【正文】 KI在數(shù)值上不可能等于IC50。11．對于一個符合米氏方程的酶，當[S]=3Km，[I]=2KI時（I為非競爭性抑制劑），則υ/Vmax的數(shù)值是多少（此處Vmax指[I]=0時對應的最大反應速率）？解答：利用非競爭性抑制劑的動力學方程計算：其中a = 1+[I]/Ki = 3，則所以，υ/Vmax＝。[S]/(mmol/L)v/ (mmolL1min1)[I] = 0[I] = 10 mmol/L2015105解答：（1）選擇合適的底物濃度（NAD+與乙醇）與緩沖體系，取一定體積的底物溶液（如1ml）加入石英比色杯，加入適量酶，迅速混合后，放入紫外/可見光分光光度計的樣品室內，測定反應體系在340 nm吸光度隨時間的變化曲線。9．解釋中間絡合物學說和穩(wěn)態(tài)理論，并推導修正后的米氏方程。8．簡述酶促反應酸堿催化與共價催化的分子機理。6．酶具有高催化效率的分子機理是什么？解答：酶具有高催化效率的分子機理是：酶分子的活性部位結合底物形成酶―底物復合物，在酶的幫助作用下（包括共價作用與非共價作用），底物進入特定的過渡態(tài)，由于形成此過渡態(tài)所需要的活化能遠小于非酶促反應所需要的活化能，因而反應能夠順利進行，形成產物并釋放出游離的酶，使其能夠參與其余底物的反應。5．經(jīng)過多年的探索，你終于從一噬熱菌中純化得到一種蛋白水解酶，可用作洗衣粉的添加劑。3．什么是誘導契合學說，該學說如何解釋酶的專一性？解答：“誘導契合”學說認為酶分子的結構并非與底物分子正好互補，而是具有一定的柔性，當酶分子與底物分子靠近時，酶受底物分子誘導，其構象發(fā)生有利于與底物結合的變化，酶與底物在此基礎上互補契合進行反應。離子和極性水溶性分子（包括許多藥物）被包裹在脂質體的水溶性的內部空間，負載有藥物的脂質體可以通過血液運輸，然后與細胞的質膜相融合將藥物釋放入細胞內部。（2） 膜蛋白：對物質代謝（酶蛋白）、物質傳送、細胞運動、信息的接受與傳遞、支持與保護均有重要意義。當磷脂分散于水相時，分子的疏水尾部傾向于聚集在一起，避開水相，而親水頭部暴露在水相，形成具有雙分子層結構的封閉囊泡，通稱為脂質體。此外大多數(shù)細胞中還有許多內膜系統(tǒng)，它們組成具有各種特定功能的亞細胞結構和細胞器如細胞核、線粒體、內質網(wǎng)、溶酶體、高爾基體、過氧化酶體等，在植物細胞中還有葉綠體。在哺乳動物組織中也檢測出了半乳糖基甘油酯，可能在神經(jīng)髓鞘形成中起作用。糖基部分含有唾液酸的鞘糖脂常稱神經(jīng)節(jié)苷脂，不溶于乙醚、丙酮，微溶于乙醇，易溶于氯仿和乙醇的混合液。中性鞘糖脂，是非極性的。膽固醇的氯仿溶液與醋酸酐和濃硫酸反應，產生藍綠色(Liebermann―Burchard反應)?；瘜W性質：膽固醇C3上的羥基易與高級脂肪酸(如軟脂酸、硬脂酸及油酸等)結合形成膽固醇酯。因此固醇與磷脂類化合物相似也屬于兩性分子。鞘磷脂為白色晶體，性質穩(wěn)定，不溶于丙酮和乙醚，而溶于熱乙醇中，具兩性解離性質。強堿水解，生成脂肪酸鹽、醇（X―OH）和磷酸甘油。物理性質：純的甘油磷脂是白色蠟狀固體，大多溶于含少量水的非極性溶劑中。存在于一切動物細胞中，以腦、神經(jīng)組織及腎上腺中含量特別豐富，其次為肝、腎、脾和皮膚及脂肪組織。它可能在神經(jīng)髓鞘形成中起作用。糖基部分含有唾液酸的鞘糖脂常稱神經(jīng)節(jié)苷脂，是最復雜的一類甘油鞘脂，由神經(jīng)酰胺與結構復雜的寡糖結合而成，是大腦灰質細胞膜的組分之一，也存在于脾、腎及其他器官中。