分子遺傳學(xué)8章基因操作技術(shù)及其應(yīng)用-預(yù)覽頁
【正文】 ficial chromosome, YAC) 200kb — 2021kb 動物病毒 DNA改造的載體 （如腺病毒，腺病毒相關(guān)病毒，逆轉(zhuǎn)錄病毒） （四）、外源 DNA片斷和載體的連接 1. 粘性末端連接 方式： (1)同一限制酶切位點連接 (2)不同限制酶切位點連接 配伍末端連接 非配伍末端連接 Bam HⅠ 切割反應(yīng) GGATCC CCTAGG T4 DNA連接酶 15186。C 重組體 載體自連 目的基因 自連 3. 同聚物加尾連接 在末端轉(zhuǎn)移酶 (terminal transferase)的作用下，在 DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再進(jìn)行粘端連接。 5180。 5180。 5180。 5180。 5180。 5180。 3180。 轉(zhuǎn)化 （ transformation） 通過自動獲取或人為地供給外源 DNA， 使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型 ，稱為轉(zhuǎn)化作用 。 2) 反應(yīng)體系： DNA模板，引物， dNTP， Taq DNA聚合酶，buffer 3) 反應(yīng)程序： 變性 ( 94~95oC) 退火 延伸 ( 37~55 oC) ( 70~72 oC ) 72 oC延伸 10min 3035cycles DNA擴(kuò)增 100萬倍 PCR特點及應(yīng)用 優(yōu)點：（ 1）特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定可靠、快速； （ 2）微量的模板 DNA即可擴(kuò)增大量產(chǎn)物。 C文庫具有組織細(xì)胞特異性 。 蛋白 蛋白雜交（ Western blot）。 2）探針制備方法 缺口平移法（ Nick translation） 隨機(jī)引物法（ Random primer） 末端標(biāo)記法（ Random primer） Nick Translation OH p OH+ P P DNA dNTP ， DNA酶 I，DNA聚合酶 I 32PdNTP BiodNTP 隨機(jī)引物標(biāo)記探針 5` 3` 5` 5` 3` DNA 32pdNTP,BioDntp 6bp primer Klenow,dNTP 變性 復(fù)姓 DNA末端標(biāo)記 Southern blot 原理和步驟 提取 T 、 Cell DNA 限制酶消化 DNA片段 電泳分離 變性轉(zhuǎn)移至尼龍膜 變性、雜交 洗膜、放射自顯影、結(jié)果分析 Southern blot + 探針 Southern blot Northern blot 原理和步驟 提取 T 、 Cell 總 RNA 提純分離 mRNA 凝膠電泳分離 RNA 變性轉(zhuǎn)移至尼龍膜 雜交 洗膜、放射自顯影、結(jié)果分析 Western blot 原理和步驟 提取 T 、 Cell 蛋白 聚丙烯酰胺凝膠電泳，分離蛋白 變性轉(zhuǎn)移至尼龍膜 抗體雜交 Western blot
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1