20xx年醫(yī)學(xué)專題—木瓜蛋白酶的提取-全文預(yù)覽
【正文】 高聚物或一種高聚物與鹽類在水中能形成兩層互不相溶的勻相水溶液,即雙水相體系。3） SPsephadex C 50柱色譜 上述透析產(chǎn)物在室溫條件下上SPsephadex C50柱( cm20cm)進(jìn)行梯度洗脫,洗脫液是含0～ mol/L NaCl的醋酸緩沖液(50 mmol/L,pH ), mL/min。常作鹽析的無機(jī)鹽有氯化鈉、硫酸鈉、硫酸鎂、硫酸銨等。3）樣品蛋白含量測定：（1）、將待測樣品稀釋n和m倍,~；（2）、取稀釋過的樣品200ul加入試管中,加入2ml工作液,振蕩均勻,室溫放置5min,在595nm處測定吸光值；（3）、每個樣本做三個平行?；靹蚝笥肳hatman 1號濾紙過濾,棕色瓶保存,可使用數(shù)周,但在使用前需要再過濾。實驗二：蛋白濃度測定（Bradford法）：實驗原理：蛋白與染料結(jié)合顯色的原理設(shè)計的。最適溫度為70 80℃ , 。果漿在一定條件下進(jìn)行超聲波處理,4000 r min1離心15min。梅特勒托利多PL202 S電子天平。UV 2000型紫外可見分光光度計。2）實驗內(nèi)容：試驗材料：番木瓜。最后在紫外分光光度計中測取酶的吸光度，通過OD值換算酶的活性。 掌握酶活力測定的方法，并評定木瓜蛋白酶的活性。同時，為了滿足各行各業(yè)對木瓜蛋白酶的需求，尤其是食品與醫(yī)藥行業(yè)，研究如何分離純化得到成本低、純度高的木瓜蛋白酶就很有意義。如洗衣粉等洗滌劑中加入木瓜蛋白酶能快速地清洗衣物中的血漬和汗?jié)n。巴非蛤貝肉經(jīng)復(fù)合蛋白酶水解，適當(dāng)調(diào)配可制作營養(yǎng)豐富、海鮮風(fēng)味濃郁、具有一定保健功能的口服液。適用于各種風(fēng)味的高、中、低檔餅干、糕點及面包的制造。作為啤酒品質(zhì)改良劑：主要用于改良啤酒品質(zhì)。. Naveena等人曾研究了各類植物蛋白酶對水牛肉的嫩化作用，結(jié)果表明，利用木瓜蛋白酶處理過的水牛肉，其肌原纖維蛋白溶解度顯著增加，剪切力值顯著減少。四、木瓜蛋白酶在食品工業(yè)中的應(yīng)用：作為肉類嫩化劑：老齡畜禽肉煮熟后，口感粗糙、堅硬，而加入嫩肉粉后，肉質(zhì)就會變的松軟、嫩化。雙水相萃取具有目標(biāo)產(chǎn)物收率高、易于連續(xù)化操作、不存在有機(jī)溶劑殘留、分離過程經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點，在木瓜蛋白酶的制備中應(yīng)有一席之地，但我國目前尚無這類報道。結(jié)果表明，該親和膜具有良好的色譜性能，對木瓜蛋白酶有較高的吸附量（），使用該親和膜對木瓜粉中的木瓜蛋白酶進(jìn)行分離純化。結(jié)果表明：超聲功率300W，超聲時間200s，果漿質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%。超聲波產(chǎn)生的空化效應(yīng)，一方面賦予溶劑對細(xì)胞壁更大的滲透力，并強(qiáng)化細(xì)胞內(nèi)外的質(zhì)量傳輸，另一方面破壞細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)含物更易釋放，從而強(qiáng)化了提取過程。何繼芹等研究了用絮凝技術(shù)純化木瓜蛋白酶。實驗結(jié)果表明，用該法制備的木瓜蛋白酶純度相對較高，酶的比活力達(dá)到了1184U/mg，適宜作為化妝品成分。實驗結(jié)果表明，說明超濾后木瓜蛋白酶的純度有所增加。但是這種方法存在環(huán)境污染等問題。（2）單寧沉淀法：乙引等用單寧沉淀法提取了木瓜蛋白酶。純木瓜蛋白酶制品可含有：（1）木瓜蛋白酶，分子量21000，約占可溶性蛋白質(zhì)的10%；（2）木瓜凝乳蛋白酶，分子量26000，約占可溶性蛋白質(zhì)的45%；（3）溶菌酶，分子量25000，約占可溶性蛋白質(zhì)的20%；及纖維素酶等不同的酶。木瓜蛋白酶是一種含巰基(SH)肽鏈內(nèi)切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有較廣泛的特異性，對動植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有較強(qiáng)的水解能力，但幾乎不能分解蛋白胨。木瓜蛋白酶是番木瓜中含有的一種低特異性蛋白水解酶，廣泛地存在于番木瓜的根、莖、葉和果實內(nèi)，其中在未成熟的乳汁中含量最豐富。二、 木瓜蛋白酶基本介紹： 木瓜蛋白酶，又稱木瓜酶，是一種蛋白水解酶。它的外觀為白色至淺黃色的粉末，微有吸濕性；木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液為無色或淡黃色，有時呈乳白色；幾乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有機(jī)溶劑。另外六個半胱氨酸殘基形成了三對二硫鍵,且都不在活性部位。%，但此法不利于酶活的保持，105U/g，且產(chǎn)品的純度較低。結(jié)果表明，這種方法生產(chǎn)的酶得率較低，%，但酶活力較高，105U/g。木瓜蛋白酶是大分子物質(zhì)，在超濾過程中被截留，而水及小分子雜質(zhì)透過膜，從而達(dá)到分離和純化的目的。在粗酶液中加入一定濃度的硫酸銨溶液進(jìn)行鹽析，然后調(diào)pH值，離心取沉淀，干燥，得酶產(chǎn)品。（3）、絮凝法：絮凝法是在木瓜乳膠水提取液中添加某種化合物，該化合物能與木瓜蛋白酶生成難溶性的復(fù)合物，從而使酶從溶液中沉淀析出。（4）、超聲波法：超聲波提取法作為一種新型的提取技術(shù)已經(jīng)比較廣泛地應(yīng)用于天然植物有效成分的提取。選擇新鮮的番木瓜，清洗后切塊破
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