【正文】 水按一定比例配制而成的 。這個問題可用蟲卵去殼來解決，即用化學除去蟲卵的咖啡色外殼而不影響胚胎的活力。 ② 用虹吸法將無節(jié)幼體吸入網(wǎng)袋內(nèi) ， 濾去淡水 。在分離過程如發(fā)現(xiàn)鹵蟲有缺氧現(xiàn)象，應立即停止分離，待沖氣增氧后再繼續(xù)分離。③ 用黑布罩住水族箱，在水族箱的一角開一小孔，并在距該孔 10cm處放一只 100W燈泡，靜置可見無節(jié)幼體趨光不斷向此處集中。 分離方法有多種 ， 主要有趨光分離和比重分離 。 在前述的孵化條件下，孵化24— 36 h。 2. 孵化方法 準備孵化缸，最好使用具錐形底的玻璃鋼槽。 一般采用的蟲卵密度為 1— 3g／ L。 據(jù)報道將 DO維持在 2mg／ L的水平可得到最佳的孵化效果。有些品牌的鹵蟲卵推薦使用鹽度為 15的海水。 (2)鹽度：鹵蟲卵在天然海水甚至在鹽度為 100的鹵水中都能孵化。 (1)溫度：孵化水溫要維持在 25℃ 一 30℃ ， 最好 28℃ 。 孵化率是衡量蟲卵的孵化效果和蟲卵質(zhì)量的尺度 。 這是 — 種簡單實用的儲存鹵蟲卵的方法 ， 在沒有鹵水的地區(qū)可用粗鹽代替 。 (三 ) 鹵蟲卵的貯存 鹵蟲卵貯存原理是使其生命活動處于停滯狀態(tài) ，在貯存過程中不能啟動蟲卵的孵化生理 。 此法加工的蟲卵適于直接孵化 。 除以上步驟外 ， 為了終止滯育和提高孵化率 ，鹵蟲卵的加工通常還包括以下內(nèi)容： (1)冰凍處理：將除去雜質(zhì)的蟲卵放入飽和鹵水中于 25℃ 冷凍 1— 2個月 。 (5)干燥：用淡水分離后的蟲卵應盡快將含水量降到 10％ 以下 ，只有在此含水量以下 ， 蟲卵的生理活動才能停止 。 (4)用淡水進行比重分離：這一步驟是為了除去空殼和比蟲卵輕的雜質(zhì) ， 時間不超過 15min。 先用 1mm和 ， 再用150181。 由于降水引起鹽度下降 ， 容易使鹵蟲卵吸水甚至孵化 ， 雨后不僅要抓緊時間捕撈 ， 而且要及時對所捕獲的鹵蟲卵進行脫水等加工處理 。m孔徑的篩絹縫制而成的小網(wǎng)在鹽田 、 鹽湖的岸邊撈取 。蟲卵完全吸水后對溫度則有明顯的反應，當溫度低于 18℃ 或高于 40℃時就可使胚胎致死，在 18℃ 一 4C及 32℃ 一 40℃ 時不使胚胎致死，但可停止胚胎的活動，這種停止是可逆的，但長時間放置會降低蟲卵的孵化率。 卵殼內(nèi)為胚胎，一般處于滯育期。也可作為浮游動物的餌料。由于鹵蟲蛋白質(zhì)含量豐富，是魚類和甲殼類的良好餌料，且飼養(yǎng)容易，天然資源量很大，有望取代魚粉成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)最重要的蛋白質(zhì)源。此外，為了盡量使用具有較高能量的無節(jié)幼體，應使用剛剛孵化的無節(jié)幼蟲。它在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的應用日趨廣泛，地位也日趨重要。 常見到的多是雌性個體 ， 通常以孤雌生殖的方式來繁殖后代；只有在環(huán)境不良時才出現(xiàn)雄性個體 ，行有性繁殖 ， 產(chǎn)生休眠卵 ， 渡過惡劣的環(huán)境；有些種群只行孤雌生殖 ， 終年見不到有雄性個體的出現(xiàn)；然而 ， 在另一些種群 ， 則一遇不良的環(huán)境條件 ， 即見大量的雄蟲 。 具體方法為： 雜草 50克 、 自來水 1000mL， 煮沸 2 h， 放置 1晝夜后過濾 ， 以濾液為培養(yǎng)液 ， 用顯微鏡從野外污水中吸選纖毛蟲， 接種于培養(yǎng)液 ， 在 20℃ 下培養(yǎng)一周 ， 能繁生大量纖毛蟲。 (2)用篩絹網(wǎng)將要強化的輪蟲收集起來 ， 沖洗后轉(zhuǎn)移到強化缸中 ， 輪蟲密度為 300一 500個／ mL。 這類強化劑含有多種不飽和脂肪酸和維生素 ， 是經(jīng)乳化制成的乳濁液 ， 使用時比較容易與水混合 。輪蟲的密度以 400一 500個／ mL效果較好，強化過程中需不間斷充氣，控溫在 25℃ 一 28℃ 。 (1)強化培養(yǎng)一般在玻璃鋼桶內(nèi)進行 ， 也可在小型的水泥池內(nèi)進行 。 因輪蟲體內(nèi)的的 EPA／ DHA主要是從其攝食的餌料中獲取的 ， 而海洋微藻中 EPA／ DHA的含量通常都比較高 ， 完全用海洋微藻培養(yǎng)的輪蟲 — 般并不缺乏這些營養(yǎng)成分 。 輪蟲密度的檢查可用肉眼估計，但用鏡檢精確計數(shù)較為科學。 方法是用篩絹將池內(nèi)的輪蟲全部收集起來 ， 并以過濾海水沖洗數(shù)遍 ， 然后轉(zhuǎn)移到另一備好海水的培養(yǎng)池內(nèi) 。 一般每日換水一次 ， 換水量為 50％ 。 但由于投喂藻液的稀釋作用 ， 很難作到高密度培養(yǎng) 。 充氣的作用一是補充氧氣 ，二是防止餌料下沉 。投喂前先在少量水中將冰凍的酵母塊融化，充分攪拌制成酵母懸液，然后施入培養(yǎng)輪蟲的水體。 雖然微藻是輪蟲最理想的餌料，但由于輪蟲的大量培養(yǎng)需要的餌料很多，通過培養(yǎng)微藻來繁殖輪蟲往往不能滿足生產(chǎn)的需要，必須尋找低成本的替代餌料。 投喂次數(shù)和投喂密度并沒有嚴格的要求， 既可一日投喂多次 ， 保持培養(yǎng)水體具有相對較低的餌料密度 ， 又可一次性投喂高密度的微藻餌料 ， 然后較長時間不再投喂 。 （ 1） 鹽度 褶皺臂尾輪蟲的適應鹽度范圍很廣 ， 在鹽度為 1— 250的水中均能生活 ， 比較喜好鹽度較低的海水 ， 最適鹽度范圍因品系不同而不同 。 室內(nèi)培養(yǎng)輪蟲對容器并沒有嚴格的要求 ， 因培養(yǎng)規(guī)模不同可選不同大小的容器 。需要時，將這種底泥從冰柜中取出，加入鹽度為 15— 25的海水，待輪蟲冬卵孵化后，用篩絹濾出輪蟲，再轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)水體中培養(yǎng)。 在溫暖的季節(jié) (水溫 15℃ 以上 )， 海邊的小水體 、 小水塘特別是鹽度較低的水體如鹽堿灘上暫時性的小水洼中 常有輪蟲生活 ， 用浮游生物網(wǎng)撈取浮游生物樣 ， 在解剖鏡下用吸管可比較容易地將輪蟲吸出 。也可投喂酵母培養(yǎng)輪蟲。可用水泥池培養(yǎng)大量培養(yǎng)小球藻，培養(yǎng)用水要消毒，施肥等，要給以一定的光照。 2. 蒙古裸腹溞 : 是從內(nèi)陸鹽水中采得，現(xiàn)已成功馴化于海水中正常生長繁殖。 一般在良好環(huán)境下 ， 可產(chǎn) 800 g/m3。 這種培養(yǎng)液培養(yǎng)的枝角類常紅色 ， 并產(chǎn)卵較多 ， 是一種良好的培養(yǎng)液 。 ㈥ 飼養(yǎng)容器：一般以水槽、指管或土池培養(yǎng)浮游動物主要采用靜水方式培養(yǎng)。 ② 培養(yǎng)的輪蟲類 、 枝角類和橈足類等 。含氧量都希望達到接近飽和的條件。 飼養(yǎng)水溫應與該種動物棲息場所的水溫相適應 。 飼養(yǎng)時 ， 為防止由于細菌繁殖而造成的水質(zhì)惡變 ， 最好是添加青霉素或鏈霉素之類的抗生素 。 