的次氯酸鈉 (體積比） ? 酶液： ％的纖維素酶和 ％的果膠酶，用 13％的 CPW配制 ? 20％蔗糖溶液 ? CPW洗液以及含 13％甘露醇的 CPW ? MS母液的配置（見細(xì)胞生物學(xué)實驗 98頁），有機(jī)質(zhì)母液裝棕色試劑瓶，其余裝普通試劑瓶，儲存冰箱備用。 ? 用 350目網(wǎng)過濾除去未完全消化的葉片等殘渣。由于比重不同，蔗糖溶液與原生質(zhì)體懸液中間有一明顯界面 (注意要有明顯界面 ). (2) 1000轉(zhuǎn) /分離心 5分鐘，此時死細(xì)胞及碎片降至蔗糖溶液內(nèi)，聚集在離心管底部，而活細(xì)胞由于有大量泡沫，故漂浮在上下界面處， (3)用細(xì)管吸取漂浮在上下界面處的健康原生質(zhì)體，轉(zhuǎn)入干凈的離心管中，加入 3～ 4ml13%CPW洗液離心收集沉淀，用 13%CPW的 CPW重新懸浮。（ 觀察時注意不同程度的融合現(xiàn)
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