基因工程的基本操作程序新(1)-全文預(yù)覽
【正文】 子 d、標記基因等 (三 )將目的基因?qū)胧荏w細胞 ? 常用的受體細胞： 動植物細胞、大腸桿菌、土壤農(nóng)桿菌、枯草桿菌等。 起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲基因在棉花體內(nèi)沒有表達。 PCR技術(shù) ? 原理： ? 前提： ? 原料 ? 方式 PCR擴增儀 DNA復(fù)制 一段已知目的基因的核苷酸序列 ：以 _____方式擴增， 即 ____（ n為擴增循環(huán)的次數(shù)） 指數(shù) 2n 模板 DNA； DNA引物；四種脫氧核苷酸；熱穩(wěn)定 DNA聚合酶（ Taq酶）；離子 如： Mg2+(激活劑 ) 利用 PCR技術(shù)擴增目的基因 ? 過程 變性、退火、延伸三步曲 ?變性： 加熱至 90～ 95℃雙鏈 DNA解鏈成為單鏈DNA ?退火： 冷卻至 55～ 60℃部分引物與模板的單鏈DNA的特定互補部位相配對和結(jié)合 ?延伸： 加熱至 70～ 75℃以目的基因為模板，合成互補的新 DNA鏈 變性 退火 延伸 PCR(多聚酶鏈式反應(yīng) ) PCR技術(shù)擴增與 DNA復(fù)制的比較 PCR技術(shù) DNA復(fù)制 相同點 原理 原料 條件 不同點 解旋方式 場所 酶 結(jié)果 堿基互補配對 四種脫氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高溫下變性解旋 解旋酶催化 體外復(fù)制 細胞核內(nèi) 熱穩(wěn)定的 DNA聚合酶 細胞內(nèi)的 DNA聚合酶 大量的 DNA片段 形成整個 DNA分子 目的基因的 mRNA 單鏈 DNA (cDNA） 雙鏈 DNA (即目的基因 ) 反轉(zhuǎn)錄 合成 1）反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使 RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補的單鏈 DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈 DNA，從而獲得所需的基因?；蚬こ痰幕静僮鞒绦? 目的基因的獲取 基因表達載體的構(gòu)建 將目的基因?qū)胧荏w細胞 目的基因的檢測與鑒定 一、目的基因的獲取 目的基因主要是指 ______________________ 編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因 獲取目的基因的常用方法 （ 1）從基因文庫中獲取 （ 2）利用 PCR技術(shù)擴增 （ 3）人工合成 (1)從基因文庫中獲取目的基因
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