浮游動物的培養(yǎng)與藻類培養(yǎng)一樣 ， 具有重要的意義 。 ⑷ 測定結(jié)果的表示法所得干重測定值要以單位培養(yǎng)液體積的干重表示。 細胞必須洗過以除去鹽分和其它污物 ， 通常是用稀釋的培養(yǎng)液或緩沖液 。 當藻類密度較低時 ， 光徑中的細胞數(shù)與測量到的光密度有一簡單的幾何關(guān)系 。 七 、 分析技術(shù) 1． 細胞計數(shù) — 顯微鏡法 培養(yǎng)物中的個體數(shù)測定 ， 是按照個體計數(shù)方法 ， 測定和估計培養(yǎng)物單位容積中的個體數(shù) 。 石灰一般是將其 1斤溶在 100～ 200斤水中 ， 制得飽和石灰水 ， 其用量是 6％ 。 使用的工具是沉淀器 。 采收的方法有： 1． 物理濃縮： ⑴ 離心法：國外使用最普遍 。 防污在藻類培養(yǎng)中很重要，對雜藻及細菌的防治主要采用石灰、漂白粉、硫酸銅等試劑。 攪拌使藻類培養(yǎng)不可少的一道工序 。 光照 、 溫度的調(diào)節(jié)視種類及季節(jié)而定 。某些藻種曾成功地做到了在液氮下長期保存。 再得到良好生長后 （ 1～ 2周 ） ， 培養(yǎng)液移到更低的光照條件 （ 540～ 1100lx） ， 以求緩慢生長及儲藏 。 3． 藻種的保存： 一旦藻種分離得到 ， 就要保存好以便在一定的時間內(nèi)供接種用 。 2． 接種： 再分離到單純藻群后，就可接種到培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，進而移養(yǎng)擴大培養(yǎng)。這樣經(jīng)幾次分離接種就得到較純的藻種。 在瓊膠培養(yǎng)基放在40℃ 以下的水浴鍋內(nèi) ， 開改用吸管注入混合藻液 ， 搖勻 ， 使之分散在培養(yǎng)基平面上 。 4． 趨向反應法：利用藻類的特殊趨向性 （ 如向光 、 向地等 ）不同而分離藻體 。 此法稀釋要使用較多容器分組培養(yǎng)，比較麻煩，但較易成功。 待冷凝后 ， 把五個培養(yǎng)皿放在受著漫射光窗口 ， 一直到出現(xiàn)藻群時為止。 用已消毒試管 5只 ， 在第一管盛蒸餾水 10mL， 第 2～ 5管都裝 5mL， 用高壓蒸汽消毒 ， 待冷卻后 ， 第 1管用滴管滴入混合藻液 1～ 2滴 ， 充分振蕩 ， 使均勻稀釋 。 該法可消除細菌 ， 并增加純粹分離的可能性 ， 至少可作為藻種平板培養(yǎng)的準備工作 。 決定培養(yǎng)哪一種藻類 ， 主要根據(jù)培養(yǎng)的目的要求 ， 及某一種類的生物學特征。 6H2O） 12mg 純水 1000mL 附 II： f/2微量元素溶液配方： 維生素 B12 維生素 H（ 生物素 ） 維生素 B1 100mg 純水 1000mL 四 、 藻種的分離培養(yǎng) 為了要進行某種藻類的科學研究活大量培養(yǎng) ， 有必要把某種藻類與其他生物分離 。 5H2O） 10mg 氯化錳 （ MnCl2 7H2O g Na2CO3 g Na2SiO3 g FeCL3 g 使用時按 1/ 1/ 1/10稀釋使用 。 土壤浸出液是用田園土壤按水與圖 2:1的比例 ， 攪勻浸泡后的上層清液 ， 用前煮一小時后鏡檢 ， 發(fā)現(xiàn)污染生物 ， 應再加溫消毒后使用 。H 2O） MgSO4 為增加微量元素的穩(wěn)定性 ， 常用檸檬酸鹽和 EDTA作為螯合劑 。 選用何種辦法主要是根據(jù)藻類生長的 pH最適點而定 。 藻類的生長主要依賴氮的可利用性 。 