①中性鞘糖脂：又稱腦苷脂，是由神經(jīng)酰胺的C1上的羥基與一單糖分子（半乳糖、葡萄糖等）以糖苷鍵結合而成，不含唾液酸成分。Ⅱ. 糖脂是指糖基通過其半縮醛羥基以糖苷鍵與脂質連接的化合物。b. 氧化作用：與三酰甘油相似，甘油磷脂中所含的不飽和脂肪酸在空氣中能被氧化生成過氧化物，最終形成黑色過氧化物的聚合物。3．概述磷脂、糖脂和固醇類的結構、性質和生物學作用解答：Ⅰ. 磷脂包括甘油磷脂和鞘磷脂兩類，它們主要參與細胞膜系統(tǒng)的組成，少量存在于其他部位。OH）等所氧化，因此含不飽和脂肪酸豐富的生物膜容易發(fā)生脂質過氧化作用，從而繼發(fā)引起膜蛋白氧化，嚴重影響膜的結構和功能。(2)脂肪酸的性質：①脂肪酸的物理性質取決于脂肪酸烴鏈的長度和不飽和程度。2．概述脂肪酸的結構和性質。脂肪是生物體貯存能量的主要形式，脂肪酸是生物體的重要代謝燃料，生物體表面的脂質有防止機械損傷和防止熱量散發(fā)的作用。解答：(1)脂質的結構特點：脂質是生物體內一大類不溶于水而易溶于非極性有機溶劑的有機化合物，大多數(shù)脂質的化學本質是脂肪酸和醇形成的酯及其衍生物。大量的研究已表明，各種錯綜復雜的生命現(xiàn)象的產生和疾病的形成過程均與糖蛋白的糖鏈有關。請指出不同血型（A型、B型、AB型、O型）X位的糖基名稱。被稱為抗原決定基團。（4）海藻糖含葡萄糖，α→1，1 糖苷鍵， 無還原性。因為它可以促進胃腸蠕動、促進消化和排便。纖維素雖然也是由D吡喃葡萄糖基構成，但它是以β(1,4)糖苷鍵連接的一種沒有分支的線性分子，它不卷曲成螺旋。當鏈長小于6個葡萄糖基時,不能形成一個螺旋圈,因而不能呈色。支鏈淀粉分子中除有α(1,4)糖苷鍵的糖鏈外,還有α(1,6)糖苷鍵連接的分支處,每一分支平均約含20～30個葡萄糖基,各分支也都是卷曲成螺旋。解答：透明質酸的兩個重復單位是由β―D―葡萄糖醛酸和N乙酰氨基葡萄糖通過β1,3糖苷鍵連接而成。(2) B、C、D均有醛基具還原性，可還原本尼地試劑。將此雙糖甲基化后再水解將得到2,3,4,6四氧甲基D吡喃葡糖糖和1,2,3,6四氧甲基D吡喃葡糖, 糖基上只有自由羥基才能被甲基化，說明β葡糖(1→4)葡糖構成的為纖維二糖。解答：略。單糖由于具有不對稱碳原子,可使平面偏振光的偏振面發(fā)生一定角度的旋轉，這種性質稱為旋光性。 4 糖類的結構與功能1．書寫D吡喃葡萄糖，L ()葡萄糖，D (+)吡喃葡萄糖的結構式，并說明D、 L；+；、各符號代表的意義。近年采用4種射波長不同的熒光物質分別標記4種不同的雙脫氧核苷酸，終止反應后4管反應物可在同一泳道電泳，用激光掃描收集電泳信號，經(jīng)計算機處理 可將序列直接打印出來。如上述在A處中斷的試管內，既有dATP，又有少量的ddATP，新合成的CCA鏈中的A如果是ddAMP,則鏈的合成中斷，如果是dAMP，則鏈仍可延伸。 在特定堿基處中斷新鏈合成最有效的辦法，是在上述4個試管中按一定比例分別加入一種相應的2162。反應體系中除單鏈模板外，還應包括合適的引物，4種脫氧核苷三磷酸和若干種適量的無機離子。解答：DNA的序列測定目前多采用Sanger提出的鏈終止法，和Gilbert提出的化學法。雜交技術和PCR技術的結合，使檢出含量極少的DNA成為可能。由于凝膠機械強度差，不適合于雜交過程中較高溫度和較長時間的處理，Southern 提出一種方法，將電泳分離的DNA片段從凝膠轉移到適當?shù)哪ぃㄈ缦跛崂w維素膜或尼龍膜）上，在進行雜交操作，稱Southern印跡法，或Southern雜交技術。直接用探針與菌落或組織細胞中的核酸雜交，因未改變核酸所在的位置，稱原位雜交技術。