這些配方大多數(shù)是早先發(fā)表過的配方的修改方 ， 有些則從分析天然生境的水而得到 ， 有些是從生態(tài)角度考慮的 。 ⑶半開放循環(huán)培養(yǎng)：半開放培養(yǎng)是指培養(yǎng)容器或池、槽等場所雖仍敞開，但有些部分密閉，或用塑料布覆蓋。 培養(yǎng)物能循環(huán) ， 就可省卻攪拌工作 。 2． 開放式培養(yǎng)：將藻類培養(yǎng)于敞開的容器 （ 如水泥池 、 管道 、 木盆等 ）中 。 1． 密閉式培養(yǎng)：密閉式培養(yǎng)的目的是不使外界雜藻 、 菌類及其他有機體混入培養(yǎng)物中 。 因此 ， 有必要了解藻類培養(yǎng)的基礎知識 。 在漁業(yè)利用方面 ， 藻類培養(yǎng)主要是解決水產(chǎn)動物餌料 。第五篇 水產(chǎn)餌料生物的培養(yǎng) （增殖） 第一章 水產(chǎn)餌料生物的室內(nèi)培養(yǎng) 藻類培養(yǎng)方法簡介 藻類 ， 特別是單細胞藻類的營養(yǎng)豐富 ， 含有動物和人生長發(fā)育所必需的營養(yǎng)物質(zhì) 。 關(guān)于藻類培養(yǎng) ， 還有其他意義 ， 如利用培養(yǎng)固氮藍藻解決稻田氮素肥料；或從一些藻類提取藥物；或研究藻類生理 ， 以及用于太空食品等。 今后 ， 隨著養(yǎng)殖事業(yè)的發(fā)展 ， 對一些新品種的養(yǎng)殖以及解決某些品種幼魚的餌料 ， 必然涉及到藻類的培養(yǎng) 。 但可分為密閉式培養(yǎng)和開放式培養(yǎng)兩大類 。 這種培養(yǎng)方式 ， 成本高 ， 好控制 ，產(chǎn)量亦穩(wěn)定 。開放式可分如下幾種類型： ⑴ 開放循環(huán)培養(yǎng)：其特點式培養(yǎng)液借助循環(huán)水泵而不斷循環(huán)流動 。優(yōu)點是設備簡單 ， 無需動力 ， 水泵及大量的 CO2及通氣設備 。 培養(yǎng)液的配制及舉例 在實驗條件下培養(yǎng)微型藻類有多種培養(yǎng)基配方 。 c． 氮源：硝酸鹽 、 氨和尿素常用作配方中的氮源 ， 根據(jù)造中的性能和pH的最適點而定 。 d． 碳源：無機碳通常是用含 1～ 5％ CO2的空氣來供應的 ， 碳的另一種供應辦法是用碳酸氫鹽 。 然而 ， 這些微量元素的組分對藻類生長是否必須卻不能總能顯示 。H 2O+2（ CaSO4 水生 6號培養(yǎng)液中 ， 藻類呈草綠色 ， 色素不夠正常 ， 但生長繁殖迅速 。 H2O 1000mL Ca(NO3)2 g K2HPO4 g MgSO4 4H2O） 23mg 硫酸銅 （ CuSO4 5H2O） 乙二銨四乙酸鈉 （ Na2EDTA） 六水氯化鈷 （ CoCl2 純培養(yǎng)比較困難 ， 一般的分離培養(yǎng)往往只能做到單種培養(yǎng) 。 這樣將不同時間下從導管底的藻體取出 ， 經(jīng)鏡檢選定某種藻類最多的沉積物 ， 再加清水 ， 繼續(xù)離心 ， 如此反復就可得到比較單純的藻體 ， 在接種相應培養(yǎng)液中培養(yǎng) 。 2． 稀釋法：該法源于中野治房 （ 1933） 的方法 。 然后把五個已盛又消毒的瓊膠培養(yǎng)基培養(yǎng)皿 ， 加熱使之溶解 ， 待冷卻而尚未凝固時 ， 分別滴入五個試管的藻液各一滴 ， 用力振蕩 ， 使藻液充分混乳培養(yǎng)基中 。 此過程反復多次 ， 直至得到完全分離的純藻種群為止 。 此法較適用于能運動的藻類 。 5． 平板分離法：在培養(yǎng)液中加入戰(zhàn)培養(yǎng)液 ％ 的瓊膠 ， 加溶解后 ， 注入