真核生物DNA的重復序列就是復生動力學的研究發(fā)現(xiàn)的，DNA的復雜度越小，復性速度越快。② 單鏈片段的濃度，單鏈片段濃度越高，隨機碰撞的頻率越高，復性速度越快。甲酰胺、尿素、甲醛等可破壞氫鍵，妨礙堿堆積，使Tm下降。③ 溶液的pH。② 溶液的離子強度。當DNA分子變性時，比旋光值就大大下降。DNA變性后的理化性質變化主要有：① 天然DNA分子的雙螺旋結構解鏈變成單鏈的無規(guī)則線團，生物學活性喪失；② 天然的線型DNA分子直徑與長度之比可達1∶10，其水溶液具有很大的黏度。其核心作用是既可以作為信息分子又可以作為功能分子發(fā)揮作用。⑥ 原核生物功能上密切相關的基因相互靠近，形成一個轉錄單位，稱操縱子，真核生物不存在操縱子。 ② 真核生物有多個呈線形的染色體；原核生物只有一條環(huán)形染色體。雖然兩種超螺旋都能釋放應力，但是負超螺旋時，如果發(fā)生DNA解鏈（即氫鏈斷開，部分雙螺旋分開）就能進一步釋放應力，而DNA轉錄和復制需要解鏈。7．有一個X噬菌體突變體的DNA長度是15μm，而正常X噬菌體DNA的長度為17μm，計算突變體DNA中丟失掉多少堿基對？解答：（17–15） 103/ = 103bp8．概述超螺旋DNA的生物學意義。6．如果人體有1014個細胞， 109個堿基對。② 互補鏈的[A]，[G]，[T]和[C]的情況。核苷酸。OH基，在堿作用下形成2162。雖然pH ，但pH過高對分離不利。如果蛋白質含有一條以上的肽鏈，則需先拆開成單個肽鏈再按上述原則確定其一級結構。（2）蛋白質的N端和C端的測定。（3）水解液中有在濃H2SO4條件下能與乙醛酸反應產生紫紅色產物的氨基酸，說明此氨基酸為Trp。解答：180/=50圈，50=27nm，該片段中含有50圈螺旋，其軸長為27nm。（4）溴化氰處理得 Ala，Arg，高絲氨酸內酯，Thr，2Val，和 Leu，Phe，當用Sanger試劑處理時，分別得DNPAla和DNPLeu。（1）酸水解得 Ala，Arg，Leu，Met，Phe，Thr，2Val。（5）在甲硫氨酸殘基羧基側水解肽鍵。5．下列試劑和酶常用于蛋白質化學的研究中：CNBr，異硫氰酸苯酯，丹磺酰氯，脲，6mol/L HCl β巰基乙醇，水合茚三酮，過甲酸，胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，其中哪一個最適合完成以下各項任務？（1）測定小肽的氨基酸序列。（2）不可逆沉淀：蛋白質分子內部結構發(fā)生重大改變，蛋白質變性而沉淀，不再能溶于原溶劑。如果在蛋白質溶液中加入適當?shù)脑噭?，破壞了蛋白質的水膜或中和了蛋白質的電荷，則蛋白質膠體溶液就不穩(wěn)定而出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。3．指出下面pH條件下，各蛋白質在電場中向哪個方向移動，即正極，負極，還是保持原點？（1）胃蛋白酶（pI ），在pH ；（2）血清清蛋白（pI ），在pH ；（3）α脂蛋白（pI ），在pH ；解答：（1）胃蛋白酶pI ＜環(huán)境pH ，帶負電荷，向正極移動；（2）血清清蛋白pI ＜環(huán)境pH ，帶負電荷，向正極移動；（3）α脂蛋白pI ＞環(huán)境pH ，帶正電荷，向負極移動；α脂蛋白pI ＜環(huán)境pH ，帶負電荷，向正極移動。被釋放的氨基酸數(shù)目與種類隨反應時間的而變化。肼解法：蛋白質或多肽與無水肼加熱發(fā)生肼解，反應中除C端氨基酸以游離形式存在外，其他氨基酸都轉變?yōu)橄鄳陌被狨ｋ禄?。在酸性有機溶劑中加熱時，N―末端的PTC―氨基酸發(fā)生環(huán)化，生成苯乙內酰硫脲的衍生物并從肽鏈上掉下來，除去N―末端氨基酸后剩下的肽鏈仍然是完整的。由于DNFB與氨基形成的鍵對酸水解遠比肽鍵穩(wěn)定，因此DNP―多肽經(jīng)酸水解后，只有N―末端氨基酸為黃色DNP―氨基酸衍生物，其余的都是游離氨基酸。氨基酸之間通過肽鍵相連。這些功能基團因氮、硫和磷有著可變的氧化數(shù)及氮和氧有著較強的電負性而與生命物質的許多關鍵作用密切相關。碳原子具有特殊的成鍵性質，即碳原子最外層的4個電子可使碳與自身形成共價單鍵、共價雙鍵和共價三鍵，碳還可與氮、氧和氫原子形成共價鍵。提示：生物化學是生命科學的基礎學科，注意從不同的角度，去理解并運用生物化學的知識。2．你已經(jīng)學過的課程中哪些內容與生物化學有關。碳、氫、氧、氮、磷、硫等6種是蛋白質、核酸、糖和脂的主要組成元素。氮、氧、硫、磷元素構成了生物分子碳骨架上的氨基（—NH2）、羥基（—OH）、羰基（）、羧基（—COOH）、巰基（—SH）、磷酸基（—PO4 ）等功能基團。構成蛋白質的構件是20種基本氨基酸。①―二硝基氟苯(DNFB或FDNB)法：多肽或蛋白質的游離末端氨基與―二硝基氟苯（―DNFB）反應（Sanger反應），生成DNP―多肽或DNP―蛋白質。③ 苯異硫氰酸脂（PITC或Edman降解）法：多肽或蛋白質的游離末端氨基與異硫氰酸苯酯（PITC）反應（Edman反應），生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白質。（2）C―末端測定法：常采用肼解法、還原法、羧肽酶法。③ 羧肽酶法：是一類肽鏈外切酶，專一的從肽鏈的C―末端開始逐個降解，釋放出游離的氨基酸。%%，問其最低相對分子質量是多少？解答：（1）血紅蛋白：（2）酶：因為亮氨酸和異亮氨酸的相對分子質量相等，所以亮氨酸和異亮氨酸的殘基數(shù)之比為：%:%=2:3，因此，該酶分子中至少含有2個亮氨酸，3個異亮氨酸。蛋白質變性后的表現(xiàn)：①?生物學活性消失；蛋白質由于帶有電荷和水膜，因此在水溶液中形成穩(wěn)定的膠體。如鹽析或低溫下的乙醇（或丙酮）短時間作用蛋白質。因此變性蛋白質并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質也未必都已經(jīng)變性。若有二硫鍵存在時還需加什么試劑？（4）在芳香族氨基酸殘基羧基側水解肽鍵。 6．由下列信息求八肽的序列。當以Sanger試劑處理時分別得到DNPAla和DNPVal。7．一個α螺旋片段含有180個氨基酸殘基，該片段中有多少圈螺旋？計算該α螺旋片段的軸長。（2）LiBH4還原后再水解，水解液中有氨基乙醇，證明肽的C端為Gly。解答：（1）測定蛋白質中氨基酸組成。（5）從有重疊結構的各個肽的序列中推斷出蛋白質中全部氨基酸排列順序。 3 核酸1．① 電泳分離四種核苷酸時，通常將緩沖液調到什么pH？此時它們是向哪極移動？移動的快慢順序如何? ② 將四種核苷酸吸附于陰離子交換柱上時，應將溶液調到什么pH？③ 如果用逐漸降低pH的洗脫液對陰離子交換樹脂上的四種核苷酸進行洗脫分離，其洗脫順序如何？為什么？ 解答：① 的緩沖液，在該pH時，這4種單核苷酸之間所帶負電荷差異較大，它們都向正極移動，但移動的速度不同，依次為：UMPGMPAMPCMP；② ，這樣可使核苷酸帶較多負電荷，利于吸附于陰離子交換樹脂柱。2．為什么DNA不易被堿水解，而RNA容易被堿水解?解答：因為RNA的核糖上有2162。核苷